生化復(fù)習(xí)題 (1).doc

生化習(xí)題考試時(shí)間：6月11日（周三）晚上18：30-20：30 地點(diǎn)：禧強(qiáng)樓-203題型：名詞解釋10個(gè)，共20分。簡(jiǎn)答題6個(gè)，共30分。論述題5個(gè)，共50分。一、糖蛋白和蛋白聚糖1、糖鏈的一、二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)的概念（1） 一級(jí)結(jié)構(gòu)：?jiǎn)翁菤埢慕M成、排列順序、相鄰單糖殘基的連接方式、異頭物的構(gòu)型及糖鏈有無(wú)分支、分支的位置和長(zhǎng)短等。（2） 二級(jí)結(jié)構(gòu)：多糖骨架鏈間以氫鍵結(jié)合所形成的各種聚合體,關(guān)系到多糖分子中主鏈的構(gòu)象,不涉及側(cè)鏈的空間排布;（3） 三級(jí)結(jié)構(gòu)：多糖鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)的重復(fù)順序,由于糖殘基中的羥基、羧基、氨基以及硫酸基之間的非共價(jià)相互作用,導(dǎo)致有序的二級(jí)結(jié)構(gòu)空間形成有規(guī)則而粗大的構(gòu)象;（4） 四級(jí)結(jié)構(gòu)：多糖鏈間非共價(jià)鍵結(jié)合形成的聚集體。2、 糖蛋白、蛋白聚糖、O-連糖蛋白、N-連糖蛋白、糖組學(xué)等概念（1） 糖蛋白 Glycoproteins: 由寡糖鏈和多肽或蛋白質(zhì)以共價(jià)鍵連接而成的結(jié)合蛋白。糖含量1%80%。寡糖鏈不多于15個(gè)單糖殘基。（2） 蛋白聚糖 proteoglycan : 含大量糖胺聚糖并與多肽骨架連接的高分子物質(zhì)。糖含量95%（3） 連接糖蛋白：糖蛋白糖鏈與蛋白部分的絲/蘇氨酸殘基的羥基相連，稱為O-連接糖蛋白。（4） N-連接糖蛋白：糖蛋白的糖鏈與蛋白部分的Asn-X-Ser序列的天氡酰胺氮以共價(jià)鍵連接稱N-連接糖蛋白。（N-連接糖蛋白的糖基化位點(diǎn)為Asn-X-Ser/Thr）（5） 糖組學(xué)(糖蛋白) Glycomics ：涉及單個(gè)個(gè)體的全部糖蛋白結(jié)構(gòu)分析，確定編碼糖蛋白的基因和蛋白質(zhì)糖基化的機(jī)制。3、 糖蛋白中糖鏈的生物學(xué)功能分子間：細(xì)胞-細(xì)胞間識(shí)別、粘附和結(jié)合病原體, 趨靶于組織。分子內(nèi)：蛋白質(zhì)的正確折疊、細(xì)胞內(nèi)定位、生物活性、溶解度、抗原性、生物半壽期、蛋白酶敏感性等；介導(dǎo)專一的“識(shí)別”和“調(diào)控”生物過(guò)程。 糖鏈在糖蛋白新生肽鏈折疊和締合中的作用：1) 去糖基化的蛋白不能正確折疊維持亞基正常構(gòu)象； 1-抗胰蛋白酶(不能折疊) 皰疹口炎病毒（VSV）的G蛋白(不能形成正確二硫鍵) 流感病毒紅細(xì)胞凝集素（HA,一種糖蛋白）用糖鏈合成抑制劑衣霉素后，肽鏈部分正常合成，糖鏈部分不能合成，糖蛋白不能正常折疊，不能形成三聚體，不能被分泌到胞外。 2) 寡聚蛋白中的糖鏈能影響亞基的締合亞基間通過(guò)糖鏈相互識(shí)別而發(fā)生締合。運(yùn)鐵蛋白受體二聚體跨膜糖蛋白，6條糖鏈，Asn251去糖基化，不能形成二聚體，影響受體的轉(zhuǎn)運(yùn)和功能,而且在細(xì)胞內(nèi)迅速被蛋白酶水解。糖鏈影響糖蛋白的穩(wěn)定性1) 極性糖鏈有助于蛋白質(zhì)的溶解2) 真核細(xì)胞中表達(dá)的糖蛋白在原核細(xì)胞內(nèi)聚集成包涵體糖鏈對(duì)糖蛋白分揀、投送和分泌的作用1) 去糖鏈的免疫球蛋白不能分泌到胞外；2) N-聚糖中的甘露糖-6-磷酸結(jié)構(gòu)是糖蛋白分揀到溶酶體中的標(biāo)志，用衣霉素處理細(xì)胞阻止N-糖化，可使很多定位于細(xì)胞膜上的糖蛋白減少。糖鏈參與分子識(shí)別和細(xì)胞間識(shí)別（識(shí)別功能）1） 糖鏈與精卵識(shí)別 透明帶糖蛋白ZP-3上的O-GalNAc卵子凝集素受體精子 花粉表面糖蛋白柱頭表面受體2） 糖鏈和細(xì)胞粘著 多細(xì)胞生物中細(xì)胞有相互識(shí)別聚集成細(xì)胞群的能力細(xì)胞粘著 細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)：糖蛋白（層粘連蛋白 laminin、膠原Collagen、纖粘連蛋白 Fibronectin ）、氨基聚糖及蛋白聚糖 膜內(nèi)在蛋白：整聯(lián)蛋白、鈣粘著蛋白等3） 糖鏈與血漿中老蛋白的清除(5)糖鏈與糖蛋白的生物活性1） 糖鏈與酶活性-葡萄糖苷酶去糖鏈影響； 酵母羧肽酶去糖鏈無(wú)影響2） 糖鏈與激素活性腺垂體促激素類：促卵泡激素、促黃體激素、促甲狀腺激素等糖鏈末端結(jié)構(gòu)不同，與受體親和力不同。腎臟紅細(xì)胞生成素（4條N糖鏈，二、三、四天線）四天線越多，體內(nèi)活性越高。3） 糖鏈與IgG活性IgG缺外鏈Gal自身抗原被免疫系統(tǒng)識(shí)別產(chǎn)生自身抗體自身抗體與缺外鏈Gal 的IgG生成免疫復(fù)合物關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥(6)糖類和血型物質(zhì)(7)毒素受體功能、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸功能、開關(guān)與調(diào)節(jié)功能4、 蛋白聚糖中常見的糖胺聚糖的種類(糖胺聚糖：由己糖醛酸或半乳糖與氨基己糖構(gòu)成的二糖單位重復(fù)幾十到幾百次組成的線性糖鏈。)體內(nèi)重要的糖胺聚糖（6種）：1 透明質(zhì)酸(hyaluronic acid, HA)2 硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)3 硫酸皮膚素CS(dermatin sulfate, DS)4 硫酸角質(zhì)素(keratan sulfate, KS)5 硫酸乙酰肝素/肝素(heparan sulfate, HS/heparin, Hep)5、 蛋白聚糖的生物學(xué)功能構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)：在基質(zhì)中蛋白聚糖和彈性蛋白、膠原蛋白以特殊方式連接，構(gòu)成基質(zhì)的特殊結(jié)構(gòu)。這與細(xì)胞的粘附、遷移、增殖和分化等有關(guān)。其它功能：抗凝血（肝素）參與細(xì)胞識(shí)別結(jié)合與分化（細(xì)胞表面的硫酸素）維持軟骨機(jī)械性能（硫酸軟骨素）等二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)1、 蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能1 酶的催化功能2 結(jié)構(gòu)功能：collagen （膠原蛋白）、elastin （彈性蛋白）、keratin （角蛋白）、fibroin （蠶絲蛋白）、proteoglycan （蛋白聚糖）3 運(yùn)輸功能：Transport within or between different cells or tissues（不同細(xì)胞或組織之內(nèi)/之間的運(yùn)輸）Transport into or out of cells（運(yùn)輸進(jìn)入或出去細(xì)胞）4 儲(chǔ)藏功能：ovalbumin（卵清白蛋白）、casein（酪蛋白）、zein（玉米蛋白）、ferritin（鐵蛋白）5 actin（肌動(dòng)蛋白）、myosin（肌球蛋白）、tubulin（微管蛋白）。（肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白是包含在肌肉絲狀蛋白分子。在鈣離子（底部）的存在，肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白會(huì)滑過(guò)對(duì)方，形成跨橋梁，從而收縮肌肉。）6 調(diào)節(jié)功能：To regulate the ability of other proteins（調(diào)節(jié)其他蛋白質(zhì)的活性） 激素：insulin ( 胰島素) 、somatotropin (生長(zhǎng)激素)、thyrotropin (促甲狀腺素）To regulate the gene expression（調(diào)節(jié)基因表達(dá)）Positively（正調(diào)節(jié)）：AP1 Negatively（負(fù)調(diào)節(jié)）：NF1、 lac repressor (乳糖抑制體) 防御功能：脊椎動(dòng)物利用抗體防御（也就是中和抗原） 2、 蛋白質(zhì)各級(jí)空間結(jié)構(gòu)的概念及這些空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系一級(jí)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)多肽鏈的氨基酸殘基的排列順序。二級(jí)結(jié)構(gòu)：指肽鏈的主鏈在空間的排列，或規(guī)則的幾何走向、旋轉(zhuǎn)及折疊。（轉(zhuǎn)角、折疊片 、螺旋、自由回轉(zhuǎn) ）。超二級(jí)結(jié)構(gòu)(supersecondary structure)：是指蛋白質(zhì)若干相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元組合在一起，彼此相互作用，形成有規(guī)則的，在空間上能辨認(rèn)的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合體。（，）結(jié)構(gòu)域（domain）：多肽鏈在二級(jí)結(jié)構(gòu)或超二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上形成三級(jí)結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)，它是相對(duì)獨(dú)立的緊密球狀實(shí)體，具有部分生物功能的結(jié)構(gòu)。反平行螺旋結(jié)構(gòu)域反平行折疊片結(jié)構(gòu)域平行或混合型折疊片結(jié)構(gòu)域富含金屬或二硫鍵結(jié)構(gòu)域。三級(jí)結(jié)構(gòu)(Tertiary Structure)：在二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，肽鏈不同區(qū)段的側(cè)鏈基團(tuán)相互作用,在空間進(jìn)一步盤繞、折疊形成包括主鏈和側(cè)鏈構(gòu)象在內(nèi)的三維結(jié)構(gòu)。四級(jí)結(jié)構(gòu)：一些特定三級(jí)結(jié)構(gòu)的肽鏈通過(guò)非共價(jià)鍵而形成的大分子體系的組合方式。3、 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定的基本步驟1 測(cè)定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目： 根據(jù)蛋白質(zhì)N-端或C-端殘基的摩爾數(shù)和蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量確定蛋白質(zhì)分子中的多肽鏈數(shù)目。 單體蛋白質(zhì)只含一條多肽鏈，則蛋白質(zhì)的摩爾數(shù)與末端殘基的摩爾數(shù)相等； 如果蛋白質(zhì)分子是由多條多肽鏈組成，則末端殘基的摩爾數(shù)是蛋白質(zhì)的摩爾數(shù)的倍數(shù)。2 肽鏈的拆分： 非共價(jià)鍵連接：尿素或鹽酸胍處理 通過(guò)-S-S-交聯(lián)：尿素或鹽酸胍存在下，過(guò)量的-巰基乙醇處理3 測(cè)定每條多肽鏈中氨基酸組成： 水解（酸，堿水解，特殊基團(tuán)的保護(hù)）， 衍生（熒光胺, 茚三酮，PTC-aa法等）， 色譜（離子交換層析，HPLC,氣相層析） 4 分析多肽鏈的N-末端和C-末端：建立兩個(gè)重要的氨基酸序列參考點(diǎn)。1） N末端分析：sanger反應(yīng)；丹磺酰氯（DNS）法；Edman反應(yīng)，(PITC法)N端標(biāo)記； 雙標(biāo)記法（DABITC/PITC）易于操作，批量處理4-N,N/-二甲氨基偶氮苯-4-異硫氰酸苯酯/異硫氰酸苯酯2） C末端分析： 肼解法 還原法羧肽酶法5 肽鏈的部分降解和肽段的分離 降解：酶解法、化學(xué)法 肽段分離：凝膠過(guò)濾、凝膠電泳、離子交換柱層析、HPLC等測(cè)定每個(gè)肽段的氨基酸順序：改進(jìn)Edman降解法，用熒光基團(tuán)或有色基團(tuán)標(biāo)記PITC，提高測(cè)定靈敏度（DABITC/PITC）質(zhì)譜法(mass spectrography)：氣質(zhì)聯(lián)用（GCMS），液質(zhì)聯(lián)用（HPLC和質(zhì)譜）確定肽段在多肽鏈中的次序：利用兩套或多套肽段的氨基酸順序彼此間的交錯(cuò)重疊，拼湊出整條多肽鏈的氨基酸順序(片段重疊法)。確定原多肽鏈中二硫鍵的位置4、 獲得蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的方法有哪些，各有何優(yōu)缺點(diǎn)1 質(zhì)譜分析方式 (分析2D得到的蛋白) 缺點(diǎn)：蛋白的基團(tuán)越大，質(zhì)譜檢測(cè)的準(zhǔn)確率越低。因此，在質(zhì)譜檢測(cè)之前，須將蛋白消化成小分子的多肽，以提高質(zhì)譜檢測(cè)的準(zhǔn)確率。質(zhì)譜測(cè)序現(xiàn)在仍很難被應(yīng)用于未知蛋白的序列測(cè)定。優(yōu)點(diǎn)：可用于蛋白質(zhì)的純度鑒定；分子量測(cè)定；肽鏈氨基酸排序；肽（質(zhì)譜）分析；二硫鍵數(shù)目和位置、乙?；⑻腔?、磷酸化以及非共價(jià)結(jié)合等。2 蛋白質(zhì)N-末端序列 (Edman降解 ) 確定新的蛋白質(zhì)，通過(guò)DNA重組技術(shù)構(gòu)建寡核苷酸探針；根據(jù)免疫學(xué)機(jī)理制備抗多肽的抗體 N末端15個(gè)序列的測(cè)定，很大程度上排除了蛋白質(zhì)混淆的可能性 3 分子克隆技術(shù)和快速DNA序列分析手段 測(cè)序速度較慢(50AA/天)；樣品用量較大(nmol級(jí)或幾十pmol級(jí))；對(duì)樣品純度要求很高；對(duì)于修飾氨基酸殘基往往會(huì)錯(cuò)誤識(shí)別，而對(duì)末端保護(hù)的肽鏈則無(wú)法測(cè)序.5、 測(cè)定蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)的方法有哪些？1 X-衍射技（80-85%）：X-射線在晶體上散射2 核磁共振技術(shù)（NMR）（15-20%）3 電鏡三維重構(gòu)、各種光譜技術(shù)4 顯微技術(shù)和計(jì)算機(jī)模擬6、 多肽鏈折疊的空間限制因素 一個(gè)具有生物活性的蛋白質(zhì)多肽鏈在一定條件下往往只有一種或很少的幾種構(gòu)象。肽鍵帶有雙鍵的性質(zhì)，主鏈上1/3的鍵不能自由旋轉(zhuǎn)。不是任意二面角（，）所決定的肽鏈構(gòu)象都是立體化學(xué)所允許的。二個(gè)肽平面旋轉(zhuǎn)時(shí)受到-C原子上側(cè)鏈R基空間位阻（大小、親水性、電荷相吸或排斥等）的影響。7、 球狀蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)球狀蛋白質(zhì)分子含多種二級(jí)結(jié)構(gòu)元件球狀蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)具有明顯的折疊層次球狀蛋白質(zhì)分子是緊密球狀或橢球狀實(shí)體疏水側(cè)鏈分子內(nèi)部，親水側(cè)鏈分子表面（水溶性蛋白）球狀蛋白質(zhì)分子表面有一個(gè)空穴（裂溝、凹槽），常為活性部位8、 脂類錨定蛋白的特點(diǎn)和分類1 特點(diǎn)： 許多情況下通過(guò)脂錨鉤與膜連接來(lái)調(diào)節(jié)蛋白活性 具有瞬時(shí)性，能可逆地與蛋白質(zhì)連接和脫離。為蛋白質(zhì)對(duì)膜的親和性提供了一個(gè) 轉(zhuǎn)換裝置，參與膜外信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo) 非跨膜的整合蛋白：脂類錨定蛋白共價(jià)結(jié)合于疏水碳鏈2 分類：（共價(jià)結(jié)合的疏水碳鏈） N-豆蔻酰錨定蛋白(cAMP依賴蛋白、G蛋白) 硫醚異戊二酰錨定蛋白（Rho蛋白） S-脂肪?；^定蛋白（病毒表面糖蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體） GPI（糖基磷脂酰肌醇）錨定蛋白三、蛋白質(zhì)分離純化1、 蛋白質(zhì)分離純化的基本原則根據(jù)蛋白質(zhì)的溶解性、分子大小、電荷、特殊的親和力的差異進(jìn)行分離純化。1 利用溶解度差別分離 鹽析常用的鹽為硫酸銨(溫度、pH、蛋白質(zhì)濃度)：高濃度的中性鹽可以中和蛋白質(zhì)表面電荷、奪取蛋白質(zhì)周圍的水化膜，破壞蛋白質(zhì)在水溶液中的穩(wěn)定性，從而將蛋白質(zhì)從溶液中析出。 低溫有機(jī)溶劑沉淀法(甲醇、乙醇、丙酮) 等電點(diǎn)沉淀法(適用于在等電點(diǎn)pH穩(wěn)定的蛋白質(zhì))2 根據(jù)分子大小不同分離 透析法Dialysis：蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜，而使其與小分子化合物（無(wú)機(jī)鹽、單糖、雙糖、氨基酸、小肽以及表面活性劑等）分離。 超過(guò)濾法：是利用壓力或離心力，強(qiáng)行使水和其他小分子溶質(zhì)通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)留在半透膜上，以達(dá)到濃縮和脫鹽的目的 凝膠過(guò)濾法 密度梯度離心法（density gradient）3 利用蛋白質(zhì)所帶電荷分離 離子交換層析：利用物質(zhì)的電荷與層析載體（離子交換劑）電荷之間的相互作用而達(dá)到分離純化的目的，屬于吸附層析。 電泳技術(shù)：帶電粒子在電場(chǎng)中向與自身電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。 （聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、等電聚焦、雙向電泳）親和層析法：利用生物大分子和其他物質(zhì)(配基)進(jìn)行特異性又可逆的結(jié)合這一性質(zhì)，對(duì)這些生物大分子物質(zhì)進(jìn)行層析分離的方法。疏水層析和反向?qū)游觯菏杷畬游觯旱鞍踪|(zhì)具有親水與疏水兩重性，如果在層析基質(zhì)上接上疏水的基團(tuán)，就能在一定條件下與某些蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)相互作用，使之吸附，而達(dá)到分離純化的目的。反向?qū)游?反相色譜,reverse phase chromatography)是液相色譜分析中最常用的技術(shù)。 四、泛素介導(dǎo)的蛋白降解1、泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解過(guò)程如何進(jìn)行？需要哪些物質(zhì)的參與，它們各自的作用是什么泛素的活化：泛素甘氨酸端的羧基連接到泛素活化酶E1的巰基，這個(gè)步驟需要以ATP 作為能量，最終形成一個(gè)泛素和泛素活化酶E1之間的硫酯鍵。E1將活化后的泛素通過(guò)交酯化過(guò)程交給泛素結(jié)合酶E2。 泛素連接酶E3將結(jié)合E2的泛素連接到目標(biāo)蛋白質(zhì)上并釋放E2，形成特定的泛素化的蛋白質(zhì)。4 泛素化的蛋白質(zhì)被特定的蛋白酶體識(shí)別并結(jié)合，最終在蛋白酶的催化下蛋白質(zhì)分解為短肽或氨基酸。需要的物質(zhì)及其作用：E1泛素激活酶：E2泛素結(jié)合酶：E3泛素連接酶：在底物的特異性選擇降解過(guò)程中作最為關(guān)鍵成員。HECT結(jié)構(gòu)域能接受從E2轉(zhuǎn)移而來(lái)的泛素分子形成E3-Ub復(fù)合物。環(huán)指結(jié)構(gòu)域它們起著將底物蛋白與E2-Ub靠近的作用，從而使得E2-Ub復(fù)合物上的泛素能高效地轉(zhuǎn)移到底物蛋白上。DUB脫泛素酶：泛素C-末端水解酶-多聚泛素基因表達(dá)產(chǎn)物的C-末端額外短肽的去除，以及泛素延伸蛋白中泛素單體與核糖體蛋白的分離。泛素特異性加工酶-從泛素上除去蛋白。五、蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性及蛋白質(zhì)折疊1、蛋白質(zhì)變性的概念、變性蛋白的特點(diǎn)、變性的化學(xué)本質(zhì)蛋白質(zhì)變性的概念：由于外界因素的作用，使天然蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象發(fā)生了異常變化，從而導(dǎo)致生物活性的喪失以及物理、化學(xué)性質(zhì)的異常變化 ，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性(denaturation)。變性蛋白的特點(diǎn)：生物活性喪失抗原性改變理化性質(zhì)改變：溶解度下降（沉淀）、結(jié)晶能力喪失、特性粘度增加、擴(kuò)散速度下降等生化性質(zhì)改變：易被蛋白質(zhì)水解。變性的化學(xué)本質(zhì)：天然蛋白質(zhì)分子從緊密有序的結(jié)構(gòu)松散無(wú)序結(jié)構(gòu)的過(guò)程。涉及構(gòu)象變化，二硫鍵的斷裂及側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾2、蛋白質(zhì)折疊的學(xué)說(shuō)1 經(jīng)典的蛋白質(zhì)折疊自組裝學(xué)說(shuō)由Anfinsen等根據(jù)對(duì)RNase復(fù)性研究的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)提出來(lái)的經(jīng)典的“熱力學(xué)假說(shuō)”認(rèn)為，天然蛋白質(zhì)多肽鏈采取的構(gòu)象是在一定環(huán)境條件下熱力學(xué)上最穩(wěn)定的結(jié)果，采取天然構(gòu)象的多肽鏈和它所處的一定環(huán)境條件（如溶液組分、PH、溫度、離子強(qiáng)度等）整個(gè)系統(tǒng)的總自由能最低，所以處于變性狀態(tài)的多肽鏈在一定的環(huán)境條件下能夠自發(fā)折疊成天然構(gòu)象。許多蛋白（特別是一些小蛋白）在體外可以可逆的進(jìn)行變性、復(fù)性，使“熱力學(xué)假說(shuō)”得到了廣泛的支持。2 Ellis的“輔助性組裝學(xué)說(shuō)”體內(nèi)蛋白質(zhì)的折疊往往需要有其他輔助因子的參與，并伴隨有ATP的水解。因此，Ellis于1987年提出了蛋白質(zhì)折疊的“輔助性組裝學(xué)說(shuō)”。這表明蛋白質(zhì)的折疊不僅僅是一個(gè)熱力學(xué)的過(guò)程，顯然也受到動(dòng)力學(xué)的控制?！拜o助性組裝學(xué)說(shuō)”認(rèn)為，蛋白質(zhì)多肽鏈的正確折疊和組裝并非都能自發(fā)完成，在相當(dāng)多的情況下是需要其他蛋白質(zhì)分子的幫助，這類幫助蛋白包括分子伴侶與折疊酶。新的觀點(diǎn)在實(shí)質(zhì)上并不和Anfinsen理論相矛盾，屬于蛋白質(zhì)折疊途徑或折疊的識(shí)別和組裝問(wèn)題上的認(rèn)識(shí)的完善，為揭示生理或病理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)的折疊機(jī)理提供了新的研究思路，因而具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。3、蛋白質(zhì)折疊需要哪些助折疊蛋白，它們各自的作用是什么輔助蛋白：1 分子伴侶（molecular chaperons）：一類相互之間沒有關(guān)系的蛋白質(zhì)，他們的功能是幫助含多肽結(jié)構(gòu)的其他物質(zhì)在體內(nèi)進(jìn)行正確的非共價(jià)的組裝，但不是組裝完成的結(jié)構(gòu)在發(fā)揮其正常的生物功能的組成部分。2 折疊酶（Foldase）： 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（protein disulfide isomerase PDI）：催化巰基的氧化、二硫鍵還原、二硫鍵之間的交換、脯氨酸羥化酶的亞基、甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白復(fù)合物的小亞基、糖基化位點(diǎn)結(jié)合蛋白。 肽基脯氨酸順?lè)串悩?gòu)酶（peptidyl proly cistrans isomerase PPI ）：催化脯氨酸亞氨基的肽鍵異構(gòu)化為順式。六、酶1、酶的概念、酶活性部分的概念、酶活性部位的特點(diǎn)、酶活性部位的研究方法酶的概念：酶是一類具有高效率、高度專一性、活性可調(diào)節(jié)的高分子生物催化劑。酶活性部分的概念：即活性中心。是酶分子的一小部分，是酶分子中與底物結(jié)合并催化反應(yīng)的場(chǎng)所。酶活性部位的特點(diǎn)：總體積很小，占整個(gè)酶分子體積的1%-2%?；钚圆课皇且粋€(gè)小的空間區(qū)域?；钚圆课慌c底物的形狀不是正好互補(bǔ)?；钚圆课晃挥诿阜肿颖砻娴囊粋€(gè)裂縫(crevice) 。E與S結(jié)合成ES主要靠次級(jí)鍵。酶活性部位具有柔性或可運(yùn)動(dòng)性。酶活性部位的研究方法：化學(xué)修飾法X-射線衍射法動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定法基因定點(diǎn)突變法等2、酶降低活化自由能的因素1 鄰近和定向效應(yīng)2 酶使底物分子中的敏感鍵產(chǎn)生“變形”（或張力）3 共價(jià)催化形成共價(jià)中間物4 酸堿催化5 活性中心部位的疏水環(huán)境效應(yīng)3、米氏方程及Km、Kcat的含義米氏常數(shù)Km：酶促反應(yīng)速度n為最大酶促反應(yīng)速度值一半時(shí)的底物濃度。v = 1/2 Vmax, Km = SKcat轉(zhuǎn)換率：表示酶被底物飽和時(shí)每個(gè)酶分子在單位時(shí)間內(nèi)能使底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的最大分子數(shù)催化常數(shù)。4、酶抑制作用的分類及相關(guān)的概念不可逆抑制作用：1）專一不可逆抑制：作用于酶的一類或幾類基團(tuán)，這些基團(tuán)中包含了必需基團(tuán)，作用后引起酶的失活。2）非專一不可逆抑制：a）Ks型不可逆抑制劑親和標(biāo)記試劑 具有和底物相似的基團(tuán)，可以和相應(yīng)酶的結(jié)合基團(tuán)結(jié)合，同時(shí)還帶有一個(gè)活潑的基團(tuán)，可以和酶活性部位的其他功能基團(tuán)起反應(yīng)，對(duì)后者進(jìn)行化學(xué)修飾，從而抑制酶的活性。b）kcat型不可逆抑制劑被酶激活的不可逆抑制劑（酶的自殺性底物）I 以潛伏態(tài)存在，在無(wú)酶的情況下不反應(yīng)必需通過(guò)它的靶酶專一被激活反應(yīng)中，酶激活了這種無(wú)活力的潛伏態(tài)不可逆抑制劑，自身的活力則完全喪失自殺性底物可逆抑制作用：1）竟?fàn)幮砸种疲阂种苿┑幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)類似過(guò)渡態(tài)底物，則對(duì)酶的親和力就會(huì)遠(yuǎn)大于底物，從而引起酶的強(qiáng)烈抑制。2）非竟?fàn)幮砸种疲悍歉?jìng)爭(zhēng)性抑制劑存在時(shí)，Vmax值減小，Km值不變。3） 反竟?fàn)幮砸种疲篍只有與S結(jié)合后才能與I結(jié)合，形成不能分解的ESI三元中間產(chǎn)物，導(dǎo)致酶促反應(yīng)被抑制I的存在加強(qiáng)了E、S的結(jié)合； 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑存在時(shí)，Km和Vmax值均減小5、酶活性的調(diào)節(jié)方式別構(gòu)調(diào)節(jié)酶原激活可逆共價(jià)修飾調(diào)節(jié)七、RNA研究1、 RNA的分類及相應(yīng)的概念RNA的分類：1 編碼蛋白mRNA（只包括mRNA的編碼區(qū)）2 非編碼蛋白R(shí)NA（持家RNA調(diào)控RNA）持家RNA：在生命活動(dòng)過(guò)程中，長(zhǎng)期恒定表達(dá)，其功能是維持基本生命所必需的。調(diào)控RNA：表達(dá)有時(shí)空特異性，常常是短暫表達(dá)；在生物的不同層面上調(diào)控：如不同的發(fā)育分化階段、不同性別、不同組織與細(xì)胞系、不同生理狀態(tài)調(diào)控；常與生物的適應(yīng)性反應(yīng)及應(yīng)急性反應(yīng)有關(guān)。2、 RNA的功能RNA在遺傳信息的翻譯中起著決定的作用：mRNA：信使(messenger)和模板(template) tRNA：轉(zhuǎn)運(yùn)(transfer)和信息轉(zhuǎn)換(adaptor)rRNA ：裝配 (assembler)和催化(catalyst)RNA具有重要的催化功能（核酶）：.分子內(nèi)催化：RNA合成后的加工（自我切割、拼接、環(huán)化） .分子間催化(核酶復(fù)合物) ：核糖核蛋白復(fù)合物R