樟芝對乳腺癌的作用.doc

樟芝對乳腺癌的作用乳腺癌是乳房腺上皮細胞在多種致癌因子作用下，發(fā)生 了基因突變，致使細胞增生失控。由于癌細胞的生物行為發(fā) 生了改變，呈現(xiàn)出無序、無限制的惡性增生。它的組織學(xué)表 現(xiàn)形式是大量的幼稚化的癌細胞無限增殖和無序狀地擁擠成 團，擠壓并侵蝕破壞周圍的正常組織，破壞乳房的正常組織 結(jié)構(gòu)。乳腺細胞發(fā)生突變后便喪失了正常細胞的特性，組織結(jié) 構(gòu)紊亂，細胞連接松散，癌細胞很容易脫落游離，隨血液或 淋巴液等播散全身，形成早期的遠程轉(zhuǎn)移，給乳腺癌的臨床 治愈增加了很大困難。全身重要臟器的轉(zhuǎn)移如肺轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn) 移、骨轉(zhuǎn)移等都將直接威脅人的生命，因此乳腺癌是嚴(yán)重危 及人體生命的惡性腫瘤。圖 18 乳腺癌乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，占惡性腫瘤發(fā)病率的 7-10%，是城市女性惡性腫瘤發(fā)病率的第一位。它的發(fā) 病常與遺傳有關(guān)，在 40-60 歲之間，絕經(jīng)期前后的婦女發(fā)病 率較高。樟芝提取液對乳腺癌包括三陰乳腺癌有良好的治療 效果。Hsin-Ling Yang 等（2006）證實了樟芝對 MCF-7 乳腺癌 細胞的生長具有抑制作用，并能導(dǎo)致 MCF-7 細胞的凋亡。用 濃度為 25-150mg/mL 樟芝發(fā)酵液處理 MCF-7 細胞，可見樟芝 發(fā)酵液可以使 MCF-7 細胞的活性喪失、染色體濃縮、細胞內(nèi) DNA 片段數(shù)量和 G1 期細胞數(shù)量的累積，從而促進 MCF-7 產(chǎn) 生對樟芝發(fā)酵液的濃度依賴性細胞凋亡，其現(xiàn)象通過顯微鏡 觀察 ( 如圖 19)。更進一步的研究發(fā)現(xiàn)，MCF-7 在凋亡過程中， 伴隨有細胞中細胞色素 c 釋放、caspase-3 活化和特定蛋白水 解酶聚合酶（ADP-ribose）裂解等過程的發(fā)生。同時，伴隨有 Bax 蛋白水平的減少，及微量的 Bcl-2 的減少。另外，研究 過程中發(fā)現(xiàn)，樟芝可以誘導(dǎo) MCF-7 細胞中劑量依賴性活性氧（ROS）的生成。整個研究數(shù)據(jù)顯示，樟芝可以對 MCF-7 細 胞的活性產(chǎn)生抑制，誘導(dǎo)其發(fā)生細胞凋亡，可用于抗癌藥物 的開發(fā)。圖 19 顯微鏡下樟芝處理后 MCF-7 細胞細胞分別用 0g/ml，50g/ml，100g/ml 和 150g/ml 的樟芝處理 24h。 每個實驗平行三次。You-Cheng Hseu 等（2007）研究發(fā)現(xiàn)樟芝可以對乳腺癌 細 胞 MDA-MB-231 中 的 環(huán) 氧 化 酶 -2（COX-2） 的 活 性 產(chǎn) 生 抑制作用，并可誘導(dǎo)乳腺癌細胞的凋亡。用不同濃度的樟芝 (40-240g/mL）處理 MDA-MB-231 細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樟芝可 對其產(chǎn)生劑量和時間依賴性凋亡作用，伴隨的現(xiàn)象有染色體 濃縮和體間 DNA 片段增加、細胞色素 c 釋放、caspase 3 活化 和特定蛋白水解酶聚合酶（ADP-ribose）裂解等。該研究證實， 樟芝誘導(dǎo) MDA-MB-231 乳腺癌細胞的凋亡過程中，細胞中的 COX-2 的活性受到了抑制。Hsin-Ling Yang 等（2011）經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)樟芝可以通過對 MAPK 信號通路的抑制實現(xiàn)對人乳腺癌細胞的轉(zhuǎn)移能力產(chǎn)生 抑制。侵染試驗和傷口愈合修復(fù)試驗證實樟芝發(fā)酵液可以顯 著地對 MDA-MB-231 細胞的入侵 / 遷移能力產(chǎn)生抑制作用， ( 如圖 20) 所示。圖 20 侵染試驗和傷口愈合修復(fù)試驗顯示樟芝對 MDA-MB-231 細胞侵潤和遷 移能力的抑制作用(A)MDA-MB-231 細胞用 80g/mL 的樟芝預(yù)處理 24h 后，進行膜下細胞入侵 試驗，并拍攝（放大 200 倍）；細胞的侵潤能力皆是相對于未經(jīng)樟芝處理 細胞的侵潤能力而言，未經(jīng)樟芝處理的細胞的浸染能力為 100%；細胞的侵 染力是由細胞計數(shù)板里細胞的數(shù)量決定的。(B) 細胞刮傷處理后用 80g/mL 的樟芝處理，用顯微鏡（放大 100 倍）拍 攝 0h 和 24h 時細胞修復(fù)情況，并計算封閉區(qū)細胞的數(shù)量。結(jié)果為三次平行 實驗的均值 SD，* 表示與對比值具有顯著差異 (p0.05)。Yerra Koteswara Rao 等（2011）證實從樟芝中分離得到的Antrocin 作用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌 MDA-MB-231 細胞（MMCs）， 可 通 過 作 為 Akt/mTOR 途 徑 的 選 擇 性 小 分 子 抑 制 劑 而 實 現(xiàn) 對 MDA-MB-231 細胞的抑制作用，作用示意圖 ( 如圖 21)。 PI3K/Akt/mTOR 是 一 種 公 認(rèn) 度 很 高 的 抗 癌 分 子 靶 點 途 徑。 Antrocin 對 MMCs 的增殖抑制作用很強，其效果可超過阿霉 素、順鉑，所對應(yīng)的 IC50 為 0.6M。而且可以防止 MMCs 癌 細胞的聚集，但對于正常非癌變 MCF10A 和 HS-68 細胞無任 何毒副作用。另外，Antrocin 可誘導(dǎo) MMCs 細胞發(fā)生劑量依 賴性細胞凋亡及細胞色素 c 和聚合酶（ADP-ribose）的釋放。 Antrocin 也引起了時間依賴性的抗凋亡蛋白表達的減少，包 括 Bcl-2、Bcl-xL 和存活素；而且，可以使細胞中 mRNA 的 數(shù)量減少；同時伴隨著前凋亡蛋白和胞質(zhì)細胞色素 c 的增加。 經(jīng)過分子機制研究發(fā)現(xiàn)，antrocin 可抑制 Akt 及其下影響因子 mTOR、GSK-3 和 NF-B 的磷酸化。更進一步的研究發(fā)現(xiàn)， 未經(jīng) antrocin 處理之前，由小分子干擾 RNA 導(dǎo)致的 Akt 磷酸 化的減少，可增強對細胞生長的抑制作用和凋亡促進作用。 基于以上研究，得出 antrocin 作為 Akt/mTOR 的雙重抑制劑， 在臨床治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌將有很大的應(yīng)用前景。第四章樟芝的抗癌作用171圖 21 Antrocin 通過 Akt/mTOR 途徑作用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌 MDA-MB-231 細胞（MMCs）而實現(xiàn)對 MDA-MB-231 細胞的抑制Chuan-Chen Lee 等（2012） 經(jīng) 研 究 發(fā) 現(xiàn) 樟 芝（AC） 對 HER-2/neu 超表達乳腺癌 gMDA-MB-453 和 BT-474 細胞可以 表現(xiàn)出顯著的細胞毒性。其中，BT-474 細胞經(jīng) AC 作用后的 亞細胞情況 ( 如圖 22) 所示。免疫分析顯示，AC 對 HER-2/ neu 癌細胞與細胞內(nèi)的酪氨酸磷酸化均可產(chǎn)生劑量依賴性抑 制。觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng) AC 處理后，細胞內(nèi)的活性氧（ROS）有 所增加，而抗氧化劑 N- 乙酰半胱氨酸（NAC）則可以有效的 阻止 AC 所誘導(dǎo)的 HER-2/neu 細胞減少和死亡，該實驗結(jié)果 表明 AC 所導(dǎo)致的 HER-2/neu 的細胞減少和死亡是通過誘導(dǎo) 細胞內(nèi) ROS 的產(chǎn)生實現(xiàn)的。另外，AC 可以使細胞中 cyclin D1、cyclin E 和 CDK4 的表達降低，以及伴隨有對 PI3K/Akt 和其下游影響因子 GSK-3 和 -catenin 表達的抑制。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，AC 在誘導(dǎo)細胞凋亡的過程中，細胞中的 G1期細胞大量積累、DNA 碎片增多、線粒體功能出現(xiàn)障礙、細 胞色素 c 釋放增多、caspase-3/-9 被活化、PARP 被降解及 Bcl- 2/Bax 表達失調(diào)等現(xiàn)象出現(xiàn)。群體集成實驗則顯示了 AC 可以 對 HER-2/neu 癌細胞的活性產(chǎn)生抑制作用。以上實驗數(shù)據(jù)表 明，AC 可以用于 HER-2/neu 超表達乳腺癌的一種治療手段。圖 22 HER-2/neu 用 AC