臨床免疫學(xué)補(bǔ)體檢測(cè)及應(yīng)用.doc

第十九章補(bǔ)體檢測(cè)及應(yīng)用本章考點(diǎn)1.概述2.補(bǔ)體的活化途徑3.有關(guān)補(bǔ)體測(cè)定的試驗(yàn)4.補(bǔ)體測(cè)定的應(yīng)用補(bǔ)體是存在于人和脊椎動(dòng)物正常新鮮血清及組織液中的一組具有酶樣活性的球蛋白。補(bǔ)體系統(tǒng)是補(bǔ)體加上其調(diào)節(jié)因子和相關(guān)膜蛋白共同組成一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)，稱為補(bǔ)體系統(tǒng)。補(bǔ)體系統(tǒng)參與機(jī)體的抗感染及免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)病理性反應(yīng)，是體內(nèi)重要的免疫系統(tǒng)和放大系統(tǒng)。第一節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)的組成和性質(zhì) 一、命名根據(jù)l968年WH0命名委員會(huì)對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)進(jìn)行了統(tǒng)一命名。參與補(bǔ)體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的先后順序分別稱Cl、C2、C9。Cl由Clq、Clr、Cls三種亞單位組成；補(bǔ)體系統(tǒng)旁路激活途徑及調(diào)節(jié)因子中另一些組分以英文大寫字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子等；補(bǔ)體調(diào)節(jié)成分多以其功能進(jìn)行命名，如C1抑制物、C4結(jié)合蛋白、衰變加速因子等；補(bǔ)體活化后的裂解片段以該成分的符號(hào)后面加小寫英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或復(fù)合物在其符號(hào)上劃一橫線表示，如、，滅活的補(bǔ)體片段在其符號(hào)前面加英文字母i表示，如iC3b等；對(duì)補(bǔ)體受體以其結(jié)合對(duì)象命名，如CLrR、C5Ar、對(duì)C3片段受體則用CRl、CR2CR4表示。二、分類構(gòu)成補(bǔ)體系統(tǒng)包括30余種活性成分，按其性質(zhì)和功能可以分為三大類：1.在體液中參與補(bǔ)體活化級(jí)聯(lián)反應(yīng)的各種固有成分；2.以可溶性形式或膜結(jié)合形式存在的各種補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白；3.結(jié)合補(bǔ)體片段或調(diào)節(jié)補(bǔ)體生物效應(yīng)的各種受體。三、理化性質(zhì)補(bǔ)體的大多數(shù)組分都是糖蛋白，且多屬于球蛋白，約占血清球蛋白總量的l0%；Clq，C8等為球蛋白；Cls，C9為球蛋白。正常血清中各組分的含量相差較大，C3含量最多，C2最低。各種屬動(dòng)物間血中補(bǔ)體含量也不相同，豚鼠血清中含有豐富的補(bǔ)體，故實(shí)驗(yàn)室多采用豚鼠血作為補(bǔ)體來源。補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響，如加熱、機(jī)械振蕩、酸堿、酒精等均可使其失活；在010下活性只保持34天，冷凍干燥可較長(zhǎng)時(shí)間保持其活性；加熱5630min可使血清中絕大部分補(bǔ)體組分喪失活性，稱為滅活或滅能。第二節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)的活化與調(diào)控 一、補(bǔ)體系統(tǒng)的活化補(bǔ)體系統(tǒng)的各組分在體液中通常以非活性狀態(tài)、類似酶原的形式存在，當(dāng)受到一定因素激活，才表現(xiàn)出生物活性。補(bǔ)體的激活途徑主要有兩種，即經(jīng)典途徑和替代途徑，此外尚有MBL（甘露糖結(jié)合凝集素）途徑。經(jīng)典途徑和替代途徑兩種途徑的啟動(dòng)過程不一致，但經(jīng)典途徑的激活可以導(dǎo)致替代途徑的活化，反之則不行。補(bǔ)體的其他激活途徑即甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑，簡(jiǎn)稱MBL途徑。此途徑開始于急性期蛋白與病原體的結(jié)合，而不是抗原復(fù)合物形成。1.經(jīng)典途徑：經(jīng)典途徑是以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑，補(bǔ)體C1C9共11種成分全部參與的激活途徑。除了抗原抗體復(fù)合物外，還有許多因子可激活此途徑，如非特異性凝集的Ig、細(xì)菌脂多糖、一些RNA腫瘤病毒、雙鏈DNA、胰蛋白酶、纖溶酶、尿酸鹽結(jié)晶、C-反應(yīng)蛋白等。經(jīng)典活化途徑可人為地分成識(shí)別、活化和膜攻擊3個(gè)階段。2.替代途徑：替代途徑又稱旁路途徑。它與經(jīng)典途徑的不同之處主要是越過C1、C4和C2，直接激活補(bǔ)體C3，然后完成C5C9的激活過程；參與此途徑的血清成分尚有B、D、P、H、I等因子。替代途徑的激活物主要是細(xì)胞壁成分，如內(nèi)毒素、某些蛋白水解酶、IgG4、IgA聚合物等。替代途徑是通過研究C4缺陷而仍保持補(bǔ)體系統(tǒng)活化的患者而發(fā)現(xiàn)的。二、補(bǔ)體活化的調(diào)控補(bǔ)體系統(tǒng)被激活后，進(jìn)行系統(tǒng)有序的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，參與機(jī)體的防御功能。如果補(bǔ)體系統(tǒng)活化失控，可形成過多的膜攻擊復(fù)合物而產(chǎn)生自身損傷，或過多的炎癥介質(zhì)造成病理效應(yīng)。正常機(jī)體的補(bǔ)體活化處于嚴(yán)密的調(diào)控之下，從而維持機(jī)體的自身穩(wěn)定。1.補(bǔ)體的自身調(diào)控：補(bǔ)體激活過程中生成的某些中間產(chǎn)物非常不穩(wěn)定，成為補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要自限因素。此外只有細(xì)胞表面形成的抗原抗體復(fù)合物才能觸發(fā)經(jīng)典途徑，而旁路途徑的C3轉(zhuǎn)化酶則僅在特定的物質(zhì)表面才具有穩(wěn)定性，故正常機(jī)體內(nèi)一般不會(huì)發(fā)生過強(qiáng)的自發(fā)性補(bǔ)體激活反應(yīng)，補(bǔ)體系統(tǒng)自身調(diào)控的作用在于維持機(jī)體自身的穩(wěn)定性；2.調(diào)節(jié)因子的作用：體內(nèi)存在多種可溶性膜結(jié)合的補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子，它們以特定方式與不同的補(bǔ)體成分相互作用，使補(bǔ)體的激活與抑制處于精細(xì)的平衡狀態(tài)，調(diào)節(jié)蛋白的缺失有時(shí)是造成某些疾病發(fā)生的原因。目前發(fā)現(xiàn)的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白有十余種，按其作用特點(diǎn)可分為三類：l）防止或限制補(bǔ)體在液相中自發(fā)激活的抑制劑；2）抑制或增強(qiáng)補(bǔ)體對(duì)底物正常作用的調(diào)節(jié)劑；3）保護(hù)機(jī)體組織、細(xì)胞免遭補(bǔ)體破壞作用的抑制劑。第三節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)的生物活性 補(bǔ)體是機(jī)體重要的免疫效應(yīng)系統(tǒng)之一。補(bǔ)體系統(tǒng)活化可以溶解細(xì)胞，在活化過程中產(chǎn)生的中間復(fù)合物及某些片段也具有多種多樣的生物活性，所以補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)機(jī)體的作用是多方面的，既可參與機(jī)體的防御效應(yīng)和自身穩(wěn)定，亦可引起免疫損傷。1.溶細(xì)胞作用：不論何種途徑活化，補(bǔ)體系統(tǒng)都能對(duì)其粘附的細(xì)胞產(chǎn)生溶解作用。補(bǔ)體的溶細(xì)胞反應(yīng)不僅可以抗菌，也可抵抗其他微生物及寄生蟲的感染。另一方面，補(bǔ)體也常常引起病理性反應(yīng)，如異型輸血時(shí)的溶血反應(yīng)、自身免疫病時(shí)細(xì)胞損傷等；2.免疫復(fù)合物的清除：補(bǔ)體在活化過程中生成的中間產(chǎn)物，對(duì)抗原抗體復(fù)合物有很強(qiáng)的親和力，可共價(jià)結(jié)合到免疫復(fù)合物上，然后通過補(bǔ)體的其他效應(yīng)對(duì)免疫復(fù)合物產(chǎn)生抑制或清除作用。常通過以下幾種方式對(duì)免疫復(fù)合物的清除：1）吞噬調(diào)理作用；2）免疫粘附作用；3）免疫復(fù)合物抑制作用；3.炎癥介質(zhì)作用：補(bǔ)體是機(jī)體重要的炎癥介質(zhì)之一，可通過過敏毒素作用、趨化作用、激肽樣作用等多種途徑引起炎癥；4.中和與溶解病毒作用：其機(jī)理可能是阻止病毒對(duì)易感細(xì)胞的吸附和穿入，并可能干擾病毒在細(xì)胞中的增殖。第四節(jié)補(bǔ)體的合成與代謝 1.補(bǔ)體編碼基因：補(bǔ)體成分十分復(fù)雜，各編碼基因分散在不同的染色體上，補(bǔ)體成分的許多蛋白質(zhì)分子具有同分異構(gòu)現(xiàn)象，顯示其遺傳多態(tài)性。幾乎所有補(bǔ)體蛋白均為單位點(diǎn)常染色體等顯性遺傳。編碼人C4、C2、B因子的基因在第6對(duì)染色體短臂上，與MHC的基因相鄰，命名為類組織相容性基因；與C3、C4反應(yīng)的許多調(diào)節(jié)蛋白的基因被組合在一起，在第一對(duì)染色體上形成一個(gè)超基因家族，此家族編碼的蛋白有：H因子、C4bp、DRF、CRI、CR2等。2.補(bǔ)體合成的器官及細(xì)胞：盡管一些器官和組織產(chǎn)生不同補(bǔ)體成分，但產(chǎn)生補(bǔ)體的主要器官是肝臟，主要細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。3.補(bǔ)體的代謝平衡：補(bǔ)體成分在血液中可被蛋白酶直接降解，病理情況下補(bǔ)體的代謝速率反映了補(bǔ)體的激活程度，補(bǔ)體活化后的酶解片段迅速失活，并很快從循環(huán)中消除，沉著于細(xì)胞表面及組織中被消耗或分解。如C3在C3轉(zhuǎn)化酶作用下，生成C3a和C3b，C3降解為iC3b，再降解為C3c、C3dg。最后降解為C3d和C3g。第五節(jié)補(bǔ)體總活性測(cè)定 （一）實(shí)驗(yàn)原理補(bǔ)體最主要的活性是溶細(xì)胞作用。特異性抗體與紅細(xì)胞結(jié)合后可激活補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分滲入，引起紅細(xì)胞腫脹而發(fā)生溶血。補(bǔ)體溶血程度與補(bǔ)體的活性相關(guān)，但非直線關(guān)系。在一個(gè)適當(dāng)?shù)摹⒎€(wěn)定的反應(yīng)系統(tǒng)中，溶血反應(yīng)對(duì)補(bǔ)體的劑量依賴呈一特殊的S形曲線。如以溶血百分率為縱坐標(biāo)，相應(yīng)血清量為橫坐標(biāo)，可見在輕微溶血和接近完全溶血處，對(duì)補(bǔ)體量的變化不敏感。S形曲線在30%70%之間最陡，幾乎呈直線，補(bǔ)體量的少許變動(dòng)，也會(huì)造成溶血程度的較大改變，即曲線此階段對(duì)補(bǔ)體量的變化非常敏感。因此，實(shí)驗(yàn)常以50%溶血作為終點(diǎn)指標(biāo)，它比l00%溶血更為敏感，這一方法稱為補(bǔ)體50%溶血實(shí)驗(yàn)即CH50。（二）檢測(cè)試劑綿羊紅細(xì)胞；溶血素；稀釋緩沖液。（三）方法評(píng)價(jià)CH50試驗(yàn)是測(cè)定經(jīng)典途徑總補(bǔ)體溶血活性，所反映的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。方法簡(jiǎn)便、快速，但敏感性較低。補(bǔ)體的溶血活性除與試驗(yàn)中反應(yīng)體積成反比外，還與反應(yīng)所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、鈣鎂濃度、綿羊紅細(xì)胞數(shù)量和反應(yīng)溫度有一定關(guān)系。緩沖液pH和離子強(qiáng)度增高，補(bǔ)體活性下降，雖可穩(wěn)定溶血系統(tǒng)，但過量則反而抑制溶血反應(yīng)，故實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)反應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)應(yīng)嚴(yán)加控制，統(tǒng)一步驟。（四）臨床意義CH50法檢測(cè)是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性，所反映的主要是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。如果測(cè)定值過低或者完全無活性，首先考慮補(bǔ)體缺陷，可分別檢測(cè)C4、C2、C3和C5等成分的含量；嚴(yán)重肝病時(shí)血漿蛋白合成能力受損。營養(yǎng)不良時(shí)蛋白合成原料不足，也可以不同程度地引起血清補(bǔ)體水平下降。在患系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病時(shí)，血清補(bǔ)體水平隨病情發(fā)生變化。疾病活動(dòng)期補(bǔ)體活化過度，血清補(bǔ)體水平下降；病情穩(wěn)定后補(bǔ)體水平又反應(yīng)性增高。因此補(bǔ)體檢測(cè)常可作為自身免疫病診斷或是否有疾病活動(dòng)的參考指標(biāo)。細(xì)菌感染特別是革蘭陰性細(xì)菌感染時(shí)，常因補(bǔ)體旁路途徑的活化過度引起血清補(bǔ)體水平降低。心肌梗死、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊娠等情況下血清補(bǔ)體水平常升高。 第六節(jié)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是用免疫溶血機(jī)制做指示系統(tǒng)，來檢測(cè)另一反應(yīng)系統(tǒng)抗原或抗體的試驗(yàn)。早在1906年Wasseramann就將其應(yīng)用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應(yīng)。1.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理、類型：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中有5種成分參與反應(yīng)，分屬3個(gè)系統(tǒng)：1）反應(yīng)系統(tǒng)；2）補(bǔ)體系統(tǒng)；3）指示系統(tǒng)。其中反應(yīng)系統(tǒng)（抗原與抗體）與指示系統(tǒng)（綿羊紅細(xì)胞與溶血素）爭(zhēng)奪補(bǔ)體系統(tǒng)。如先加入反應(yīng)系統(tǒng)和補(bǔ)體，給其以優(yōu)先結(jié)合補(bǔ)體的機(jī)會(huì)，如果反應(yīng)系統(tǒng)中存在待測(cè)的抗體（或抗原），則抗原、抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補(bǔ)體，再加入指示系統(tǒng)（SRBL與相應(yīng)溶血素），由于反應(yīng)中無游離的補(bǔ)體而不出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽性。如待測(cè)系統(tǒng)中不存在待檢的抗體或（抗原），則在液體中仍有游離的補(bǔ)體存在，當(dāng)加入指示劑時(shí)會(huì)出現(xiàn)溶血，為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰性。因此補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可用已知抗原來檢測(cè)相應(yīng)抗體，或用已知抗體來檢測(cè)相應(yīng)抗原。2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的臨床應(yīng)用：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可應(yīng)用在以下幾個(gè)方面：1）傳染病診斷，病原性抗原及相應(yīng)抗體的檢測(cè)；2）其他抗原的檢測(cè)，如腫瘤相關(guān)抗原、血液中的蛋白質(zhì)鑒定，HLA分型等；3）自身抗體的檢測(cè)等。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)為靈敏度高、特異性強(qiáng)、應(yīng)用面廣、易于普及。缺點(diǎn)為試驗(yàn)參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁瑣并且要求十分嚴(yán)格，容易出現(xiàn)錯(cuò)誤。第七節(jié)單個(gè)補(bǔ)體成分測(cè)定在30多種補(bǔ)體成分中，主要檢測(cè)C3、C4、Clq、B因子和Cl酯鎂抑制物。測(cè)定方法分為免疫溶血法及免疫化學(xué)法。1.免疫溶血法溶血法主要根據(jù)抗原與其特異性抗體（IgG、IgM型）結(jié)合后可激活補(bǔ)體的經(jīng)典途徑，導(dǎo)致細(xì)胞溶解。該方法中抗原為SRBC，抗體為兔或馬抗SRBC的抗體，即溶血素。將兩者組合作為指示系統(tǒng)參與反應(yīng)。試驗(yàn)中有兩組補(bǔ)體參與，一組是作為實(shí)驗(yàn)反應(yīng)系統(tǒng)的補(bǔ)體，此類試劑可選用先天缺乏某單一補(bǔ)體成分的動(dòng)物或人血清，如某些人可天然缺乏C2、豚鼠缺C5、家兔缺C6；也可利用化學(xué)試劑人為滅活正常血清中某種成分制備缺乏該成分的補(bǔ)體試劑，加入致敏SRBC（檢測(cè)經(jīng)典途徑補(bǔ)體成分用）或總紅細(xì)胞RRBC（檢測(cè)替代途徑補(bǔ)體成分用）指示系統(tǒng)后，此時(shí)由于補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)體系中缺乏某種補(bǔ)體成分，不能使補(bǔ)體連續(xù)激活，不發(fā)生溶血。另一組為待測(cè)血清中的補(bǔ)體，當(dāng)加入待測(cè)血清，使原來缺乏的成分得到補(bǔ)充，補(bǔ)體成分齊全，級(jí)聯(lián)反應(yīng)恢復(fù)，產(chǎn)生溶血。溶血程度與待測(cè)補(bǔ)體成分活性有關(guān)，仍以50%溶血為終點(diǎn)。免疫溶血法無須特異儀器與設(shè)備，快速，但敏感性較低，影響因素多。該法不是檢測(cè)某補(bǔ)體成分的具體含量，而是檢測(cè)其活性，在某些需了解該成分活性情況下，本試驗(yàn)適用。2.免疫化學(xué)法免疫化學(xué)法分為單向免疫擴(kuò)散法、火箭免疫電泳、透射比濁法和散射比濁法。前兩種方法已逐漸趨于淘汰，后兩種方法通過儀器對(duì)補(bǔ)體的C3、C4、B因子等單個(gè)成分進(jìn)行測(cè)定。待測(cè)血清標(biāo)本的C3、C4成分適當(dāng)稀釋后與檢測(cè)用相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，反應(yīng)介質(zhì)中的PEG可使該復(fù)合物沉淀，儀器對(duì)復(fù)合物產(chǎn)生的光散射或透射信號(hào)進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)，并換算成所測(cè)成分的濃度單位。自動(dòng)免疫化學(xué)法檢測(cè)補(bǔ)體成分方法簡(jiǎn)單、特異、重復(fù)性好，可反映所測(cè)補(bǔ)體成分的絕對(duì)值，并能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化流程管理和質(zhì)控，是當(dāng)前主要檢測(cè)方法。第八節(jié)補(bǔ)體測(cè)定的應(yīng)用檢測(cè)補(bǔ)體的單個(gè)成分及補(bǔ)體的活性對(duì)于機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能評(píng)價(jià)，疾病的診斷與治療，流行病學(xué)調(diào)查等均有重要作用。同時(shí)根據(jù)補(bǔ)體具有的溶細(xì)胞活性和聯(lián)級(jí)反應(yīng)的性質(zhì)，可利用補(bǔ)體作為一種試劑，參與很多實(shí)驗(yàn)反應(yīng)，補(bǔ)體檢測(cè)技術(shù)可應(yīng)用于下述情況。1.診斷病原體感染，如華氏反應(yīng)（已淘汰）診斷梅毒螺旋體感染。2.檢測(cè)補(bǔ)體的功能，如CH50和AH50試驗(yàn)。3.補(bǔ)體單個(gè)成分及其裂解產(chǎn)物的測(cè)定，如Clq、C3、CA、C3a和補(bǔ)體受體的測(cè)定等。4.相關(guān)疾病時(shí)補(bǔ)體的檢測(cè)（1）免疫性疾?。喝缱陨砻庖卟r(shí)Cl、C2、C3、C4和HF等缺陷；變態(tài)反應(yīng)如型超敏反應(yīng)為免疫復(fù)合物型，其中C3a、C5a等過敏毒素， 等趨化因子的作用導(dǎo)致組織損傷。（2）與補(bǔ)體有關(guān)的遺傳性疾?。喝鏑3缺陷導(dǎo)致嚴(yán)重感染；Cl抑制物缺陷與遺傳性血管性水腫；細(xì)胞表面CRl缺陷與CIC清除障礙（SLE）；If、Hf缺陷與腎小球腎炎；DAF缺陷與陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿等。（3）補(bǔ)體含量顯著降低的疾?。喝?）消耗增多見于SLE、自身免疫性溶血性貧血、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)；2）細(xì)菌感染，特別是革蘭陰性菌感染時(shí)；3）大量喪失見于大面積燒傷、大出血和腎病綜合征等；4）合成不足則見于急慢性肝炎、肝硬化、肝細(xì)胞癌患者和營養(yǎng)不良等。（4）高補(bǔ)體血癥：少見。主要見于感染恢復(fù)期和某些惡性腫瘤患者，常為C4、C2、C3和C9的升高。5.補(bǔ)體參與的試驗(yàn)：即利用補(bǔ)體作為試劑而設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)，例如HLA分型的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDCC）。這類試驗(yàn)還有脂質(zhì)體免疫試驗(yàn)、免疫粘連血凝試驗(yàn)、溶血空斑技術(shù)、膠固素結(jié)合試驗(yàn)、Clq結(jié)合試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。6.流行病學(xué)調(diào)查：如補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)用于流行病學(xué)調(diào)查；CDCC用于人群HLA分布頻率的調(diào)查等。7.補(bǔ)體應(yīng)用于臨床治療后的檢測(cè)。習(xí)題86 關(guān)于補(bǔ)體旁路激活途徑的敘述，錯(cuò)誤的是A.激活物是細(xì)菌壁成分B.從C3激活開始C.發(fā)揮效應(yīng)比經(jīng)典途徑晚D.有激活效應(yīng)的擴(kuò)大E.在感染后期發(fā)揮作用答疑編號(hào)500734190201正確答案E答案解析在感染前期就發(fā)揮作用。習(xí)題87 實(shí)驗(yàn)室滅活補(bǔ)體最常用的方法是A.56，30minB.65，30minC.95，10minD.紫外線照射E.添加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿答疑編號(hào)500734190202正確答案A習(xí)題88 關(guān)于補(bǔ)體的敘述，正確的是A.對(duì)熱穩(wěn)定B.含量與抗原刺激無關(guān)C.由多種細(xì)胞產(chǎn)生D.是存在正常血清的一組球蛋白E.兩條激活途徑有相同的末端效應(yīng)答疑編號(hào)500734190203正確答案B、C、D、E習(xí)題89 具有趨化作用的補(bǔ)體裂解物有A.C2aB.C3aC.C4aD.C5aE.C3b答疑編號(hào)500734190204正確答案B、D、E習(xí)題90 補(bǔ)體的生物學(xué)作用包括A.調(diào)理作用B.免疫粘附作用C.免疫調(diào)節(jié)作用D.炎癥介質(zhì)作用E.溶細(xì)胞作用答疑編號(hào)500734190205正確答案A、B、C、D、E習(xí)題91 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)前的抗原抗體方陣滴定的目的是A.選擇抗原抗體最佳比例B.使抗原抗體復(fù)合物形成最少C.使抗原抗體復(fù)合物結(jié)合補(bǔ)體的量最少D.使抗原抗體復(fù)合物結(jié)合補(bǔ)體的量最多E.避免抗原抗體復(fù)合物太多答疑編號(hào)500734190206正確答案A答案解析此題超出教材內(nèi)容。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)分試劑滴定和正式試驗(yàn)兩部分。前者又往往直接影響試驗(yàn)的成敗。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，抗原與抗體按一定比例結(jié)合，因而，應(yīng)通過預(yù)試驗(yàn)選擇兩者適當(dāng)比例。目前主要采取方陣法進(jìn)行滴定，以選擇抗原抗體最佳比例。習(xí)題92 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，補(bǔ)體最主要的特性是A.與抗原結(jié)合B.與抗體結(jié)合C.與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合D.溶解紅細(xì)胞E.溶解抗原抗體復(fù)合物結(jié)合答疑編號(hào)500734190207正確答案D第二十章自身抗體檢測(cè)及應(yīng)用本章考點(diǎn)1.概念2.自身抗體的特性、概念3.常見自身抗體的檢測(cè)4.自身抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用自身免疫：當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)受某種因素作用使自身免疫耐受削弱或破壞時(shí)，免疫系統(tǒng)會(huì)對(duì)自身成分包括：正?；蜃冃缘慕M織、器官、細(xì)胞、蛋白質(zhì)或酶類等自身抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，出現(xiàn)自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞的這種現(xiàn)象稱為自身免疫。自身免疫性疾?。寒?dāng)某種原因使自身免疫應(yīng)答過分強(qiáng)烈時(shí)，也會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的自身組織、器官損傷或功能障礙，這種病理狀態(tài)稱為自身免疫性疾病。自身抗體；血循環(huán)中針對(duì)自身組織、器官、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)成分的抗體稱為自身抗體。正常人血清中可有多種微量的自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞，它能清除體內(nèi)衰老細(xì)胞而起到免疫穩(wěn)定的效應(yīng)。第一節(jié)自身抗體的特性自身抗體是自身免疫性疾病的重要標(biāo)志。每種自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗體譜。患者血液中存在高效價(jià)自身抗體是自身免疫性疾病的特點(diǎn)之一，也是臨床確診自身免疫性疾病的重要依據(jù)。產(chǎn)生自身抗體的抗原包括以下幾種：化學(xué)修飾的組織抗原；與自身組織成分存在交叉反應(yīng)的外來抗原；隱蔽抗原；自身細(xì)胞HLA-DR抗原的表達(dá)以及低分化的組織抗原等，在一定條件下，均可刺激機(jī)體產(chǎn)生自身抗體。自身抗體與疾病的關(guān)系：某些自身抗體對(duì)某種疾病的診斷具有高度特異性，已經(jīng)成為該病的血清標(biāo)記性抗體或特異性抗體；某些自身抗體與疾病的活動(dòng)性有相關(guān)性；少數(shù)自身抗體參與了免疫病理性損傷。測(cè)定自身抗體的意義：自身免疫性疾病的診斷；疾病活動(dòng)性的判斷；療效的觀察；指導(dǎo)臨床用藥等。第二節(jié)常見自身抗體的檢測(cè)自身抗體種類很多，這里只是簡(jiǎn)單介紹幾種常見的自身抗體的檢測(cè)。一、類風(fēng)濕因子（一）概念類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）是一種抗人或動(dòng)物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體?？膳c人或動(dòng)物的變性IgG結(jié)合，而不與正常IgG發(fā)生凝集，最多見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者。Rose等1984年在RA（rheumatoid arthritis）患者血清中發(fā)現(xiàn)RF。RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型為主要類型。（二）檢測(cè)方法1.膠乳凝集試驗(yàn)：以IgG吸附于聚苯乙烯膠乳顆粒上，如血清中含有RF，可與乳膠顆粒出現(xiàn)凝集反應(yīng)。該法只能定性或半定量，靈敏度及特異性不高，只能檢測(cè)IgM型RF。2.速率散射比濁法：定量檢測(cè)、準(zhǔn)確、快速，準(zhǔn)確性和敏感性高于膠乳凝集實(shí)驗(yàn)。也只能檢測(cè)IgM型RF。3.ELISA法：可檢出不同Ig類型的RF，在酶標(biāo)記抗體時(shí)，分別標(biāo)記IgG、IgA或IgM。（三）臨床應(yīng)用RF主要見于類風(fēng)濕，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中的檢出率很高，RF陽性支持早期RA的傾向性診斷，對(duì)年輕女性應(yīng)進(jìn)行RA和風(fēng)濕熱的鑒別；而對(duì)非活動(dòng)期RA的診斷，需參考病史。但RF也像ANA一樣，并不是RA獨(dú)有的特異性抗體。在SLE患者約有50%RF陽性，在其他結(jié)締組織病如SS、硬皮病、慢性活動(dòng)性肝炎以及老年人中均可有不同程度的陽性率。部分正常人也可出現(xiàn)。但RF滴度或含量一般較低（80IUml伴嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙者，提示預(yù)后不良。IgG型RF：與患者滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)的癥狀密切相關(guān)。正常人以及非RA患者中很難檢出。IgA型RF：10%RA可檢出，為RA臨床活動(dòng)的指標(biāo)，與骨質(zhì)破壞以及關(guān)節(jié)炎癥狀的嚴(yán)重程度顯著相關(guān)。IgE型RF：在關(guān)節(jié)液、胸水中高于血清水平。二、抗核抗體抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）是以自身真核細(xì)胞成分作為靶抗原的一組自身抗體的總稱，泛指各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。迄今已發(fā)現(xiàn)20余種。性質(zhì)主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE，可與不同來源的細(xì)胞核起反應(yīng)，無器官特異性和種屬特異性。ANA主要存在于血清中，也可存在于胸水、關(guān)節(jié)滑膜液以及尿液等體液中。ANA可見于多種疾病，主要存在于自身免疫性疾病患者血清中，如SLE、SS、MCTD、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。也可見于慢性肝病、病毒感染以及正常老年人、妊娠婦女等。ANA陰性不能排除自身免疫性疾病的診斷；陽性也不一定是自身免疫性疾病。由于細(xì)胞核成分的復(fù)雜性，不同成分的抗原性也不同；因此就會(huì)有多種不同類型的ANA。ANA在不同的疾病中呈現(xiàn)不同的組合，不同的疾病有自己的抗核抗體譜。有些ANA只是針對(duì)某一特定成分，只在某一疾病中出現(xiàn)，成為該病的血清標(biāo)志性抗體。ANA是一個(gè)重要的篩選試驗(yàn)。分類：按理化特性和抗原分布部位分為四大類。包括抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體。命名：1.根據(jù)抗原化學(xué)名稱命名：例如抗dsDNA、抗RNP。2.以第一位檢出患者命名：例如抗Sm、抗Ro、抗La抗體。3.以相關(guān)疾病命名：例如抗SSA、抗SSB抗體。（一）檢測(cè)方法由于ANA的復(fù)雜性及多樣性，故測(cè)定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴(kuò)散、對(duì)流免疫電泳及免疫印跡技術(shù)等。常用間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）作為總的ANA篩選試驗(yàn)。鼠肝常用于檢測(cè)抗核抗體，但近十年來多被HEp-2細(xì)胞所代替，這是因?yàn)镠Ep-2細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：人源性；細(xì)胞核大；分裂期細(xì)胞多；可大批量培養(yǎng)。當(dāng)然，單個(gè)細(xì)胞不可能替代組織切片，所以鼠組織切片仍繼續(xù)用于自身抗體的檢測(cè)。放射免疫法：常用于檢測(cè)抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。Farr法的原理為用同位素標(biāo)記DNA，被標(biāo)記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結(jié)合，經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結(jié)合活性，一般結(jié)合率大于20%為陽性。過濾法是在分離結(jié)合物時(shí)用纖維素酯薄膜濾器（孔徑為0.45m）進(jìn)行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結(jié)合的復(fù)合物被阻留在濾膜上。ELISA法：臨床上主要是應(yīng)用間接ELISA檢測(cè)抗dsDNA抗體，其重復(fù)性及敏感性均較對(duì)流免疫電泳及雙擴(kuò)散為高。目前已有試劑盒供應(yīng)。免疫印跡（immunoblotting）法：先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然后將這些帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，最后用酶標(biāo)抗體或放射性同位素標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測(cè)和分析。由于該試驗(yàn)不需純化的單個(gè)抗原，可在同一固相上作多項(xiàng)分析檢測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測(cè)，如檢測(cè)抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。另外，還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴(kuò)散法、對(duì)流免疫電泳法、間接血凝法和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。這些試驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)條件比較低，但敏感性也比較低。均質(zhì)型斑點(diǎn)型核仁型核膜型（二）常見ANA熒光圖形及臨床意義1.均質(zhì)型：多是由抗DNP抗體所引起。也可由核小體抗體和抗雙鏈DNA抗體引起。主要見于SLE，藥物性狼瘡。2.斑點(diǎn)型：是由抗ENA抗體所引起。主要見于SLE、MCTD、PSS、SS等。高滴度的斑點(diǎn)型常見于MCTD。3.周邊型（又稱核膜型）：主要由抗dsDNA的抗體所引起。主要見于SLE。特別是活動(dòng)期患者。4.核仁型：主要見于硬皮病。相關(guān)抗體是抗核仁特異的低分子量RNA等。5.著絲點(diǎn)型：主要見于局限性硬皮病及CREST綜合征。主要的靶抗原是著絲點(diǎn)B抗原。（三）抗雙鏈DNA抗體的檢測(cè)方法檢測(cè)抗DNA抗體的方法有多種，如ELISA、IIF、金標(biāo)法、免疫印記法、放免法等。其中最特異敏感的是應(yīng)用錐蟲或血鞭毛蟲（如綠蠅短膜蟲）作基質(zhì)測(cè)定抗dsDNA抗體。因?yàn)檫@些血寄生蟲的動(dòng)基體內(nèi)含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾；在陽性結(jié)果時(shí)，可見鞭毛一端的動(dòng)基體顯示清晰的熒光。因此該試驗(yàn)用于測(cè)定抗dsDNA抗體具有特異性強(qiáng)和敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。另外，短膜蟲對(duì)人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來源方便，值得推廣?？筪sDNA抗體是SLE的特征性標(biāo)記抗體，是SLE活動(dòng)期的重要指標(biāo)?？贵w滴度的動(dòng)態(tài)檢測(cè)對(duì)療效的監(jiān)測(cè)提供了有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室手段?？筪sDNA抗體對(duì)診斷SLE特異性較高；可達(dá)95%以上，但敏感性較低，僅為30%50%，因此，抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷?？筪sDNA抗體在SLE的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用。如狼瘡腎炎；血管炎；皮膚的蝶形紅斑等均與該抗體有關(guān)。三、抗ENA抗體譜（一）概述ENA（extractable nuclear antigens）是可提取性核抗原的總稱。ENA是細(xì)胞內(nèi)許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。ENA主要包括Sm、RNP、SSA、SSB、Jo-1、Scb-70等抗原。不同的自身免疫病可以產(chǎn)生不同的抗ENA抗體。ENA抗體的檢測(cè)對(duì)自身免疫性疾病的診斷和鑒別診斷具有重要意義。（二）檢測(cè)方法檢測(cè)方法有多種，如免疫印跡法（immunoblotting，IBT）、ELISA、對(duì)流免疫電泳、雙擴(kuò)散、金標(biāo)法等。這里主要介紹免疫印跡技術(shù)。免疫印跡技術(shù)屬于膜載體酶免疫技術(shù)，其固相載體為吸附有抗原的硝酸纖維膜。其基本原理為從小?；蛲眯叵偬崛NA，經(jīng)過SDS-PAGE電泳分成區(qū)帶，然后轉(zhuǎn)印至硝酸纖維膜上，將待檢血清（含抗ENA抗體）加在硝酸纖維膜上，抗ENA抗體與ENA抗原結(jié)合，形成Ag-Ab復(fù)合物，加入酶標(biāo)抗人IgG，形成Ag-Ab-酶標(biāo)Ab復(fù)合物，然后加入底物顯色。與標(biāo)準(zhǔn)條帶對(duì)比判讀，可以確定不同的抗ENA抗體。免疫印跡技術(shù)不需純化抗原，靈敏度高，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，是廣泛采用的檢測(cè)抗ENA抗體的技術(shù)。圖1 ENA自身抗體譜標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照帶（三）抗ENA抗體的臨床意義1.抗Sm抗體：是SLE的血清標(biāo)志抗體，陽性率30%40%。陰性不能排除SLE的診斷?？筍m抗體水平與SLE活動(dòng)性沒有相關(guān)性，也不與臨床表現(xiàn)相關(guān)，治療后的SLE患者也可呈現(xiàn)抗Sm抗體陽性?？筍m抗體的檢測(cè)對(duì)早期或不典型的SLE以及治療后的SLE的回顧性診斷具有幫助。2.抗核RNP抗體：高滴度的抗核RNP（nRNP）抗體是MCTD診斷的重要依據(jù)。因其抗原為含有U1RNA的核蛋白復(fù)合物，故稱U1RNP。MCTD陽性率可高達(dá)95%。也可見于其他自身免疫性疾病。因?yàn)镾m與RNP為同一分子復(fù)合物（RNA-蛋白質(zhì)顆粒）中的不同抗原位點(diǎn)，因此兩種抗原具有相關(guān)性，常伴隨出現(xiàn)，單一的抗Sm抗體陽性者較少見。3.抗SSARo抗SSBLa：是干燥綜合征（SS）最常見的自身抗體，抗SSB特異性較SSA高。兩者同時(shí)檢測(cè)可提高SS的診斷率，抗SSA抗體也可見于SLE和其他自身免疫病，亞急性紅斑狼瘡患者、補(bǔ)體缺陷的SLE患者、新生兒狼瘡患者可以出現(xiàn)抗SSA抗體。IgG類抗SSA抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒后，可引起新生兒狼瘡綜合征，出現(xiàn)典型的SLE皮損?？筍SA抗體與胎兒的心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)結(jié)合，可以造成先天性心臟傳導(dǎo)阻滯。4.抗Jo-1抗體：最常見于多發(fā)性肌炎（polymyositis，PM）。在其他AID一般為陰性。PM與硬皮病重疊者陽性率較高。5.抗Scl-70抗體：幾乎僅見于進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化?。╬rogressive systemic sclerosis，PSS），陽性率40%60%，其他AID少見，是PSS的標(biāo)志性抗體。正常人為陰性。四、抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（一）概念抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，是系統(tǒng)性血管炎的血清標(biāo)志抗體，對(duì)血管炎的診斷、分類及預(yù)后具有重要意義。ANCA主要有兩型：胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）。cANCA針對(duì)的靶抗原是蛋白酶3（PR3），pANCA針對(duì)的靶抗原主要是髓過氧化物酶（MPO），其他還有乳鐵蛋白等。PR3和抗MP0抗體在參與小血管炎的發(fā)病中起重要作用。（二）ANCA的檢測(cè)方法ANCA的檢測(cè)一般應(yīng)用IIF和ELISA。IIF檢測(cè)采用酒精或甲醇固定的中性粒細(xì)胞涂片作為抗原。在熒光顯微鏡下，胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）分別顯示特定的熒光染色模型。ELISA法采用純化的PR3和MP0包被固相反應(yīng)板，分別檢測(cè)兩種抗體。（三）ANCA的臨床應(yīng)用ANCA是原發(fā)性小血管炎的特異性血清標(biāo)志物。cANCA產(chǎn)生彌漫性細(xì)胞漿染色，是針對(duì)PR3的抗體，常見于Wegener肉芽腫病（WG），特別是腎和肺受累的病人。pANCA產(chǎn)生核周染色，是針對(duì)MP0的抗體，主要見于系統(tǒng)性血管炎病人。ANCA檢測(cè)是原發(fā)性小血管炎患者的診斷、療效觀察、判斷病情活動(dòng)和復(fù)發(fā)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。WG患者活動(dòng)期抗體滴度升高；緩解期下降。ANCA陽性還可見于繼發(fā)性血管炎、炎性潰瘍、RA、SLE、自身免疫性肝病等。五、抗心磷脂抗體（一）概念抗心磷脂抗體（anti-cardiolipin antibody，ACLA）是抗磷脂抗體之一，是最有代表性的一種。所針對(duì)的抗原是血漿中的磷脂結(jié)合蛋白。ACLA與自身免疫病和抗磷脂抗體綜合征有密切關(guān)系。ACLA可以分為IgG型、IgA型和IgM型。（二）檢測(cè)方法常用方法為ELISA?？梢赃M(jìn)行分型。（三）臨床應(yīng)用ACL抗體陽性常見于SLE、RA、急性腦血管病、反復(fù)自然流產(chǎn)、血栓形成、抗磷脂抗體綜合征等。六、抗平滑肌抗體抗平滑肌抗體（anti-smooth muscle antibody，ASMA）是抗肌動(dòng)球蛋白的自身抗體。一般采用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質(zhì)，陽