基因擴增實驗室室內(nèi)質(zhì)控SOP.docx

*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本： 生效日期：臨床基因擴增實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制標準操作程序 第 8 頁 共 8 頁室內(nèi)質(zhì)量控制標準操作程序(SOP-22)1目的：了解并控制實驗室檢測的精密度的變化2適用范圍：核酸擴增熒光定量檢測，使用Line-Gene基因擴增儀實驗室3操作人：* *4操作：4.1自制室內(nèi)質(zhì)控品：a) 自制室內(nèi)質(zhì)控品來自臨床收集的已知HBV陽性血清大約（1104-6拷貝），每收到一份凍存于-20。收集到約35ml時，取出樣品，置室溫復融。將各管倒入無菌帶蓋的小三角燒瓶中充分混勻。b) 將以上的混合血清，以每管120ul，分裝于0.5ml離心管內(nèi)，分裝若干管。剩余血清根據(jù)廢物處理及生物防護操作程序處理。c) 將上述取約23管裝一小袋，其余20管裝一小袋。共分成若干小代。23管一小袋置于-20冰箱，其余置于-70超低溫冰箱保存，用完一小袋，就從-70轉(zhuǎn)移1小袋到-20冰箱備用。4.2基線測定及計算RCV：在準備開展質(zhì)控工作當月的第一天取上述23管中的三管復溶，隨病人標本一起測定，第二天取兩管復溶，隨病人標本一起測定，以后每天隨病人標本測定一管，20天后計算各項目的測定結(jié)果的 _ x、s、cv此處的cv即Rcv。RCV的計算公式：其中 _ x為RCV測定中所得23份結(jié)果的均值。表示總和。n表示結(jié)果的份數(shù),n-1為自由度。4.3繪制RCV圖a) 計算 _ x+ 2S、_ x- 2S 、 _ x+ 3S、_ x- 3S 并在質(zhì)控圖的縱坐標上標出 _ x、_ x2S、_ x3S的位置，并將其具體值標在左側(cè)標尺上。b)用紅線筆畫出 _ x2S線，用藍筆畫出 _ x3S線，即成一張“空圖”。還應填齊圖紙上方的各項，如：實驗項目、質(zhì)控品來源及批號、起止日期、主要儀器等，還應填上RCV中測定所得的X、S、CV，測定過程中的特殊情況，（附圖2）。4.4室內(nèi)質(zhì)控：a)根據(jù)上述質(zhì)控圖，取一小袋上述血清作下月及以后的質(zhì)控，每次實驗時隨病標本測定一管。b)在圖紙下方“日期”的上一行相應的日期欄內(nèi)將“測定值”按原始記錄填入，邊填寫邊核對。注意數(shù)據(jù)順序應嚴格按照實際操情況，不得顛倒。未做測定的天數(shù)在圖上留出空格，因為這樣可以真實反應情況，便于分析誤差原因。c)畫出每個檢測值所對應的圖點。4.5室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法：4.5.1描點a) 圖中_ x線為靶線，_ x2s為警告線，_ x3s為失控線。對于同一批號的質(zhì)控血清不論使用幾個月，其質(zhì)控圖均不變化。只要將圖紙上方的“起止日期”項填入每個月的實際起止日期即可。b) 每天將該批號質(zhì)控血清按有關規(guī)定程序復融隨同病人的標本同時檢測。將“日期”、“測定值”和“操作者”如實記錄在圖下方的相應位置，并按前面的方法畫出圖上的對應點，用直線將該點與前一天的點連接起來。c) 月底計算當月全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的 _ x、s、cv，并進行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。4.5.2圖形分析：失控的判斷標準：將質(zhì)控品隨日常標本共同處理并將質(zhì)控品結(jié)果如實記錄做好的RCV圖中描點。a)若結(jié)果在_ x2S線內(nèi)，報告可發(fā)出。b)若結(jié)果在 _ x2S線外和 _ x3S線以內(nèi)或出現(xiàn)連續(xù)6點以上在一側(cè)等規(guī)律變化，應向有關負責人反映并積極尋找原因，但當天檢測結(jié)果可以發(fā)出。d) 若結(jié)果在 _ x +3S線以外，則為失控，應立即報告有關負責人訊速查找原因.e) 并將失控情況、必要時復測標本，然后方可發(fā)報告。并將失控情況、查找過程及處理結(jié)果等詳細記錄登記。4.5.3通過觀察圖形的規(guī)律變化進行誤差分析，消除誤差來源a) 曲線漂移：提示有系統(tǒng)誤差，準確度發(fā)生了一次性的向上或向下改變。這種變化往往是由一個新的情況引起的。如更換不同批號的試劑，啟用新批號的質(zhì)控血清、操作規(guī)程人員的變換等。在找原因時應重點注意“漂移”前的發(fā)生了哪些變動性的因素。b) 趨勢性的變化：向下或向上的趨勢表明準確度發(fā)生了漸漸的變化。這種變化往往是由于一個逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價的降低等。c) 連續(xù)多點分布在靶值同一則：目前，一般認為質(zhì)控血清的檢測結(jié)果連續(xù)6 天以上出現(xiàn)在靶值同一則，則應迅速查找原因，爭取盡快使之回復圍繞在靶值隨機分布的狀態(tài)。因為按照統(tǒng)計學的原理，由純隨機誤差情況造成的這種可能性很小。連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則的可能性小于1.5%.因此凡出現(xiàn)連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則者均可能性存在非隨機誤差因素。如果與靶值偏離不大，不會給臨床使用帶來太大影響時，一般化驗報告可以照常填發(fā)。d) 其它規(guī)律性變化：（周期性等）。4.5.4通過圖形的資料對比進行誤差分析，消除誤差來源a) 每個月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的 _ x和s與該測定的 _ x和s進行比較。如 _ x發(fā)生了變化，說明準確度發(fā)生了變化提示有非隨機誤差存在。如果當月s不同則表明檢測的精密度發(fā)生了變化。b)將使用同一批號的質(zhì)控血清的CT值的_ x和s按月份列出。如果 _ x逐月上升， 則應考慮保存不當造成的試劑效價降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份 _ x 基本一致而s 逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應重點從操作、管理上找原因。c)在數(shù)年中，把每個月的CV和失控規(guī)律列成表，可用作檢測質(zhì)量的歷史回顧和趨勢性分析。4.6失控后的處理：4.6.1分析原始數(shù)據(jù)及初步估計失控原因：發(fā)生失控時，對同批實驗檢測的全部原始數(shù)據(jù)結(jié)合近期室內(nèi)質(zhì)控圖和平時經(jīng)驗進行分析，估計失控原因的大體方向。4.6.2對具體檢測過程進行回顧性分析，分析有無特殊情況出現(xiàn)。4.6.3通過選擇性復查進一步分析判斷失控原因，決定處理辦法。選擇性復查時應包括下述樣品，以便一次性找出原因，及時發(fā)出報告:a)失控時使用的質(zhì)控血清。b)重新打開一瓶相同批號的質(zhì)控血清。c)失控時使用的標準品。d)重新打開一瓶相同批號的標準品。e) 少數(shù)幾個病人標本（最好選擇已知病情近期曾做過該項目的病人標本）通過對復查結(jié)果的分析，找到失控原因，制定相應的解決方案，使實驗室重新在控并將失控情況、原因和解決方案在檔案中詳細記錄（見表22）。4.7該程序的變動程序：本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：檢驗科主任、室技術(shù)負責人。起 草 人批 準 人生 效 日 期年 月 日表22 臨床基因擴增檢驗實驗室PCR實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制失控原因及糾正措施記錄日期檢測項目操作人失控現(xiàn)象原因分析糾正結(jié)果審核人附圖2 室內(nèi)質(zhì)控記錄圖檢測