生物體內(nèi)藥物分析方法的選擇及應(yīng)用PPT課件

.1、生物體內(nèi)藥物分析方法及其應(yīng)用，引言2。體內(nèi)藥物分析方法的設(shè)計和建立。方法確認(評估、確認和評價)。嘿。2，1.1生物樣品分析是藥代動力學(xué)研究的必要手段：分析化學(xué)是化學(xué)科學(xué)中的“眼睛”，而“眼睛”是獲取大量信息的心靈“窗口”，定量分析定性分析(半定量)，1。引言源于化學(xué)的分析化學(xué)專業(yè)具有分析化學(xué)的基本概念和要求，不同于一般的藥物分析，具有生物學(xué)的特點。3.生物樣品中藥物的分析和測定是定量描述藥物體內(nèi)過程和獲得藥代動力學(xué)參數(shù)的重要手段之一。方法類型和特點：體內(nèi)藥物分析方法可大致分為五大類：1。光譜分析2。色譜3。毛細管電泳。免疫測定5。同位素方法(.)。傳統(tǒng)的分類方法：設(shè)定了各種方法的長度，是： HPLC-UV高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，5、體內(nèi)藥物分析方法的特點：高靈敏度：受劑量限制，受生物利用度限制，低濃度和良好的特異性：生物內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，體內(nèi)新形成代謝物的干擾，少量樣品：血液(血漿、血清、全血)、尿液、膽汁、唾液、汗液、乳汁、精液和糞便、組織和器官，6?？焖俜椒ǎ哼@不是一個專門的方法學(xué)研究，使用這種方法可以快速澄清藥理學(xué)問題?？煽壳铱芍貜?fù)：藥代動力學(xué)實驗的不可重復(fù)性。藥物有多種類型：需要各種儀器和技術(shù)手段。7.1.2.1光譜分析比色法紫外分光光度法：微分、導(dǎo)數(shù)、雙波長和三波長熒光分光光度法，1.2.2色譜：高分離效率；高特異性的HPLC:具有廣泛的應(yīng)用范圍。室溫測試；樣品預(yù)處理簡單；流動相選擇范圍廣；儀表自動化程度高的GC:化合物氣化；載氣種類很少；該方法靈敏，但受注入樣品量的限制。TLC:的檢測條件有限。毛細管電泳：分離效率高。膠束電動毛細管色譜結(jié)合高特異性毛細管區(qū)帶電泳毛細管凝膠電泳毛細管等速毛細管電泳毛細管電色譜具有進樣量少、檢測條件受限的特點。同位素方法：的靈敏度高。弱特異性放射強度表明標(biāo)記藥物量(eq.ng/ml)同位素技術(shù)與其他分析方法相結(jié)合以提高特異性。1.2.4免疫測定：放射免疫測定酶免疫測定熒光免疫測定。10，(2)生物樣品的藥物測定方法生物樣品中的藥物測定，免疫學(xué)和微生物學(xué)方法。根據(jù)待測藥物的性質(zhì)，應(yīng)選擇特異性好、靈敏度高的測定方法。色譜包括高效液相色譜、氣相色譜和色譜-質(zhì)譜。在同時測定生物樣品中多種化合物的情況下，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在特異性、靈敏度和分析速度上更具優(yōu)勢。放射性核素標(biāo)記法應(yīng)結(jié)合顏色法測定血藥濃度，以保證良好的檢測特異性。如果某些藥物難以使用上述檢測方法，可以選擇免疫學(xué)或生物學(xué)方法，但必須確保其可靠性。放射免疫分析和酶標(biāo)免疫分析具有一定的特異性和較高的靈敏度，但原藥經(jīng)常與其代謝產(chǎn)物或內(nèi)源性物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。應(yīng)提供證據(jù)解釋其特異性。生物方法(如微生物方法)往往能反映藥效學(xué)的本質(zhì)，但一般特異性較差。平行檢查應(yīng)盡可能采用高特異性的方法(如色譜法)。根據(jù)：臨床前藥代動力學(xué)研究技術(shù)指南(第二稿)(草案)，11，2。體內(nèi)藥物分析方法的設(shè)計和建立2.1體內(nèi)藥物分析方法設(shè)計的主要依據(jù)是2.1.1闡明分析方法設(shè)計的目的。臨床藥物監(jiān)測：要求D.新藥：試驗的批準應(yīng)根據(jù)SFDA發(fā)布的指導(dǎo)原則按照標(biāo)準操作程序進行。信息應(yīng)迅速獲取。13、2.1.2了解待測藥物的特性，并研究文獻中藥物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)？溶解度？穩(wěn)定性？藥物作用的藥理學(xué)和毒理學(xué)機制生物樣品：動物特性？組織器官？代謝藥物體內(nèi)劑量給藥途徑中有多少樣品預(yù)處理方法(同一類化合物)干擾成分，14、2.1.3參考儀器和設(shè)備以及實驗室條件文獻？重復(fù)性？別人能做的事適合我們嗎？實驗室硬件建設(shè)與研究課題兼容嗎？毒品就是毒品！它不是一般的化合物。我們應(yīng)掌握和了解其功效、毒性機制、理化性質(zhì)、未來臨床應(yīng)用等。只有加深理解，才能進行深入的代謝研究，包括藥物代謝研究所采用的方法和技術(shù)。體內(nèi)藥物分析方法設(shè)計和建立的一般原則：方法確認(評估、確認和評價)生物樣品測定的關(guān)鍵是方法的確認。方法學(xué)確認是整個藥代動力學(xué)研究的基礎(chǔ)。這是藥代動力學(xué)研究與其他藥理學(xué)和毒理學(xué)研究的區(qū)別。所有藥代動力學(xué)研究結(jié)果都依賴于生物樣品的測定，只有可靠的方法才能獲得可靠的結(jié)果。通過對特異性、靈敏度、精密度、準確度和穩(wěn)定性的研究，建立檢測方法后，獲得標(biāo)準曲線后，在檢測過程中應(yīng)進行方法學(xué)質(zhì)量控制，應(yīng)制備配套的標(biāo)準曲線，并確定質(zhì)量控制樣品，以保證檢測方法的可靠性?！罢裕号R床前藥代動力學(xué)研究技術(shù)指南(第二稿)(草案)”。18，3.1名義解釋：19，20、21，22標(biāo)稱濃度：真實濃度(真實濃度值；算術(shù)值)，如：配置溶液(1.3毫克/毫升)；標(biāo)準曲線或質(zhì)控中的XNG/MLFortifiltedSamples :已處理樣品濃度標(biāo)準：與測試物質(zhì)(或根據(jù)測試樣品復(fù)制的標(biāo)準物質(zhì))完全相同。23，3.2體內(nèi)藥物分析方法的評價：1。選擇性： FDA/FDA 2。線性范圍和響應(yīng)因子：S/F3。日間精度標(biāo)準：S/F4。日內(nèi)精度精度：S/F5。稀釋積分：F6 .靈敏度：S/F7?；厥?提取效率)F8。矩陣效應(yīng)3360F9 .結(jié)轉(zhuǎn)估價10 .穩(wěn)定性：S/F11。相對保持力：24，3.2.1選擇性：被測組分與內(nèi)源性物質(zhì)、試劑中的雜質(zhì)、代謝物和其他干擾物質(zhì)有良好的分離；必須證明被測物質(zhì)是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測定。對于色譜分析，應(yīng)調(diào)查至少6份來自不同來源的空白生物樣品的色譜圖、空白生物樣品加對照物質(zhì)(指示濃度)的色譜圖以及用藥后生物樣品的色譜圖。質(zhì)譜分析的原理應(yīng)關(guān)注分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)。待測藥物標(biāo)準樣品色譜圖2。正常生物樣品色譜圖(空白)3?？瞻咨飿悠芳哟郎y藥物的色譜圖。給藥后生物樣品的色譜圖，26，3.2.2線性范圍和響應(yīng)因子：必須在測試報告(論文)中建立至少6個濃度(n=/5)的標(biāo)準曲線；應(yīng)使用與待測樣品相同的生物培養(yǎng)基；定量范圍應(yīng)涵蓋所有要測量的濃度；不允許計算定量范圍外未知樣品的濃度。應(yīng)使用空白生物樣品建立標(biāo)準曲線，但這一點不包括在計算中。標(biāo)準曲線的相關(guān)系數(shù)標(biāo)準曲線線性范圍標(biāo)準曲線，試驗報告(紙)應(yīng)提供：5?？瞻咨飿悠芳邮茉囁幬?低、中、高濃度；N5)濃度通過反算標(biāo)準曲線來確定。標(biāo)準曲線線性范圍內(nèi)最低和最高濃度的樣品色譜圖。28，TABX。標(biāo)準曲線反褶合藥物。29，3 . 2 . 3日間精密度和準確度：3 . 2 . 4日間精密度和準確度：精密度和準確度，定義為百分比相對標(biāo)準偏差(%RSD=(標(biāo)準偏差)(平均值)100)，WasDetedFromInterperatedQcsampleconcentrations。Accuracyofthemethod，defined by percentrelativeerror(% RE=(standard observedconcentration-nominal concentration)(nominal concentration)100)，Precision AndAccuracy，30，精度：精度，31要求選擇3種濃度的對照樣品，同時檢查方法的精密度和準確度。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的3倍以內(nèi)。高濃度接近標(biāo)準曲線的上限。在中間選擇一個濃度。每批每種濃度至少應(yīng)測定5個樣品，至少應(yīng)連續(xù)測定3個分析批次，以獲得批次間精度。精密度用質(zhì)量控制樣品批內(nèi)和批間的相對標(biāo)準偏差(RSD)表示。相對標(biāo)準偏差一般應(yīng)小于15%，接近最低允許質(zhì)量時相對標(biāo)準偏差應(yīng)小于20%。準確度一般應(yīng)在85% 115%的范圍內(nèi)，并應(yīng)在LLOQ附近的80% 120%的范圍內(nèi)。如果您每天測量一次并連續(xù)測量5次以獲得日間結(jié)果，數(shù)據(jù)處理，34，35，36，3.2.5稀釋完整性：您如何測量超出線性范圍的樣品？對于大于200納克/毫升的樣品，稀釋：0500納克/毫升，50納克/毫升，10倍，處理和測量結(jié)果是否滿足要求的：50納克/毫升，37， 38，處理和測定結(jié)果是否滿足：10ng/ml、39、3.2.6靈敏度：的置信限(10 ng/ml)，定量下限是標(biāo)準曲線上的最低濃度點，要求滿足3-5個半衰期或1/10-1/20 Cmax測定樣品中的藥物濃度，其準確度應(yīng)在真實濃度的80%-120%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準偏差小于20%。應(yīng)通過至少5個標(biāo)準樣品的測試結(jié)果來證明。最低檢測濃度(X/ml)、最低檢測量(X)、最低定量下限(lloq)。40歲。41、3.2.7回收率(萃取效率)，萃取回收率：應(yīng)考察高、中、低濃度的萃取回收率，且結(jié)果應(yīng)一致、準確、重現(xiàn)性好。低、中、高(3個濃度):回收率不低于70%(原規(guī)定)回收率不低于50%(已改變)、42，萃取回收率：43，方法回收率：低、中、高(3個濃度)添加量和檢測量的比較，法定最低濃度，濃度。添加量回收率(ng/ml)(ng/ml)(ng/ml)(%)(平均值)，12345678910112131415，法定最低工資，2122232425262728293032333435，美國廣播公司。44，3.2.8基質(zhì)效應(yīng)：當(dāng)質(zhì)譜用于體內(nèi)定量藥物檢測時，應(yīng)進行基質(zhì)效應(yīng)試驗，以觀察基質(zhì)對藥物測定的影響。對矩陣沒有統(tǒng)一的解釋，矩陣曾被稱為“分析物的環(huán)境”，即除了索引書中的分析物之外的所有成分。就血清膽固醇(Chol)的測定而言，它是指血清中除Chol以外的所有成分及其理化性質(zhì)?；|(zhì)效應(yīng)對臨床化學(xué)分析的影響越來越受到重視。當(dāng)人工制備的參考物質(zhì)用于酶動力學(xué)測定時，首次發(fā)現(xiàn)了這一點。根據(jù)NCCLS文件的定義，基質(zhì)效應(yīng)是指：(1)樣品中除分析物以外的其他成分對分析物測量值的影響。(2)基質(zhì)干擾分析方法準確測定分析物的能力。廣義而言，基質(zhì)效應(yīng)還應(yīng)包括已知的干擾物(如膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等)。是Chol測定中的干擾物)，但目前，基質(zhì)效應(yīng)僅限于未知或不確定物質(zhì)或因素(如粘度、酸堿度等)的影響。)在生物材料中。降低基體效應(yīng)的研究方向仍有參考價值：改進室內(nèi)質(zhì)控樣品；(2)改進儀器設(shè)計和試劑組成；(3)選擇方法和方法參數(shù)，使其更具適應(yīng)性和易于掌握，且對制劑基質(zhì)(如標(biāo)準溶液、室內(nèi)質(zhì)控樣品和質(zhì)控材料)的準確性不敏感。嘿。47，矩陣因子(MF；基質(zhì)因子):峰面積(分析樣品)生物培養(yǎng)基樣品的處理(強化樣品：)待測藥物的添加測定分析樣品3360標(biāo)準樣品測定(兩種測定方法的藥物濃度相等)，48、ISadjustedMatrixFactor(由內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)因子):基質(zhì)因子由色譜峰面積的峰面積計算。由內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)因子通過色譜峰面積比計算。比率(藥物/信息系統(tǒng))(強化樣品)比率(藥物/信息系統(tǒng))(分析樣品)(兩種方法的藥物濃度相等)矩陣因子為1，表明藥物測定不具有矩陣效應(yīng)。矩陣效應(yīng)影響范圍(矩陣因子；由內(nèi)標(biāo)校正的矩陣因子)在一定間隔內(nèi)是可接受的。(0.8-1.2)，49歲。50，3.2.9結(jié)轉(zhuǎn)評估。在方法評估中，測試最高線性濃度(例如1000ng/ml)后，必須測試試劑空白樣品以評估殘留。在樣品的峰值時間(RT)，相應(yīng)的信號可能出現(xiàn)在試劑空白樣品中，即LLOQ的百分比是多少？LLOP :1.0 ng/ml；驗收：0.8-1.2納克/毫升(1.0納克/毫升的20%)；當(dāng)注入高濃度樣品時，分析系統(tǒng)中會有“攜帶污染”。當(dāng)“污染”達到什么程度時，分析方法是可以接受的；分析