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免疫血清的制備,原理:抗原 抗體,刺激機體,綜 合 性實驗,刺激機體,產(chǎn)生,選擇合適的抗原,分離純化抗原,選擇免疫動物,確定免疫方案和程序,免疫動物,采血分離血清,抗血清的純化與鑒定,抗血清制備的基本流程,設計實驗方案的設計,1.設計本實驗的理由(實驗目的)。2.實驗方案設計。3. 可行性(理論、人員、實驗條件等)。4.創(chuàng)新性。5.本實驗要解決的主要問題。6.預期目標。每個組交一份實驗方案(3-4個同學一組),論文式實驗報告,一、題目的選擇1、準確、具體、簡潔、醒目,使人一目了然,引起重視 2、作者與單位(班級),并注明所在班級和指導教師姓名。3、摘要和關鍵詞 摘要是對論文主要內(nèi)容和觀點的概括,論文式實驗報告,二、關鍵詞又稱主題詞或索引詞,一篇論著(論文)一般選用25個關鍵詞,論文式實驗報告,三、引言(前言)引言是論文正文的開場白 1、引起讀者對本論文的興趣。2、為讀者提供理解本論文所需的背景資料 。,論文式實驗報告,四、材料與方法材料1、實驗對象2、實驗材料3、實驗分組4、實驗過程和方法6、數(shù)據(jù)處理等內(nèi)容。,論文式實驗報告,五、結果:結果是實驗研究成果的結晶,論文式實驗報告,六、討論 1.11.21.3,對實驗結果解釋和評價,論文式實驗報告,七、參考文獻,期刊:著者文章名刊物名稱,卷或年(期):文章的起訖頁碼書籍:編著者書名版本出版地:出版者,年份,一、顆粒性抗原的制備 (2%5%RBC的制備),(1)靜脈采血2-3ml,注入抗凝管中,輕輕混勻。(2)洗滌RBC 將上述抗凝血移至10ml試管中,加入NS 6-7ml,混勻, 2500r/min離心5min,去上清。重復上述操作三次,最后一次去上清后,將紅細胞配制成2%5%的RBC懸液。,2、取上述RBC懸液1ml免疫家兔。免疫部位:靜脈、皮內(nèi)、皮下等。每只兔子免疫810點,每點0.1ml左右。每隔24天免疫一次。,1班免疫時間表,每隔2天免疫一次,2班免疫時間表,每隔3天免疫一次,3班免疫時間表,每隔4天免疫一次,3、心臟采血10ml,凝固后,分離血清(2000轉/min,5分鐘)。4、取兩支小試管并以A、B標記之,將上述血清一半加入A管,另一半加入B管。將A管置于56水浴箱30分鐘(滅活補體)。,5、抗血清效價的鑒定。凝集試驗和溶血反應,凝 集 反 應,實驗原理,指顆粒性抗原(RBC)與相應抗體特異結合,在適當電解質存在下,形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,試管凝集試驗過程,1.取潔凈小試管8支,排列于試管架上,依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。,3.向第一支試管中加入A管血清200ul,充分混勻,吸出200ul放入第二管,混勻后取出200ul加入第三管中,如此類推直至第七管,混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清,為生理鹽水對照管。至此,第17管的血清稀釋度分別為:1:2,1:4,1:81:128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法,為免疫試驗中常用的稀釋方法。,4.向每管加入200ul 2%RBC懸液,此時每管的液體總量為400ul ,血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻,置37 30min。(取出試管1500r/s 30秒)觀察結果。,試管凝集操作程序(倍比稀釋法),棄去,單位:uL,結果判斷,選擇適當?shù)墓獍祵Ρ缺尘埃炔灰駬u,觀察管底凝集物的范圍和上清液的濁度。然后輕輕搖動試管,注意觀察凝集顆粒的大小、均勻度等。每一試管的觀察,都應與對照管進行比較。鹽水對照管誚無凝集現(xiàn)象,輕輕搖動試管則RBC分散成均勻混濁;而凝集塊則沉于管底,輕搖時不易散開,凝集程度通常以“+”表示:,“4+”很強,全部RBC凝集,凝集塊全部沉于管底,液體澄清。“3+”強,RBC大部分凝集并沉于管底,液體稍混濁。“2+”中等強度,RBC大約一半凝集,液體較混濁?!?”弱,僅少量RBC凝集,液體明顯混濁?!?”不凝集,液體混濁與對照管相同。只要待測血清管出現(xiàn)“2+”以上的凝集現(xiàn)象,即可判斷為反應陽性;以出現(xiàn)“2+”凝集的最大稀釋度為待測血清的抗體效價。,溶 血 試 驗,實驗原理,溶血反應是指補體參與的抗體致紅細胞的溶解反應.參與反應的成分有紅細胞、抗紅細胞抗體,也稱溶血素、補體。,溶血反應實驗過程,1.取潔凈小試管8支,排列于試管架上,依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。,3.向第一支試管中加入血清200ul,充分混勻,吸出200ul放入第二管,混勻后取出200ul加入第三管中,如此類推直至第七管,混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清,為生理鹽水對照管。至此,第17管的血清稀釋度分別為:1:2,1:4,1:81:128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法,為免疫試驗中常用的稀釋方法。,4.向每管加入200ul 2%RBC懸液,此時每管的液體總量為400ul ,血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻,置37 30min。觀察結果。,溶血反應操作程序

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