《熒光光度法測定硫酸奎尼丁含量》實(shí)驗(yàn)報(bào)告.doc

重慶醫(yī)科大學(xué) 生物分析化學(xué) 實(shí)驗(yàn)報(bào)告年級(jí)： 院系：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn) 班級(jí)： 組別：4 姓名： 學(xué)號(hào)： 實(shí)驗(yàn)名稱：熒光光度法測定硫酸奎尼丁含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1.掌握熒光分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)及操作方法 ； 2.了解熒光產(chǎn)生及測量的過程 ； 3.掌握熒光分光法的定量分析方法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法） ； 4.掌握影響熒光強(qiáng)度的因素； 實(shí)驗(yàn)原理：奎尼丁是抗瘧疾奎寧的右旋體，屬于生物堿類抗心律失常藥物。主要用于陣發(fā)性心動(dòng)過速，心房顫動(dòng)，早搏；預(yù)防室性心動(dòng)過速及對(duì)對(duì)房室結(jié)折返性心動(dòng)過速；還可預(yù)防有癥狀的室上性和室性早搏?？岫〉挠行а帩舛仁?-6mg/L，8mg/L以上可發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。 硫酸奎尼丁的分子式為，分子量為782.96，分子結(jié)構(gòu)如圖所示： 其結(jié)構(gòu)分為喹啉環(huán)和喹啉堿兩個(gè)部分，根據(jù)其喹啉環(huán)結(jié)構(gòu)部分具有產(chǎn)生熒光的特性，采用熒光光度計(jì)測量其熒光強(qiáng)度，可實(shí)現(xiàn)硫酸奎尼丁含量的測定。實(shí)驗(yàn)儀器與試劑： F93型熒光光度計(jì)； 100ug/ml的硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 0.050mol/L硫酸溶液； 硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液 50ml容量瓶6個(gè)； 5ml移液管2只 1cm石英熒光比色皿1個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟:1. 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液配制： 按照下表配制硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液編號(hào)123456（硫酸奎尼丁樣品溶液）100ug/ml硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中用0.050mol/L硫酸溶液稀釋至刻度并搖勻系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度2ug/ml4ug/ml6ug/ml8ug/ml10ug/ml -2. 熒光光譜的繪制 將熒光波長調(diào)節(jié)為440nm，用1cm石英熒光比色皿，以5號(hào)溶液作為測定溶液，置于熒光光度計(jì)樣品室中，蓋上樣品室蓋，調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)靈敏度，使其熒光強(qiáng)度讀數(shù)在60-70左右，然后按照下表依次調(diào)節(jié)熒光波長，測定不同熒光波長下5號(hào)溶液的熒光強(qiáng)度；在坐標(biāo)紙上以測定的熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，熒光波長為橫坐標(biāo)，繪制熒光光譜，并在熒光光譜上找出最大熒光波長。激發(fā)波長365nm熒光波長380nm390nm400nm410nm420nm430nm440nm450nm460nm熒光強(qiáng)度值2.16.117.334.851.863.969.668.260.7激發(fā)波長365nm熒光波長470nm480nm490nm500nm510nm520nm530nm540nm550nm熒光強(qiáng)度值53.147.327.618.912.67.94.82.91.93. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制： 將熒光波長調(diào)節(jié)至440nm，用1cm石英熒光比色皿，裝入0.050mol/L硫酸溶液，置于熒光光度計(jì)樣品室中，記錄其熒光強(qiáng)度。然后按照下表測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和樣品溶液熒光強(qiáng)度，平行測定三次。計(jì)算熒光強(qiáng)度的平均值；在坐標(biāo)紙上以熒光強(qiáng)度的平均值為縱坐標(biāo)，系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)制圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.初始值編號(hào)123456（樣品）熒光強(qiáng)度F114.830.544.857.370.117.5熒光強(qiáng)度F214.930.645.257.869.817.4熒光強(qiáng)度F314.930.64557.869.917.6F平均值14.930.64557.669.917.52. 減去F0（0.5）的值編號(hào)123456（樣品）熒光強(qiáng)度F114.33044.356.869.617熒光強(qiáng)度F214.430.144.757.369.316.9熒光強(qiáng)度F314.430.144.557.369.417.1F平均值14.430.144.557.169.417實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理：1. 熒光光譜繪制 2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線3.樣品溶液中的溶液奎尼丁含量計(jì)算根據(jù)6號(hào)樣品溶液熒光強(qiáng)度測定的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上采用作圖法求出其對(duì)應(yīng)的濃度值，采用下式計(jì)算樣品溶液中硫酸奎尼丁的含量。 =實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1. 測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液時(shí)，必須使用同一只比色皿；2. 比色皿放入熒光光度計(jì)樣品室前，必須用吸水紙將外表面擦拭干凈；3.比色皿在換裝不同濃度溶液時(shí)，必須用待測溶液潤洗至少三次；4.在比色皿未放入熒光光度計(jì)測定光路時(shí)，必須將樣品室艙蓋打開；5.調(diào)節(jié)儀器的靈敏度時(shí)應(yīng)