《其他類型的ELISA》PPT課件.ppt

1、其他類型的ELISA,1.阻斷ELISA,本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬?。≒R）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。 以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：,(1)100l AP2型工作量抗原包被 4過夜，洗滌三次、拋干 。 (2) 用200l阻斷緩沖液進(jìn)行封閉 37 60分鐘，洗滌三次、拋干。 (3)加工作量1:4稀釋被檢豬血清100l 37 60分鐘，洗滌三次、拋干。 (4)加100l工作量兔抗AP2型血清 37 30分鐘，洗滌三次、拋干。,(5)加100l工作量豬抗兔IgG-HRP 37 60分鐘，洗滌三次、拋干。 (6

2、)加100l OPD底物液 37 20分鐘，加終止液 。 (7)用ELISA檢測儀測定OD值。 試驗中同時設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。,（2）抗體捕捉ELISA,本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷?？贵w捕捉ELISA根據(jù)所用標(biāo)記方式不同可分為標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗體、標(biāo)記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標(biāo)記抗原捕捉ELISA比較有代表性，,IgM抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗(IgM antibody capture ELISA，簡稱MAC-ELISA)或反向間接ELISA法是利用抗人Igm(鏈特異性)抗體包

3、被固相載體，作為“捕捉抗體”吸附待檢血清中的Igu。 經(jīng)過洗滌除去血清中IgC及其他成分，再加入特異性抗原與“捕捉”到的相應(yīng)IgM抗體結(jié)合；然后加入酶標(biāo)抗體和底物顯色進(jìn)行測定。,該方法的主要程序為： 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被37 60分鐘后置4過夜，洗滌三次、拋干 加待檢血清 37 2小時，洗滌三次、拋干 加酶標(biāo)抗原 37 60分鐘，洗滌三次、拋干 加底物液 37 20分鐘，加終止液 用ELISA檢測儀測定OD值。,(3)布ELISA,（CELISA）CELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學(xué)者Blais, B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術(shù)。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為免疫反應(yīng)提供較大的表面積，提高反應(yīng)的敏感性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。,以對布氏桿菌抗原的檢測為例，CELISA的主要程序為： (1) 首先把抗布氏桿菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉； (2) 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次； (3