第二章 衛(wèi)生樣品的采集與處理幻燈片.ppt

15 27 10 第二章樣品的采集與處理 第一節(jié)樣品的采取和制備第二節(jié)樣品的處理 15 27 10 樣品的采集和保存樣品的預處理 分析方法的選擇及試樣的測定分析數(shù)據(jù)的處理分析報告的撰寫 衛(wèi)生分析工作的第一步 樣品的采集 衛(wèi)生樣品分析的一般程序 影響結果準確度 15 27 10 第一節(jié)樣品的采取和保存 總體 分析對象的全體 一 幾個基本概念 樣品 從總體中抽出部分個體 代表全部待分析物料的平均組成 采樣目的 獲得能代表全部待分析總體平均組成的樣品 采樣 按一定規(guī)則 從總體中抽取分析樣品的過程 15 27 10 二 樣品采集的原則 代表性 典型性和適時性 1 代表性 采集的樣品必須能充分代表被分析總體的性質 2 典型性 根據(jù)檢測目的 采集的樣品必須能充分說明此目的的典型樣品 3 適時性 某些樣品的采集要有嚴格的時間概念 15 27 10 非典時期的支原體與衣原體之爭當廣東開始非典流行時 國內權威機構報道非典是由 衣原體 導致的時候 我的第一個反應是懷疑 但基于以下理由覺得迷惑 一 依據(jù)明顯缺乏科學性 醫(yī)學研究絕對不是這樣的 僅僅從幾個尸解病人的標本中發(fā)現(xiàn)衣原體 包涵體 在細胞漿或細胞核內形成的具有一定形態(tài)的病變結構 就倉促下結論是違背科學精神的 二 治療效果 如果非典真的是衣原體造成的 那就一點也不可怕了 因為只要正確使用抗菌素 衣原體感染是可以控制的 當時那么多國內甚至國際一流的專家會不考慮到這個 15 27 10 后來的發(fā)展證實了我的看法 相信國內很多醫(yī)務人員也經(jīng)歷過和我一樣的疑惑 那么 為什么在非典的病人標本上會發(fā)現(xiàn)衣原體 包涵體 呢 這其實是病原學研究時 最基本的需要分辨的 即 宿主 還是 過客 這一最基本的問題 宿主 是指病原體是造成疾病的病因 過客 是指病原體只是在疾病出現(xiàn)后 由于環(huán)境的改變 適合它在此繁殖 即上面文章中所說的 繼發(fā)感染 具體到上述的在非典的病人標本上會發(fā)現(xiàn)衣原體 包涵體 的原因是這樣 非典病人受到冠狀病毒的侵犯后 肺部環(huán)境發(fā)生了巨大的變化 原來衣原體無法生存的地方變成衣原體生長的 沃土 從而出現(xiàn)了繼發(fā)衣原體感染 15 27 10 三 各類樣品的采集方法 一 空氣 大氣監(jiān)測工作場所空氣中有害成分監(jiān)測室內空氣質量監(jiān)測公共場所空氣質量監(jiān)測 樣品的采集方法 15 27 10 1 直接采集法 容器預先抽真空 在現(xiàn)場采集樣品 或通過采樣泵將氣體樣品直接引進容器 2 濃縮采集法 富集法 空氣樣品中待測組分濃度較低時 使用此法 15 27 10 3 采樣裝置 收集器流量計采樣動力 基本組成 二 水 見書p10 15 27 10 三 食品 15 27 10 小龍蝦致肌溶解 肌溶解 rhabdomyolysis 是當肌肉受傷時 肌肉中的一種叫做肌球素 Myoglobin 的蛋白質被釋放出來 進入血液循環(huán)系統(tǒng) 這種蛋白質在腎臟會被過濾 并可能被分解成有毒物質 危害腎臟 這可能就是為啥我們會看到醬油尿 15 27 10 造成肌溶解的原因有很多 常見的是酗酒 外傷 癲癇 機體過勞 肌肉缺血性萎縮 遺傳原因等等 但某些藥物也可能造成這種病 幾乎每個地方都提到的是降膽固醇藥statins 可卡因 安非他明 海洛因 等等 15 27 10 龍蝦中毒引發(fā)的肌肉損傷和肌紅蛋白血癥有如下可能原因 1 龍蝦被重金屬污染 2 龍蝦被某種細菌污染 3 龍蝦中還有某種化學物質能抑制線粒體的功能 具體原因等待衛(wèi)生部的調查 15 27 10 四 生物材料 生物材料 人或動物的體液 排泄物 分泌物和臟器等 1 血 包括 全血 血漿和血清 采樣部位 手指血 耳垂血和靜脈血 保存方法 置于聚四氟乙烯 聚乙烯或硬質玻璃管中密塞 4 下保存 長期保存在 20 15 27 10 2 尿 采樣儀器 聚乙烯瓶或用硝酸溶液浸泡過的玻璃瓶 3 毛發(fā) 取樣方法 枕部距頭皮2cm左右的發(fā)段 4 組織 取樣 肝 腎 肺等臟器 冷凍保存 15 27 10 第二節(jié)樣品的處理 一 樣品處理的目的和要求 1 樣品處理的目的 使被測組分從復雜樣品中分離出來 制成可被測定的形式 可通過衍生化使難測定物質轉化為易于測定的物質形式 去除干擾測定的物質 必要時進行濃縮富集 15 27 10 2 樣品處理的要求 必須使樣品分解完全 回收率足夠高 不能引入干擾測定的物質和待測物質 方法簡單易行 速度快 二 樣品溶液的制備方法 1 溶解法 15 27 10 2 分解法 15 27 10 三 常用的分離與富集方法 問題的提出 實際樣品的復雜性 干擾的消除 控制實驗條件 使用掩蔽劑 分離 分析方法靈敏度的局限性 滿足對靈敏度的要求 選擇靈敏度高的方法 富集 15 27 10 例 海水中U IV 的測定 C 1 3 g L 難以測定 富集為C 100 200 g L 可以測定 分離效果 干擾成分減少至不再干擾 待測組分有效回收 15 27 10 分離效果的好壞用回收率衡量 常量組分 含量 1 回收率 99 以上 微量組分 含量 0 01 回收率 95 或更低 15 27 10 常用分離方法 沉淀與共沉淀分離法 溶劑萃取分離法 固相萃取與微萃取法 色譜分超臨界流體萃取法 揮發(fā)和蒸餾分離法 膜分離法 15 27 10 一 溶劑萃取分離法 在含有被分離物質的水溶液中 加入萃取劑和與水不相混溶的有機溶劑 振蕩 利用物質在兩相中的分配不同的性質 使一些組分進入有機相中 使另一些組分仍留在水相中 從而達到分離的目的 15 27 10 1 萃取分離的基本原理 物質 親水性 疏水性 離子型化合物 極性 共價鍵化合物 弱極性或非極性 相互轉換 萃取分離的實質 將待萃取組分由親水性轉化為疏水性 使其萃入有機相中 例 8 羥基喹啉 CHCl3對Al3 的萃取 萃取的反過程 將組分從有機溶液中萃取到水溶液中 反萃取 15 27 10 例 8 羥基喹啉 CHCl3對Al3 的萃取 溶于CHCl3 8 羥基喹啉 CHCl3 萃取劑 溶劑 水合離子的正電性被中和 親水的水分子被疏水有機大分子取代 15 27 10 1 分配系數(shù) 有機溶劑從水相中萃取溶質A 若A在兩相中的存在形態(tài)相同 平衡時 在有機相的濃度為 A o 水相的濃度為 A w之比 用KD表示 萃取平衡 分配定律 15 27 10 2 分配比 如果溶質A在兩相中存在多種型體 如離解 締合 絡合 聚合等 則把溶質A在兩相中各種型體的濃度之和相比 稱為分配比D 溶質在兩相中存在形式完全相同時 D KD 兩相體積相等時 若D 1 溶質進入有機相的量多 在實際工作中 一般要求D至少大于10 15 27 10 3 萃取率E 萃取效率和分配比的關系是 式中Vw Vo稱為相比 萃取率由分配比和相比決定 15 27 10 在實際分離工作中 萃取率E最有意義 最常采用 等體積溶劑進行萃取 即相比為1 此時萃取率可寫成 如果D值較小而要得到較高的萃取效率 可以采取連續(xù)多次萃取 一次萃取 E 90 以上 D 10E 90 以上 D 100 15 27 10 n次萃取后 式中 n為萃取次數(shù) m為被萃取物質的總量 mn為經(jīng)n次萃取后留在水相中被萃取物質的量 Vw為水相體積 Vo為每次萃取所用有機溶劑的體積 15 27 10 例2 用8 羥基喹啉氯仿溶液 于pH 7 0時從水溶液中萃取La3 已知它在兩相中的分配比D 43 現(xiàn)取含La3 為lmg mL 1的水溶液20 00mL 用20 00mL萃取液 計算一次萃取和分兩次萃取 每次10 00mL 的萃取效率 解 一次萃取 15 27 10 兩次萃取 上例結果說明 用同樣數(shù)量的萃取液 分多次萃取比一次萃取的效率高 15 27 10 2 重要的萃取體系 根據(jù)組分的性質不同 萃取體系分 用于萃取的有機溶劑稱為萃取溶劑 簡單分子萃取體系螯合物萃取體系離子締合物萃取體系溶劑化合物萃取體系 15 27 10 3 萃取條件的選擇 萃取溶劑的選擇 溶液酸度的選擇 其它試劑的選擇 4 萃取操作 15 27 10 二 固相萃取法Solidphaseextraction SPE 固相萃取 液 固分離分離載體 一般為硅氧基甲烷 顆粒直徑40 80 m分離原理 利用樣品中被分離組分與萃取柱中固定相的作用力 吸附 分配和離子交換等 不同而進行分離 固相萃取柱 15 27 10 固相萃取裝置 由柱管 篩板和固定相三部分組成 15 27 10 圖2 3固相萃取過程 15 27 10 選適宜SPE管 加入樣品溶液到載體 洗滌除去共存物 洗脫待分離物質 潤濕載體 固相萃取法一般程序為 固相萃取柱 15 27 10