月季的花藥培養(yǎng)

JLSSYBYH 月季的花藥培養(yǎng) 一 被子植物的花粉發(fā)育 F 生殖細(xì)胞游離存在于營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中 GH 3細(xì)胞型花粉 生殖細(xì)胞分裂形成2個(gè)精子 游離于營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中 花粉是由花粉母細(xì)胞 小孢子母細(xì)胞 經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的 因此 花粉是單倍體的生殖細(xì)胞 花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 四分體時(shí)期 單核期 雙核期等階段 A 花粉是花粉母細(xì)胞經(jīng)有絲分裂形成的B 花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期 單核期和雙核期C 花粉發(fā)育經(jīng)歷的四分體時(shí)期與減數(shù)分裂的四分體時(shí)期含義相同D 花粉母細(xì)胞形成花粉粒中精子的過程是一系列減數(shù)分裂的過程 1 下列關(guān)于被子植物花粉的形成 說法正確的是 B 2 下列關(guān)于被子植物花粉發(fā)育的說法 不正確的是 A 被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結(jié)果B 花粉粒是在花妖中的花粉囊中形成的C 花粉粒在發(fā)育過程中 核先位于細(xì)胞中央 在移到細(xì)胞的一側(cè)D 被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期 單核期和雙核期等階段 A 二 產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑 移栽 兩種途徑之間無明顯的界限 主要取決于培養(yǎng)基中的激素的種類及其濃度配比 體細(xì)胞胚 胚狀體 在組織培養(yǎng)過程中 某些體細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu) 發(fā)育過程亦與合子胚類似 被稱為體細(xì)胞胚 胚狀體 3 下列對產(chǎn)生花粉植株途徑的敘述 不正確的是 A 花粉通過胚狀體階段直接發(fā)育成植株B 花粉先形成愈傷組織在誘導(dǎo)分化成植株C 花粉經(jīng)脫分化形成胚狀體 在分化出根 然后誘導(dǎo)生芽D 兩種途徑并無絕對的界限 主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類和濃度比例 C 1 材料的選擇不同植物同一植物的不同生理狀況 花期早期 初花期 合適的花粉發(fā)育期 單核居中期與靠邊期之間 植株生長條件 材料低溫預(yù)處理 接種密度等 三 影響花藥培養(yǎng)的因素 花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株 一般月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬 即月季的初花期 選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素 一般來說 在單核期 細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期 花藥培養(yǎng)成功率最高 為了挑選到單核期的花藥 通常選擇完全未開放的花蕾 月季的花藥培養(yǎng) 培養(yǎng)基的種類因植物的不同而有所變化 如小麥中為N6 馬鈴薯 月季中為MS 油菜中為B5培養(yǎng)基 2 培養(yǎng)基的組成 培養(yǎng)基各成分中 植物生長調(diào)節(jié)劑的水平和配比 常對誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂 生長和分化起決定作用 月季花的培養(yǎng)基配方在1000mlMS培養(yǎng)基配方中添加2 4 D0 4mgKT0 2mgIAA4mg調(diào)節(jié)PH為5 8 實(shí)驗(yàn)操作 一 材料的選取二 材料的消毒三 接種和培養(yǎng) 一 材料的選取 選擇花藥時(shí) 一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期 最常用的方法有醋酸洋紅法 但是 某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色 需采用焙花青 鉻礬法 這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色 4 用醋酸洋紅法確定花粉發(fā)育時(shí)期的原理是 A 醋酸洋紅可使細(xì)胞全部著色B 醋酸洋紅可使單核期的細(xì)胞著色C 醋酸洋紅可使花粉細(xì)胞核著色D 醋酸洋紅可進(jìn)入細(xì)胞顯示放射性標(biāo)記 C 二 材料的消毒 1 花蕾用V V為70 的酒精浸泡30秒2 無菌水清洗3 無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 1 的氯化汞溶液中2 4分鐘 也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液 5 無菌水沖洗3 5次 用于培養(yǎng)花藥 實(shí)際上多數(shù)未熟 由于它的外面有花萼 花瓣或穎片保護(hù) 通常處于無菌狀態(tài) 所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可 三 接種和培養(yǎng) 滅菌后花蕾 要在無菌條件下除去萼片和花瓣 并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上在剝離花藥時(shí) 要盡量不損傷花藥 否則接種后 容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織 同時(shí)還要徹底去除花絲 因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成 通常每瓶接種花藥7 10個(gè) 溫度控制在25 左右 不需要光照 幼小植株形成后才需要光照 一般經(jīng)過20 30天培養(yǎng)后 會發(fā)現(xiàn)花藥開裂 長出愈傷組織或釋放出胚狀體 將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上 以便進(jìn)一步分化出再生植株 如果花藥開裂釋放出胚狀體 則一個(gè)花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株 必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開 分別移植到新的培養(yǎng)基上 否則這些植株將很難分開 在花藥培養(yǎng)中 特別是通過愈傷組織形成的花粉植株 常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化 主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的 故需對培養(yǎng)出來的植株作進(jìn)一步的鑒定和篩選 植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較 植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是 培養(yǎng)基配制方法 無菌技術(shù)及接種操作等基本相同 不同之處在于 花藥培養(yǎng)的選材非常重要 需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾 花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基 花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格 這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加 課題成果評價(jià) 選材是否恰當(dāng)選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵 應(yīng)學(xué)會通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉 課題成果評價(jià) 無菌技術(shù)是否過關(guān)如果出現(xiàn)了污染