淀粉酶產(chǎn)生菌的分離ppt課件

1、淀粉酶產(chǎn)生菌的分離,第四小組,1,淀粉酶：是指一類能催化分解淀粉分子中糖 苷鍵的酶的總稱，主要包括淀粉酶和-淀粉酶等，-淀粉酶可從淀粉分子內(nèi)部切斷淀粉的-1,4糖苷鍵，形成麥芽糖、含有6個(gè)葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖，是淀粉的粘度下降，因此又稱為液化型淀粉酶。淀粉遇碘呈藍(lán)色。這種淀粉-碘復(fù)合物在660nm處有較大的吸收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定。隨著酶的不斷分作用，淀粉長(zhǎng)鏈被切斷，生成小分子的糊精，使其對(duì)碘的藍(lán)色反應(yīng)逐漸消失，因此可以根據(jù)一定時(shí)間內(nèi)藍(lán)色消失的程度為指標(biāo)來測(cè)定-淀粉酶的活力。,2,實(shí)驗(yàn)原理：土壤中含有大量的微生物，將土壤稀釋液涂在不同類型的培養(yǎng)基上，在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)幾天，細(xì)菌或

2、者是其他的微生物便能在平板上生長(zhǎng)繁殖，形成菌落。將初次篩選得到的微生物接到淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)，因?yàn)橹挥心軌虍a(chǎn)生淀粉酶的細(xì)菌才能夠利用培養(yǎng)基中的淀粉成分來完成自身的生命活動(dòng)，才能夠生存。故在淀粉培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌便是淀粉產(chǎn)生菌。在培養(yǎng)基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不顯現(xiàn)藍(lán)色，出現(xiàn)透明圈，可以通過透明圈的大小來初步判斷菌種產(chǎn)淀粉的能力。,3,實(shí)驗(yàn)器材料及試劑：材料：河南科技學(xué)院花園土壤。培養(yǎng)基：（1）分離培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、溶于1000mL蒸餾水中，再加入15g瓊脂粉，pH調(diào)至7.2，121滅菌15min，待冷卻至50左右時(shí)，于超凈工作臺(tái)倒平板）（2

3、）篩選培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基（可溶性淀粉20g,硝酸鉀1g,磷酸氫二鉀0.5g,氯化鈉0.5g,硫酸鎂0.5g,硫酸亞鐵0.01g,瓊脂20g,水1000毫升，調(diào)整pH值到7.27.4。）（3）搖瓶培養(yǎng)：淀粉培養(yǎng)液。,4,試劑：碘液、2%可溶性淀粉、 pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)糊精溶液、0.5mol/L乙酸、0.85%生理鹽水。4、器材：培養(yǎng)皿、錐形瓶、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)。器材：培養(yǎng)皿、錐形瓶、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)。,5,實(shí)驗(yàn)步驟：淀粉產(chǎn)生菌的篩選：（1）采集土樣，并用無菌水稀釋成菌懸液；（2）配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基及淀粉培養(yǎng)

4、基，倒平板備用；（3）將制好的菌懸液與超凈工作臺(tái)上涂到牛肉膏蛋白胨平板上，于37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天；（4）挑取整個(gè)菌落，將其移入淀粉培養(yǎng)基中，繼續(xù)放在37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩天；（5）將碘液滴在平板上，觀察透明圈的大小。,6,酶活力測(cè)定：（1）選產(chǎn)生透明圈最大的菌株進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，將菌溶于5ml無菌生理鹽水中，吸取此培養(yǎng)液加入淀粉培養(yǎng)液中，30攝氏度搖瓶培養(yǎng)72h。（2）酶液稀釋：取發(fā)酵液進(jìn)行4000r/min離心5min，取上清液，用緩沖液適當(dāng)稀釋。（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：準(zhǔn)備七支試管，按照下表配置混合液。使用分光光度計(jì)策規(guī)定各管溶液在660nm下的OD值。然后以淀粉濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。,7,8,（4）酶活力測(cè)定取稀釋的粗酶液也按照下表中七號(hào)管的要求配置混合液，測(cè)得吸光度后，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的淀粉濃度，求出被酶消耗的淀粉量。（5）