高中生物222動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體.ppt

1、2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體,思考下列問題：,1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞融合？植物體雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合有什么不同呢？ 2、動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？ 3、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？兩者的融合過程是否也一樣？,一、動(dòng)物細(xì)胞融合,細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng),兩個(gè)細(xì)胞正在融合,受精作用,動(dòng)物細(xì)胞融合,雜種細(xì)胞,愈傷組織,雜種植株,植物細(xì)胞A,植物細(xì)胞B,原生質(zhì)體A,原生質(zhì)體B,植物體細(xì)胞雜交,去壁,融合,組培,物理法,化學(xué)法,生物法： 滅活的病毒,細(xì)胞A,細(xì)胞B,雜種細(xì)胞,滅活的病毒,物理法 化學(xué)法,仙臺(tái)病毒 皰疹病毒 新城雞瘟病毒,用滅

2、活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程,1.概念：,2.結(jié)果：,3.原理：,4.誘導(dǎo)方式,指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程（細(xì)胞雜交）。,形成單核的雜交細(xì)胞,細(xì)胞膜的流動(dòng)性,物理法：離心、振動(dòng)、電激,化學(xué)法：聚乙二醇（PEG),生物法：滅活的病毒,動(dòng)物細(xì)胞融合,細(xì)胞融合與誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：,誘導(dǎo)因素：仙臺(tái)病毒、聚乙二醇、電激誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。 思考：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？,因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂 質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅 活的話會(huì)感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。喪失感染性保留融合活性。,細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方

3、面？,細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。,植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較,二、單克隆抗體,什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。,B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：,B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體（漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體）。 動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。 每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。,所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個(gè)問題？,長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不

4、僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。,單克隆抗體,由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。 特點(diǎn)： 特異性強(qiáng)、靈敏度高,技術(shù)原理,1）單個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生單一抗體（但不能無限增殖） 2）腫瘤細(xì)胞能無限增殖（但不能分泌單一抗體） 3）細(xì)胞融合技術(shù)雜交瘤細(xì)胞（既無限增殖又分泌單一抗體） 4）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（獲取大量單克隆抗體）,2.單克隆抗體制備過程,思考：,1、本過程利用了哪些原理？,免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理,2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？,這樣融合成

5、的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體,3.整個(gè)制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?,第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）， 第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。 由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。,注射抗原,效應(yīng)B細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種雜交細(xì)胞,選擇性培養(yǎng)基 篩選1,抗原-抗體雜交法,克隆化,單克隆抗體,篩

6、選2,1.注射抗原的目的是什么？,注射抗原,效應(yīng)B細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種雜交細(xì)胞,選擇性培養(yǎng)基 篩選1,抗原-抗體雜交法,克隆化,單克隆抗體,篩選2,2.誘導(dǎo)細(xì)胞融合的手段有哪些？,注射抗原,效應(yīng)B細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種雜交細(xì)胞,選擇性培養(yǎng)基 篩選1,抗原-抗體雜交法,克隆化,單克隆抗體,篩選2,3.若細(xì)胞兩兩融合后，有幾種融合情況？,注射抗原,效應(yīng)B細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種雜交細(xì)胞,選擇性培養(yǎng)基 篩選1,抗原-抗體雜交法,克隆化,單克隆抗體,篩選2,4.第一次篩選出的雜交瘤細(xì)胞為何需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測？,效應(yīng)B細(xì)胞,B淋巴細(xì)胞,注射抗原,骨髓瘤細(xì)胞,融合,B-B細(xì)胞

7、,雜交瘤細(xì)胞,瘤-瘤細(xì)胞,選擇性培養(yǎng)基 篩選1,多種雜交瘤細(xì)胞,符合要求的雜交瘤細(xì)胞,抗原-抗體雜交法,篩選2,克隆化,體外培養(yǎng),小鼠腹腔內(nèi)增殖,單克隆抗體,雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)： 既可以產(chǎn)生特異性抗體，又可以大量增殖。,（1）小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？ （2）制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞 工程技術(shù)手段？ （3）在整個(gè)制備的過程中要經(jīng)過幾次篩選？,思考：,細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活,細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的前提下培養(yǎng)篩選出特異抗體的細(xì)胞群。,3.單克隆抗體的應(yīng)用：,作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的

8、細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。 用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥治療，可制成“生物導(dǎo)彈”，也有少量用于治療其它疾病。,小結(jié),兩個(gè)過程,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程,單克隆抗體制備過程,三個(gè)“一”,一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法滅活病毒,一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞,一個(gè)優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢,下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案,制備單克隆抗體,B細(xì)胞,抗體,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞,分泌抗體,無限增殖,原代,傳代,50,1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（） A動(dòng)物細(xì)胞融合 B胚胎移植 C動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) D核移植,在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（） A結(jié)果是相同的 B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同 C操作過程中酶的作用相同 D誘導(dǎo)融合的