蛋白相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法

蛋白相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法20% （W/V） Glucose配制量100ml配制方法:1. 稱取20 g Glucose置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。0.5 M EDTA （pH8.0）配制量1 L配制方法:1. 稱取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20 g NaOH）。4. 加去離子水將溶液定容至1 L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。1 M DTT配制量50ml配制方法:1. 稱取7.71g DTT，加入到100ml燒杯中。2. 加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根據(jù)使用情況0.22um濾膜過濾除菌。3. 適量分成小份后，-20保存。30%丙烯酰胺（29：1）配制量1 L配制方法:1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。Acrylamide 290gBisacrylamide 10g2. 向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加去離子水將溶液定容至1 L，用0.45um濾膜濾去雜質(zhì)。4. 于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸收，其作用具有積累性，配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)橛锌赡芎猩倭康奈淳酆铣煞荨?Tris-甘氨酸電泳緩沖液組份濃度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,0.5%（W/V）SDS配制量 1 L配制方法：1稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。2取下列溶液，加入燒杯中。Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5g3. 加入約800 ml的去離子水，攪拌溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 L后，室溫保存。4SDS-蛋白上樣緩沖液組份濃度Tris-HCl（pH6.8） 200mMSDS 8%溴酚藍(lán) 0.4%甘油 40%巰基乙醇 4%配制量 10ml配制方法：1.量取下列試劑，置于10 ml塑料離心管中。Tris-HCl（pH6.8） 2mlSDS 0.8溴酚藍(lán) 40mg甘油 4ml2. 加去離子水溶解后定容至10 ml。3. 小份（500 ml/份）分裝后，于室溫保存。4. 使用前將20ul的-巰基乙醇加到每小份中。注意：加入-巰基乙醇的上樣緩沖液可在室溫下保存一個(gè)月左右。此緩沖液可以用DTT替代-巰基乙醇。10ml上樣緩沖液中加入0.617mgDTT,溶解后分分裝，可-20保存一年。使用時(shí)30ul樣品加入10ul Loading Buffer 混勻，沸水浴5-10分鐘，冷卻卻可上樣。電轉(zhuǎn)緩沖液（western轉(zhuǎn)膜用）組份濃度 0.25 M Tris, 2.5 M Glycine, 0.37%SDS配制量 1L配制方法：1. 稱量下列試劑，置于15ml離心管中。Tris 3.0gGlycine 14.4g10%SDS 3.7ml2. 向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加去離子水將溶液定容至800 ml后，加入200 ml的甲醇。4. 室溫保存。注意：對于本公司所產(chǎn)10電轉(zhuǎn)緩沖液（D1060），使用時(shí)，取100ml10電轉(zhuǎn)緩沖液，加入700ml去離子水,加入200ml甲醇，混勻即可。TBST緩沖液（western洗膜用）組份濃度 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl0.05%（V/V）Tween 20配制量 1L配制方法：1. 稱量下列試劑，置于1L離心管中。NaCl 8.8g1 M Tris-HCl （pH7.6） 20ml2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加入0.5-1.0ml Tween 20后充分混勻。4. 加去離子水將溶液定容至1 L后，4保存。常規(guī)SDS聚丙烯酰胺凝膠配制方法試劑 分離膠8% 分離膠10% 分離膠12% 濃縮膠4%配制量 10ml 10ml 10ml 5ml30%丙烯酰胺 2.67ml 3.33ml 4.0ml 0.67ml1.5mol/LTris（pH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml -1.0mol/LTris（pH6.8） - - - 0.625ml10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ulddH2O 4.6ml 4.0ml 3.3ml 3.6mlTEMED 10ul 10ul 10ul 5ul10%過硫酸氨 100ul 100ul 100ul 50ul注意：TEMED和10%過硫酸氨最后加，在加入前需混勻前面所加試劑。10%過硫酸氨在4有效期為一周，TEMED易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋。在常溫下膠30分鐘內(nèi)可以凝固，如溫度過低，可放37溫箱凝固。灌完分離膠后，輕輕的加1ml ddH2O封上層，膠凝固后可見到分界線。灌濃縮膠時(shí)，先傾去水層，再用吸紙吸干。灌濃縮膠后立刻插入梳子。濃縮膠凝固后，放入電泳液中（讓電泳液漫過加樣孔），輕輕的撥出梳子，可防加樣孔變型?？捡R斯亮藍(lán)染色液組份濃度 0.1%考馬斯亮R-250, 25%異丙醇,10%冰醋酸配制量 1 L配制方法：1. 稱取1 g考馬斯亮藍(lán)R-250，置于1 L燒杯中。2. 量取250 ml的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。3. 加入100 ml的冰醋酸，攪拌均勻。4. 加入650 ml的去離子水，攪拌均勻。5. 用濾