蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物的代謝紊亂

第二章 蛋白質(zhì)與非蛋白含氮 化合物的代謝紊亂,退出,主要內(nèi)容,一、體液蛋白質(zhì)及其代謝紊亂,二、氨基酸代謝紊亂,三、嘌呤核苷酸代謝紊亂,四、蛋白質(zhì)和氨基酸檢測(cè),第一節(jié) 體液蛋白質(zhì)及其代謝紊亂,一、血漿蛋白質(zhì)的功能和分類,三、血漿蛋白質(zhì)及其異常,四、其他體液蛋白質(zhì),二、血清蛋白質(zhì)電泳組分的臨床分析,返回章,一、血漿蛋白質(zhì)的功能和分類,營(yíng)養(yǎng)作用維持血漿膠體滲透壓作為運(yùn)載蛋白組成血液pH緩沖系統(tǒng)抑制組織蛋白酶在血漿中起催化作用的酶參與代謝調(diào)控作用的蛋白質(zhì)和肽類激素 參與凝血與纖維蛋白溶解組成體液免疫防御系統(tǒng)（Ig與補(bǔ)體 ）,血漿蛋白質(zhì)的功能,返回節(jié),血漿蛋白質(zhì)的分類,最簡(jiǎn)單：分為清蛋白和球蛋白較實(shí)用：由電泳獲得血漿蛋白質(zhì)概貌功能分類：比較復(fù)雜，但方便研究,返回節(jié),。,醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳： 清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白 分辨率高時(shí)： 可有1和2 2中也可有兩條如果采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，在適當(dāng)條件下可以分出30多個(gè)區(qū)帶。,電泳分類法,返回節(jié),功能分類法,運(yùn)輸載體類 血漿脂蛋白：包括CM、VLDL、LDL、HDL等 前清蛋白與清蛋白 甲狀腺素結(jié)合球蛋白 皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白 類固醇激素結(jié)合球蛋白 視黃醛結(jié)合蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白 觸珠蛋白 血色素結(jié)合蛋白 銅藍(lán)蛋白,返回節(jié),蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋 白酶、 2-巨球蛋白等6種以上 血清酶類： 血漿固有酶如LCAT等 組織細(xì)胞少量釋放的細(xì)胞內(nèi)酶 細(xì)胞破裂而進(jìn)入血循環(huán)的細(xì)胞內(nèi)酶蛋白類激素： 胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)激素等補(bǔ)體蛋白類凝血蛋白類免疫球蛋白類,功能分類法,返回節(jié),影響血漿蛋白質(zhì)濃度的因素,急性時(shí)相反應(yīng)（APR）： 對(duì)炎癥和組織損傷的非特異性反應(yīng)，血漿蛋白質(zhì)如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、C4、C3、纖維蛋白原和C-反應(yīng)蛋白等濃度顯著升高或升高，而血漿前清蛋白、清蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度則出現(xiàn)相應(yīng)下降這些血漿蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。增加的蛋白質(zhì)稱為正向APRs下降的蛋白質(zhì)稱為負(fù)向APRs,急性時(shí)相反應(yīng),返回節(jié),APR的機(jī)制是對(duì)炎癥的一般反應(yīng)。損傷部位釋放的細(xì)胞因子，包括白介素、腫瘤壞死 因子和、干擾素以及血小板活化因子等，引發(fā) 肝細(xì)胞中上述蛋白質(zhì)合成量的改變。正向APPs是機(jī)體防御機(jī)制的一個(gè)部分，尤其是活化 補(bǔ)體、蛋白酶抑制劑對(duì)酶活性的控制、觸珠蛋白 對(duì)被破壞紅細(xì)胞中釋放Hb的保護(hù)作用等。作為營(yíng)養(yǎng)蛋白的負(fù)向APRs此時(shí)合成減少，可為合成 正向APRs提供更多的氨基酸原料 。,返回節(jié),APR的時(shí)相 C-反應(yīng)蛋白首先升高 12小時(shí)內(nèi)1-酸性糖蛋白也升高 然后1-抗胰蛋白酶、觸珠蛋白、C4和纖 維蛋白原升高 最后是C3和銅藍(lán)蛋白升高 通常在25天內(nèi)這些APRs達(dá)到最高值,返回節(jié),APR的臨床應(yīng)用 幫助監(jiān)測(cè)炎癥發(fā)生及過程和觀察治療反應(yīng) 尤其是那些升高最早和最多的蛋白質(zhì),返回節(jié),類固醇激素,疾病時(shí)血漿蛋白質(zhì)的濃度變化被體內(nèi)類固醇激素的狀態(tài)復(fù)雜化，包括類固醇激素治療、妊娠和口服避孕藥。,返回節(jié),二、血清蛋白質(zhì)電泳組分的臨床分析,醋纖膜電泳正常百分含量清蛋白： 57681球蛋白：1.05.72球蛋白：4.911.2 球蛋白： 713球蛋白： 9.818.2,返回節(jié),正常圖譜 腎病綜合征,返回節(jié),肝硬化,肝硬化(-橋) 肝硬化(不典型-橋),多發(fā)性骨髓瘤,多發(fā)性骨髓瘤IgG型 多發(fā)性骨髓瘤IgA型,返回節(jié),其他異常區(qū)帶高濃度的甲胎蛋白可表現(xiàn)為清蛋白與1區(qū)帶間一條清 晰的新帶。C-反應(yīng)蛋白異常增高可出現(xiàn)特殊界限的區(qū)帶。單核細(xì)胞白血病可出現(xiàn)由于溶菌酶異常增多的后區(qū)帶 等。,返回節(jié),球蛋白增多與M蛋白,多克隆性增多：區(qū)帶呈彌散性升高。 見于反復(fù)或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細(xì)胞 疾病或寄生蟲感染。 單克隆性增多M蛋白 漿細(xì)胞病、尤其是惡性漿 細(xì)胞病時(shí)，異常漿細(xì)胞克隆增殖，產(chǎn)生大量單克 隆免疫球蛋白或其輕鏈或重鏈片段，病人血清或 尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白，在蛋白電泳時(shí) 呈現(xiàn)一個(gè)色澤深染的窄區(qū)帶。,返回節(jié),各種M蛋白出現(xiàn)頻率,M蛋白較多出現(xiàn)在或區(qū)，偶見于區(qū)。M蛋白的電泳位置可大致反映出免疫球蛋白的類型， 如IgA位于區(qū)帶后部或和區(qū)帶之間，IgG位于 r區(qū)帶后部 。但確定M蛋白及其類型需采用特異性抗體做免疫固 定電泳或免疫電泳 。,IgG52 、IgA21、IgM12、IgD2、IgE0.01輕鏈（或）11，重鏈（、或）1兩種或多種克隆蛋白，占0.5 。,返回節(jié),三、血漿蛋白質(zhì)及其異常,1. 前清蛋白2. 清蛋白3. 1-抗胰蛋白酶 4. 1-酸性糖蛋白5. 觸珠蛋白6. 2-巨球蛋白7. 銅藍(lán)蛋白8. 轉(zhuǎn)鐵蛋白9. C-反應(yīng)蛋白,返回節(jié),生理功能,作為運(yùn)載蛋白和組織修補(bǔ)材料。RBP是轉(zhuǎn)運(yùn)視黃醇的蛋白質(zhì)。TTR能轉(zhuǎn)運(yùn)T4，大約占結(jié)合T4的10甲狀腺素結(jié)合 球蛋白約占結(jié)合甲狀腺激素的75清蛋白結(jié)合甲 狀腺激素的其余部分。在血漿中RBP與TTR以1:1比例結(jié)合成復(fù)合物可避 免小分子RBP從腎小球?yàn)V過，減少RBP釋放到非靶 細(xì)胞中。,返回節(jié),前清蛋白（PA）,在電泳中顯示在清蛋白前方故而得名主要包括： 視黃醇結(jié)合蛋白（RBP） 甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（TTR）,臨床意義,作為營(yíng)養(yǎng)不良的早期指標(biāo)。作為肝功能不全的指標(biāo)，下降早。是負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白：在急性炎癥、惡性 腫瘤、創(chuàng)傷等任何急需合成蛋白質(zhì)的情況下， 血清PA均迅速下降。,返回節(jié),清蛋白,不含糖，高度溶于水，每分子可以帶有200個(gè) 以上負(fù)電荷。 ALB是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，占血漿總蛋 白的5768。也是大部分細(xì)胞外液的主要蛋白成分，全身 大約60的ALB存在于細(xì)胞外液。,返回節(jié),代謝,肝細(xì)胞合成，每天1114.7g肝臟合成儲(chǔ)備能力很大，在腎病綜合征時(shí) 合成速率可增高到正常的300以上半壽期約1519天遺傳性變異達(dá)80多種,臨床意義,低ALB血癥見于下述許多疾病情況： （1）清蛋白合成不足：急性或慢性肝臟疾?。?蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良或吸收不良 （2）清蛋白丟失： 由尿中丟失；胃腸道丟 失；皮膚丟失（3）清蛋白分解代謝增加 （4）清蛋白的分布異常 （5）無清蛋白血癥,返回節(jié),生理功能,（1）保持血漿膠體滲透壓（2）重要的營(yíng)養(yǎng)蛋白（3）血漿中主要的載體蛋白（4）具有緩沖酸堿物質(zhì)的能力,1-抗胰蛋白酶(1-AT或AAT),蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶可清除病原微生物、壞死組織和衰老 的紅細(xì)胞蛋白酶含量過高或活性過強(qiáng)可使正常 組織和細(xì)胞受到破壞?？沟鞍酌赶到y(tǒng)：機(jī)體為對(duì)抗這些蛋白酶的異 常作用而產(chǎn)生抗蛋白酶系統(tǒng)下降可導(dǎo)致某些 疾病。,返回節(jié),AAT的多種遺傳表型 已知的至少有75種，表達(dá)的蛋白質(zhì)有M型和Z型、S型，PiMM型最多，占人群95%以上。 類型：PiMM、PiMS、PiMZ、PiSS、PiSZ、PiZZ 活力：100%、80、60、60、35、15,返回節(jié),生理功能,占血清中抑制蛋白酶活力的90左右多形核白細(xì)胞起吞噬作用時(shí)釋放溶酶體蛋白水解酶，AAT是這些酶的生理抑制物。,臨床意義,（1）AAT缺陷與肺氣腫：ZZ型、SS型甚至MS表型。 當(dāng)吸入塵埃和細(xì)菌，肺部多形核白細(xì)胞吞噬 活躍，溶酶體彈性蛋白酶釋放，作用于肺泡 壁的彈性纖維。低血漿AAT還可發(fā)現(xiàn)于胎兒呼 吸窘迫綜合征。（2）AAT缺陷與肝損害：ZZ表型，ZZ蛋白聚集在肝 細(xì)胞，可致肝硬化。ZZ表型的新生兒中10 20；ZZ表型的某些成人。（3）急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)AAT增加。,返回節(jié),1-酸性糖蛋白 (1-AG或AAG) 生理功能,主要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在急性炎癥時(shí) 增高，與免疫防御功能有關(guān)。AAG可以結(jié)合利多卡因和心得安等，在急 性心肌梗死時(shí)，AAG作為一種急性時(shí)相反 應(yīng)蛋白升高后，使藥物結(jié)合狀態(tài)增加而游 離狀態(tài)減少，因而需要增加藥物劑量。,返回節(jié),臨床意義,（1）主要作為急性時(shí)相反應(yīng)的指標(biāo)，在風(fēng)濕病、 惡性腫瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時(shí)一 般增加34倍。（2）隨糖皮質(zhì)激素而增加，包括內(nèi)源性的庫(kù)欣 綜合征和外源性強(qiáng)的松、地塞米松等藥物 治療時(shí)；雌激素使其降低。（3）在營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損害、腎病綜合征以 及胃腸道疾病致蛋白嚴(yán)重丟失等情況下AAG 降低。,返回節(jié),觸珠蛋白,22四聚體 鏈有1及2兩種，而1又有1F及1s 兩種遺傳變異體,返回節(jié),觸珠蛋白的幾種遺傳表型,生理意義,Hp的主要功能是能與紅細(xì)胞中釋放出的游 離血紅蛋白結(jié)合，每分子Hp可結(jié)合兩分子 Hb。Hp可防止Hb從腎丟失而為機(jī)體有效地 保留鐵，并能避免Hb對(duì)腎臟的損傷。Hp不能重新被利用，溶血后其含量急劇降 低，血漿Hp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。,返回節(jié),臨床意義,（1）溶血性疾病如溶血性貧血、輸血反應(yīng)、瘧疾時(shí) Hp含量明顯下降。連續(xù)觀察溶血性疾病合適的 組合試驗(yàn)：包括血漿Hp、乳酸脫氫酶和游離血 紅蛋白。血管外溶血不會(huì)使Hp發(fā)生變化。（2）燒傷和腎病綜合征引起大量清蛋白丟失，血Hp 常明顯增加，此時(shí)屬于急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)的Hp增 加 。（3）雌激素使Hp減少，多數(shù)急慢性肝病包括急性病 毒性肝炎和伴黃疸的肝硬化患者，由于雌激素 分解代謝減少，其血清Hp降低 。,返回節(jié),2巨球蛋白 (2-M 或AMG),是血漿中分子量最大的蛋白質(zhì)生理功能 蛋白酶抑制劑，能與蛋白水解酶如纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及組織蛋白酶D結(jié)合而抑制這些酶的活性。,返回節(jié),臨床意義,低清蛋白血癥，尤其是腎病綜合征時(shí)， 2-MG含量可顯著增高，可能系一種代 償機(jī)制以保持血漿膠體滲透壓。2-MG不屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。,返回節(jié),銅藍(lán)蛋白,含銅的2球蛋白，每分子含68個(gè)銅原子， 由于含銅而呈藍(lán)色。95%的血清銅存在于Cp中，另5%呈可擴(kuò)散狀 態(tài)。血循環(huán)中Cp為銅沒有毒性的代謝庫(kù)。,返回節(jié),生理功能,與氧化還原反應(yīng)有關(guān)，既能起氧化作用又能 起抗氧化作用。具有鐵氧化酶作用，能將Fe2+氧化為Fe3+， Fe3+再結(jié)合到轉(zhuǎn)鐵蛋白上，使鐵不具毒性。還有抑制膜脂質(zhì)氧化的作用。,返回節(jié),臨床意義,（1）協(xié)助診斷Wilson病 血漿Cp減少，血漿游離銅增加，銅沉積在肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節(jié)的豆?fàn)詈藙t導(dǎo)致豆?fàn)詈俗冃浴?小部分患者Cp水平正常，可能是銅摻入Cp時(shí)所需的攜帶蛋白減少。80%肝受損者中血清Cp低于100mg/L，而20%肝受損者Cp 不低于300mg/L。 患者其他指標(biāo)變化：血清總銅降低、游離銅增加和尿銅排出增加。 （2）為弱和遲發(fā)反應(yīng)的APP；在營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝病及腎病綜合征時(shí)往往下降。,返回節(jié),轉(zhuǎn)鐵蛋白,生理功能,從小腸進(jìn)入血液的Fe2+在血液中被銅蘭蛋 白氧化為Fe3+，再被TRF的載體蛋白結(jié)合。每種細(xì)胞表面都有TRF受體，此受體對(duì) TRF-Fe3+復(fù)合物比對(duì)TRF的載體蛋白親和 力高得多，與受體結(jié)合后，TRF-Fe3+被攝 入細(xì)胞。TRF-Fe3+復(fù)合物可將大部分Fe3+運(yùn)輸?shù)焦?髓，用于Hb合成，小部分則運(yùn)輸?shù)礁鹘M 織細(xì)胞，用于形成鐵蛋白，以及合成肌 紅蛋白、細(xì)胞色素等。,返回節(jié),臨床意義,（1）用于貧血的鑒別診斷在缺鐵性的低血色素貧血中，TRF代償性合成增加，但血漿鐵含量低，結(jié)合鐵的TRF少，所以鐵飽和度很低（正常值在30% 38%）。再生障礙性貧血時(shí)，血漿中TRF正常或低下，由于紅細(xì)胞對(duì)鐵的利用障礙，使鐵飽和度增高。在鐵負(fù)荷過量時(shí)，TRF水平正常，而飽和度可超過50%，甚至達(dá)90%。,返回節(jié),（2）負(fù)性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 炎癥、惡性病變時(shí)常隨著清蛋白、清蛋白 同時(shí)下降。（3）營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)指標(biāo) 在營(yíng)養(yǎng)不良及慢性肝臟疾病時(shí)下降與清蛋 白相比，體內(nèi)轉(zhuǎn)鐵蛋白總量較少、生物半壽 期較短，故能及時(shí)地反映臟器蛋白的急劇變 化。在高蛋白膳食治療時(shí)，血漿中濃度上升 快，是判斷治療效果的良好指標(biāo)。,返回節(jié),總鐵結(jié)合力（TIBC）鐵飽和度,所有TRF上結(jié)合的鐵量為TIBC。從TIBC可間接計(jì)算 TRF含量及TRF的鐵飽和度： TRF（mg/L）=TIBC(g/L)0.70 鐵飽和度（）血清鐵/TIBC。 由于假設(shè)所有血漿鐵都結(jié)合到TRF上，所以由上式估計(jì)的TRF濃度比真實(shí)值高出1620。 而當(dāng)TRF結(jié)合鐵到半飽和時(shí)，部分鐵會(huì)結(jié)合到其他蛋白如清蛋白上。目前TRF的免疫比濁測(cè)定法已在許多實(shí)驗(yàn)室使用，因而已在很大程度上代替了TIBC的測(cè)定。 TIBC(g/L) = TRF（mg/L）1.43,返回節(jié),生理功能,CRP不僅結(jié)合多種細(xì)胞、真菌及原蟲等體內(nèi)的多糖物質(zhì)，在鈣離子存在下，還可以結(jié)合卵磷脂和核酸。CRP可以引發(fā)對(duì)侵入細(xì)胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用，結(jié)合后的復(fù)合體具有對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的激活作用，表現(xiàn)炎癥反應(yīng)。,返回節(jié),C-反應(yīng)蛋白,因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)的可以結(jié)合肺炎球菌細(xì)胞壁C-多糖的蛋白質(zhì)而命名。 CRP由肝細(xì)胞所合成，電泳分布在慢區(qū)帶，有時(shí)可以延伸到區(qū)帶。,臨床意義,CRP是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，是極 靈敏的指標(biāo)，血漿中CRP濃度在急性心肌梗死、 創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術(shù)、腫癌浸潤(rùn)時(shí)迅速 顯著地增高，可達(dá)正常水平的2000倍。CRP是非特異性指標(biāo)，主要用于結(jié)合臨床病史監(jiān)測(cè) 疾?。喝缭u(píng)估炎癥性疾病的活動(dòng)度；監(jiān)測(cè)系統(tǒng)性紅 斑狼瘡、白血病和外科手術(shù)后并發(fā)的感染；監(jiān)測(cè)腎 移植后的排斥反應(yīng)等。,返回節(jié),四、其他體液蛋白質(zhì),包括尿液、腦脊液、胸腹水、羊水、唾液和糞便中的蛋白質(zhì) 。,返回節(jié),尿液蛋白質(zhì),正常尿總蛋白僅20150mg, 其中ALB約占30，總量通常小于10mg， 其次是由腎小管分泌的Tamm-Horsfall蛋白約占21。ALB增多是腎小球基底膜通透性增加的信號(hào)。大分子蛋白質(zhì)如IgG、IgM、AMG增多是基底膜選擇性或 篩網(wǎng)功能喪失的表現(xiàn)。小分子蛋白質(zhì)如2-微球蛋白、1-微球蛋白 RBP增多是腎小管重吸收功能下降的表現(xiàn)。溢出性蛋白尿包括血紅蛋白、肌紅蛋白和Ig輕鏈等。,返回節(jié),（二）腦脊液蛋白質(zhì),腦脊液總蛋白濃度為0.150.45g/L。正常成分：分子量較小的蛋白質(zhì)如ALB、TRF 和TTR，未見到分子量大于IgG的蛋白質(zhì)。,返回節(jié),腦脊液總蛋白增多 （1）血腦屏障的通透性增加，如腦炎、脊髓灰質(zhì)炎、 細(xì)菌性腦膜炎、隱球菌性腦膜炎、病毒性腦膜炎等。（2）引起腦脊液循環(huán)梗阻的疾病如脊髓腫瘤。（3）腦出血。（4）腦軟化、腦退行性疾病、神經(jīng)性病變等。腦脊髓膜合成免疫球蛋白增多見于神經(jīng)性梅毒、多發(fā)性硬化等。,返回節(jié),CSF普通蛋白電泳特征 PA增高：腦萎縮、腦積水及中樞神經(jīng)變性病。ALB增加：腦血管病變、椎管阻塞。、球蛋白增加：腦膜炎、腦腫瘤，球蛋白增加 可見于動(dòng)脈硬化、腦血栓等疾病。球蛋白明顯增高見于腦腫瘤。多發(fā)性硬化癥為中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病，區(qū)可見 稀疏的IgG寡克隆帶。,返回節(jié),第二節(jié) 氨基酸代謝紊亂,一、氨基酸代謝紊亂的種類,二、苯丙酮酸尿癥,三、酪氨酸血癥,四、含硫氨基酸代謝紊亂,返回章,由參與氨基酸代謝的酶或其他蛋白因子缺乏引起 ，為相關(guān)基因突變所致，至今已發(fā)現(xiàn)70余種。,一、氨基酸代謝紊亂的種類,遺傳性氨基酸代謝紊亂,返回節(jié),氨基酸血癥 氨基酸尿癥,氨基酸血癥：當(dāng)酶缺陷出現(xiàn)在代謝途徑的起點(diǎn)時(shí)，其催化的氨基酸將在血循環(huán)中增加。氨基酸尿癥：血中增加的氨基酸從尿中排出。中間代謝產(chǎn)物血尿濃度增加：當(dāng)酶的缺陷出現(xiàn)在 代謝途徑的中間時(shí)，則此酶催化反應(yīng)前的中間代 謝產(chǎn)物便在體內(nèi)堆積。另外代謝途徑的產(chǎn)物（血尿中）增加：由于正常 降解途徑受阻，氨基酸可通過另外的途徑代謝。,返回節(jié),遺傳性氨基酸代謝紊亂的缺陷酶 及其血中增高的成分,疾病名稱 缺乏的酶 血漿中增高的成分苯丙酮酸尿癥 苯丙氨酸羥化酶 苯丙氨酸、苯丙酮酸I型酪氨酸血癥 延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸尿黑酸尿癥 尿黑酸氧化酶 尿黑酸（輕度）同型胱氨酸尿癥 胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸組氨酸血癥 組氨酸酶 組氨酸、丙氨酸甘氨酸血癥 甘氨酸氧化酶 甘氨酸支鏈酮酸尿癥 支鏈酮酸氧化酶 纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等胱硫醚尿癥 胱硫醚酶 胱硫醚型高脯氨酸血癥 脯氨酸氧化酶 脯氨酸精氨酸琥珀酸尿癥 精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等精氨酸血癥 精氨酸酶 精氨酸,二、苯丙酮酸尿癥,主要由苯丙氨酸羥化酶缺乏引起的常染色體隱性遺傳病。 少數(shù)PKU二氫蝶呤還原酶缺陷引起。,返回節(jié),三、酪氨酸血癥,延胡索酰乙酰乙酸水解酶活性低對(duì)-羥苯丙酮酸氧化酶活性也下降酪氨酸在血尿中增加，甲硫氨酸血濃度也增加。 延胡索酰乙酰乙酸可還原生成琥珀酰乙酰乙酸，后者如再脫羧則成為琥珀酰丙酮。琥珀酰丙酮可損害肝與腎的功能。,酪氨酸分解代謝,I型酪氨酸血癥,返回節(jié),四、含硫氨基酸代謝紊亂,含硫氨基酸包括甲硫氨酸、半胱氨酸和胱氨酸，胱氨酸是兩個(gè)半胱氨酸脫氫后以二硫鍵結(jié)合形成。同型半胱氨酸比半胱氨酸多一個(gè)次甲基（-CH2），是甲硫氨酸代謝的中間產(chǎn)物。,返回節(jié),同型半胱氨酸,同型半胱氨酸不穩(wěn)定，易氧化成同型胱 氨酸或同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化合 物，僅少量以還原型同型半胱氨酸存在于 血漿。這些含硫化合物在血漿中大部分與蛋白質(zhì) 結(jié)合。我們通常所指的同型半胱氨酸包括 所有這些結(jié)合和游離的含同型半胱氨酸的 化合物。,返回節(jié),第三節(jié) 嘌呤核苷酸代謝紊亂,一、嘌呤核苷酸代謝,二、高尿酸血癥,三、高尿酸血癥與痛風(fēng),返回章,嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑、補(bǔ)救途徑 嘌呤核苷酸的分解：終產(chǎn)物是尿酸,一、嘌呤核苷酸代謝,返回節(jié),嘌呤核苷酸合成代謝,二、高尿酸血癥,由嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄障礙引起。嘌呤的合成、吸收和分解代謝發(fā)生紊亂，將出現(xiàn)尿酸生成過多而導(dǎo)致高尿酸血癥。人和猿類體內(nèi)缺乏尿酸酶，不能將尿酸分解成尿囊素，進(jìn)一步再分解成NH3、CO2和H2O，人體內(nèi)尿酸通過腎臟排出體外。若尿酸排泄出現(xiàn)障礙，可導(dǎo)致高尿酸血。,返回節(jié),（一）尿酸排泄障礙,當(dāng)腎小球?yàn)V過率下降，或近端腎小管對(duì)尿酸的重吸收增加或（和）分泌功能減退時(shí)，便導(dǎo)致高尿酸血癥。 原發(fā)性高尿酸血癥，機(jī)制不明的多基因性遺傳缺陷、慢性腎疾患等引起。,返回節(jié),（二）尿酸生成過多,1. 嘌呤合成代謝紊亂體內(nèi)80%尿酸來源于嘌呤的生物合成， 嘌呤合成代謝紊亂可致高尿酸血癥。其中大多數(shù)屬多基因遺傳缺陷，機(jī)制 不明。由酶缺陷引起者僅占少數(shù) 。,返回節(jié),酶缺陷 （1）次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）缺乏 。； （2）PRPP合成酶亢進(jìn)。 （3）葡萄糖-6-磷酸酶（G6pase）缺乏，引起葡萄糖-6-磷酸增多，并沿磷酸戊糖代謝途徑轉(zhuǎn)化成較多的PRPP，使嘌呤合成增多。 （4）腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（APRT）缺乏，腺嘌呤不能經(jīng)補(bǔ)救途徑合成腺苷酸而出現(xiàn)堆積，腺嘌呤的代謝產(chǎn)物2，8-二羥腺嘌呤由尿排出增加，可產(chǎn)生腎結(jié)石。,返回節(jié),2. 嘌呤吸收增多 體內(nèi)20%尿酸來源于食物中的嘌呤， 攝入富含嘌呤食物過多可誘發(fā)痛風(fēng)發(fā) 作，但不是發(fā)生高尿酸血癥的原因。3. 嘌呤分解增加 在骨髓增殖性疾病等，有旺盛的細(xì)胞 合成和分解，從而出現(xiàn)核酸分解亢進(jìn)， 嘌呤和尿酸生成增多。,返回節(jié),高尿酸血癥的原因也可歸納為原發(fā)性和繼發(fā)性兩方面，原發(fā)性包括原發(fā)性腎臟排泄尿酸障礙和原發(fā)性尿酸產(chǎn)生過多，繼發(fā)性包括各種腎臟疾病以及引起嘌呤分解過多的疾病。,返回節(jié),三、高尿酸血癥與痛風(fēng),痛風(fēng)（gout）的概念 由于遺傳性和（或）獲得性的尿酸排泄減 少和（或）嘌呤代謝障礙，導(dǎo)致高尿酸血癥， 當(dāng)出現(xiàn)尿酸鹽結(jié)晶形成和沉積，并引起特征 性急性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石、間質(zhì)性腎炎、尿酸 性尿路結(jié)石時(shí)，即為痛風(fēng)，嚴(yán)重者有關(guān)節(jié)畸 形及功能障礙。痛風(fēng)是一組疾病，高尿酸血癥中1020 發(fā)生痛風(fēng)。,返回節(jié),尿酸鈉結(jié)晶形成 血漿中尿酸鹽以單鈉尿酸鹽形式存在，其溶解度很低。當(dāng)血液pH為7.4時(shí)，尿酸鈉的溶解度約為0.42mmol/L，0.42mmol/L 時(shí)已成過飽和狀態(tài)。當(dāng)濃度0.48mmol/L 持久不降，如遇有下列情況即可使尿酸鈉呈微小結(jié)晶析出： 血漿清蛋白及12球蛋白減少。 局部pH降低。 局部溫度降低。,返回節(jié),尿酸鈉沉淀與炎癥反應(yīng)結(jié)晶易沉淀在血管較少、粘多糖含量較豐富的結(jié)締組織、軟骨和關(guān)節(jié)腔內(nèi)。運(yùn)動(dòng)、飲酒、應(yīng)激、局部損傷等都可誘發(fā)這些部位急性 炎癥發(fā)作。如運(yùn)動(dòng)時(shí)這些組織容易發(fā)生缺氧，于是出現(xiàn)糖酵解加速和乳酸產(chǎn)生增多，引起pH降低，導(dǎo)致局部尿酸鈉結(jié)晶析出。微小的尿酸鈉結(jié)晶表面可吸附IgG，并在補(bǔ)體參與下誘發(fā)多型核白細(xì)胞的吞噬作用。結(jié)晶被吞噬后可促使白細(xì)胞膜破裂，釋放出各種炎癥介質(zhì)，如趨化因子，溶酶體和胞漿內(nèi)的各種酶，導(dǎo)致組織發(fā)生炎癥反應(yīng)。,返回節(jié),第四節(jié) 蛋白質(zhì)和氨基酸檢測(cè),一、 體液總蛋白測(cè)定,二、 體液清蛋白測(cè)定,三、 蛋白質(zhì)電泳技術(shù),四、 蛋白質(zhì)免疫化學(xué)法測(cè)定,五、 氨基酸檢測(cè),返回章,一、血清總蛋白測(cè)定,血清總蛋白包括數(shù)量眾多的各種蛋白質(zhì)，定量測(cè)定時(shí)作了如下假定：（1）所有血漿蛋白是單純的多肽鏈，糖脂類和金屬有機(jī)物等均不計(jì)在內(nèi)，其含氮量平均為16；（2）幾百種血漿蛋白理化性質(zhì)雖不同，但與化學(xué)試劑的反應(yīng)性（如呈色、沉淀）一致。,返回節(jié),（一）凱氏定氮法,1883年建立，是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測(cè)定方法。根據(jù)蛋白質(zhì)平均含氮量16計(jì)算蛋白濃度。該法結(jié)果準(zhǔn)確性好，精密度高，靈敏度高，是公認(rèn)的參考方法，目前用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的定值和校正其他方法等，并可適用于一切形態(tài)（固體和液體）樣品。操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，不適合血清總蛋白等常規(guī)測(cè)定，而且血清等樣品中各種蛋白質(zhì)含氮量有少許差異，尤其在疾病狀態(tài)差異可能更大。,返回節(jié),（二）雙縮脲法,蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能 與Cu2+作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，因至少含 2個(gè)-CONH-基團(tuán)才能與Cu2+絡(luò)合，故三肽以 上才能反應(yīng)，在體液中小分子肽含量極低。該法對(duì)各種蛋白質(zhì)呈色基本相同，特異性和 準(zhǔn)確度好，精密度好；顯色穩(wěn)定性好，試劑 單一，方法簡(jiǎn)便；靈敏度雖不高，但對(duì)血清 總蛋白定量較為適用。對(duì)蛋白質(zhì)含量很低的 其他體液如腦脊液、胸腹水和尿液等不合適。,返回節(jié),（三）酚試劑法,蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸能還原磷鎢酸磷鉬酸試劑起藍(lán)色反應(yīng)。Lowry酚試劑改良法：先用堿性銅溶液與蛋白質(zhì)反應(yīng)，再加入酚試劑，則銅-肽鍵絡(luò)合物中的酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬酸還原為鎢藍(lán)和鉬藍(lán)，使呈色靈敏度達(dá)到雙縮脲法的100倍左右。 本法靈敏度高。各種蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸的含量不同，如清蛋白含色氨酸0.2%，而球蛋白含色氨酸2%3%。因此，本法測(cè)定純單一蛋白質(zhì)較合適。本法易受還原性化合物的干擾，如帶-SH的化合物、糖類、酚類等 。,返回節(jié),（四）紫外分光光度法,芳香族氨基酸在280nm處有吸收峰。方法的準(zhǔn)確性受該種氨基酸的含量影響甚大。尿酸和膽紅素在280nm附近有干擾，所以不適 合血清等。常用于較純的酶、免疫球蛋白等蛋 白質(zhì)測(cè)定?？杀Ａ舻鞍踪|(zhì)制劑的生物活性。核酸最大吸收峰為260nm，在280nm也有較強(qiáng) 的光吸收，因而測(cè)定蛋白質(zhì)可采用兩個(gè)波長(zhǎng)的 吸光度予以校正，即蛋白質(zhì)濃度（g/L） 1.45A2800.74A260nm。,返回節(jié),（五）染料結(jié)合法,在酸性環(huán)境蛋白質(zhì)分子可解離帶上正電荷-NH3+，與染料陰離子產(chǎn)生顏色反應(yīng)。常用的染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍(lán)、鄰苯三酚紅鉬等。前兩種常作為血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳或瓊脂糖凝膠電泳的染料。,返回節(jié),考馬斯亮藍(lán)：常用于需更高呈色靈敏度的 蛋白電泳中，也可用于測(cè)定尿液、腦脊液等 的蛋白質(zhì)，優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速、靈敏，缺點(diǎn) 是不同蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致，且試 劑對(duì)比色杯有吸附作用。不實(shí)用。鄰苯三酚紅鉬法,返回節(jié),（六）比濁法,基于某些酸如三氯醋酸、磺基水楊酸等能與蛋白 質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生微細(xì)沉淀，測(cè)定懸浮液的濁度大小 與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該法優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、靈敏度高。缺點(diǎn)是影響濁度大小的因素較多，包括加入試劑 的手法、混勻技術(shù)、反應(yīng)溫度等，故精密度差； 且各種蛋白質(zhì)形成的濁度亦有較大的差別。一般 用于測(cè)定尿液、腦脊液等蛋白質(zhì)濃度較低的樣品， 其標(biāo)準(zhǔn)品推薦使用含正常白/球蛋白比值的血清標(biāo) 準(zhǔn)品作適當(dāng)稀釋。,返回節(jié),二、血清清蛋白測(cè)定,清蛋白是血清內(nèi)含量最多的一種蛋白質(zhì)， 以前用硫酸銨鹽析法沉淀球蛋白，再用 總蛋白測(cè)定方法測(cè)定上清液中的清蛋白。 目前測(cè)定清蛋白的方法有電泳法、免疫 法和染料結(jié)合法。,返回節(jié),溴甲酚綠法（BCG） 溴甲酚紫法（BCP）,在酸性環(huán)境清蛋白具有與陰離子染料BCG和BCP 結(jié)合的特性，而球蛋白基本不結(jié)合這些染料。 BCG 法和BCP法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好， 能自動(dòng)化。BCG法最常用，雖然和球蛋白與BCG也能起 慢反應(yīng)，但縮短反應(yīng)時(shí)間即能去除此非特異性 反應(yīng)，自動(dòng)化分析儀的普遍應(yīng)用使比色能在反 應(yīng)1030秒后立即進(jìn)行，因而使該法變得很實(shí)用。 BCP法無球蛋白的非特異性干擾，但與牛、豬 等動(dòng)物血清清蛋白的反應(yīng)性比與人的反應(yīng)性低， 質(zhì)控血清往往是動(dòng)物血清，故其應(yīng)用受限。,返回節(jié),三、蛋白質(zhì)電泳技術(shù),返回節(jié),電泳技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血清、尿液和腦脊液等體液蛋白質(zhì)，醋酸纖維素薄膜（CAM）和瓊脂糖凝膠等是采用最廣的凝膠介質(zhì)，其次還有毛細(xì)管電泳和一些專門的電泳技術(shù)，如蛋白質(zhì)印跡、免疫固定和雙向電泳等。,（一）血清蛋白電泳,SPE通常采用CAM或瓊脂糖凝膠，在pH8.6的緩沖液中，血清中各種蛋白質(zhì)都電離成負(fù)離子，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)；因各種蛋白質(zhì)pI不同，在相同pH下帶電荷量有差異，同時(shí)各蛋白質(zhì)的分子大小與分子形狀也不相同，因此在同一電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不同；帶電荷多，分子量小者，泳動(dòng)較快，反之則較慢。,返回節(jié),1.尿蛋白普通電泳,采用CAM或瓊脂糖凝膠，常需濃縮尿液和采用高靈敏度的染色方法如金染或銀染。一些自動(dòng)電泳儀采用反復(fù)多次在瓊脂糖凝膠上加樣，也可不需濃縮尿液，電泳后以考馬斯亮藍(lán)染色，分離結(jié)果可呈現(xiàn)ALB、1、2、1、2和球蛋白六個(gè)區(qū)帶甚至七個(gè)區(qū)帶（兩個(gè)2區(qū)帶）；這種電泳能得到尿蛋白的全貌，對(duì)許多尿蛋白能做出初步的分類判斷，但因?yàn)?