抗血清的制備實驗

免疫血清的制備,原理：抗原 抗體,刺激機(jī)體,綜 合 性實驗,刺激機(jī)體,產(chǎn)生,選擇合適的抗原,分離純化抗原,選擇免疫動物,確定免疫方案和程序,免疫動物,采血分離血清,抗血清的純化與鑒定,抗血清制備的基本流程,設(shè)計實驗方案的設(shè)計,1.設(shè)計本實驗的理由（實驗?zāi)康模?.實驗方案設(shè)計。3. 可行性（理論、人員、實驗條件等）。4.創(chuàng)新性。5.本實驗要解決的主要問題。6.預(yù)期目標(biāo)。每個組交一份實驗方案（3-4個同學(xué)一組）,論文式實驗報告,一、題目的選擇1、準(zhǔn)確、具體、簡潔、醒目，使人一目了然，引起重視 2、作者與單位(班級)，并注明所在班級和指導(dǎo)教師姓名。3、摘要和關(guān)鍵詞 摘要是對論文主要內(nèi)容和觀點的概括,論文式實驗報告,二、關(guān)鍵詞又稱主題詞或索引詞，一篇論著(論文)一般選用25個關(guān)鍵詞,論文式實驗報告,三、引言(前言)引言是論文正文的開場白 1、引起讀者對本論文的興趣。2、為讀者提供理解本論文所需的背景資料 。,論文式實驗報告,四、材料與方法材料1、實驗對象2、實驗材料3、實驗分組4、實驗過程和方法6、數(shù)據(jù)處理等內(nèi)容。,論文式實驗報告,五、結(jié)果：結(jié)果是實驗研究成果的結(jié)晶,論文式實驗報告,六、討論 1.11.21.3,對實驗結(jié)果解釋和評價,論文式實驗報告,七、參考文獻(xiàn),期刊：著者文章名刊物名稱，卷或年(期)：文章的起訖頁碼書籍：編著者書名版本出版地：出版者，年份,一、顆粒性抗原的制備 （2%5%RBC的制備）,（1）靜脈采血2-3ml，注入抗凝管中，輕輕混勻。（2）洗滌RBC 將上述抗凝血移至10ml試管中，加入NS 6-7ml，混勻， 2500r/min離心5min,去上清。重復(fù)上述操作三次，最后一次去上清后，將紅細(xì)胞配制成2%5%的RBC懸液。,2、取上述RBC懸液1ml免疫家兔。免疫部位：靜脈、皮內(nèi)、皮下等。每只兔子免疫810點，每點0.1ml左右。每隔24天免疫一次。,1班免疫時間表,每隔2天免疫一次,2班免疫時間表,每隔3天免疫一次,3班免疫時間表,每隔4天免疫一次,3、心臟采血10ml，凝固后，分離血清（2000轉(zhuǎn)/min,5分鐘)。4、取兩支小試管并以A、B標(biāo)記之，將上述血清一半加入A管，另一半加入B管。將A管置于56水浴箱30分鐘（滅活補(bǔ)體）。,5、抗血清效價的鑒定。凝集試驗和溶血反應(yīng),凝 集 反 應(yīng),實驗原理,指顆粒性抗原(RBC)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,試管凝集試驗過程,1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。,3.向第一支試管中加入A管血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對照管。至此，第17管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：81：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗中常用的稀釋方法。,4.向每管加入200ul 2%RBC懸液，此時每管的液體總量為400ul ，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37 30min。(取出試管1500r/s 30秒)觀察結(jié)果。,試管凝集操作程序(倍比稀釋法),棄去,單位：uL,結(jié)果判斷,選擇適當(dāng)?shù)墓獍祵Ρ缺尘?，先不要振搖，觀察管底凝集物的范圍和上清液的濁度。然后輕輕搖動試管，注意觀察凝集顆粒的大小、均勻度等。每一試管的觀察，都應(yīng)與對照管進(jìn)行比較。鹽水對照管誚無凝集現(xiàn)象，輕輕搖動試管則RBC分散成均勻混濁；而凝集塊則沉于管底，輕搖時不易散開，凝集程度通常以“+”表示：,“4+”很強(qiáng)，全部RBC凝集，凝集塊全部沉于管底，液體澄清。“3+”強(qiáng)，RBC大部分凝集并沉于管底，液體稍混濁。“2+”中等強(qiáng)度，RBC大約一半凝集，液體較混濁。“+”弱，僅少量RBC凝集，液體明顯混濁。“-”不凝集，液體混濁與對照管相同。只要待測血清管出現(xiàn)“2+”以上的凝集現(xiàn)象，即可判斷為反應(yīng)陽性；以出現(xiàn)“2+”凝集的最大稀釋度為待測血清的抗體效價。,溶 血 試 驗,實驗原理,溶血反應(yīng)是指補(bǔ)體參與的抗體致紅細(xì)胞的溶解反應(yīng).參與反應(yīng)的成分有紅細(xì)胞、抗紅細(xì)胞抗體，也稱溶血素、補(bǔ)體。,溶血反應(yīng)實驗過程,1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。,3.向第一支試管中加入血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對照管。至此，第17管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：81：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗中常用的稀釋方法。,4.向每管加入200ul 2%RBC懸液，此時每管的液體總量為400ul ，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37 30min。觀察結(jié)果。,溶血反應(yīng)操作程序