第四章 中藥制劑的含量測定ppt課件

1、第四章 中藥制劑的含量測定,第一節(jié) 定量測定的目的與意義,含量測定是中藥制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo) 測定對象：有效成分、指標(biāo)成分、毒性成分 目的：判定藥物的優(yōu)劣，保證臨床用藥的安全、有效 注意點(diǎn)：與西藥含量測定的區(qū)別 觀點(diǎn)：指標(biāo)成分 有效成分 單一成分 多指標(biāo)成分/有效成分,第一節(jié) 定量測定樣品的處理,樣品處理的作用 充分釋放被測成分 除雜純化 富集濃縮或衍生化 使樣品形式、溶劑符合測定要求,一. 樣品的粉碎,樣品粉碎的目的： 保證所取樣品均勻且有代表性 較快且完全地提取被測成分,粉碎設(shè)備： 粉碎機(jī)、研缽、食品處理機(jī) 高速勻漿機(jī)或玻璃勻漿器。,二. 樣品的提取,冷浸法 適用：熱不穩(wěn)定的樣品 方法：

2、稱取一定量樣品置于帶塞容器內(nèi)，加入適量溶劑（樣品量的1050倍），稱重，浸泡提取，浸泡時(shí)間1224小時(shí)。浸泡后再稱重，補(bǔ)足溶劑。 測定：部分測定法（等量法） 全部測定法（總量測定法） 優(yōu)點(diǎn)：操作簡單 缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)、費(fèi)溶劑、不易提取完全,回流提取法 適用：熱穩(wěn)定性的成分 方法：以單一溶劑或混合溶劑于水浴/電 熱套加熱回流提取 優(yōu)點(diǎn)：提取效率比冷浸法高，提取時(shí)間短， 缺點(diǎn)：提取雜質(zhì)較多 不宜用于熱不穩(wěn)定或揮發(fā)性的成分,連續(xù)回流提取法 （索氏提?。?適用：熱穩(wěn)定性的成分 方法：樣品置索氏提取器中，用遇熱可以 揮發(fā)的溶劑進(jìn)行反復(fù)提取 優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，所需溶劑少 提取雜質(zhì)少，操作簡便 缺點(diǎn)：受熱易分解的

3、成分不宜使用,超聲提取法 適用：熱穩(wěn)定性的成分 方法：樣品置適當(dāng)容器中，加入提取溶劑， 放入超聲振蕩器中提取。 優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，提取速度快，操作簡便 注意：超聲頻率、提取時(shí)間、溫度需考察,超臨界流體提取法（SFE） 適用：主要用于熱不穩(wěn)定成分或揮發(fā)性成分， 也可熱穩(wěn)定性成分 主要用于非極性、弱極性化合物， 也可極性化合物加入極性改性劑（甲 醇、氯仿、苯），增加其溶解能力。 方法：超臨界流體萃取儀 優(yōu)點(diǎn)：萃取效率高、速度快、準(zhǔn)確度高、選擇性較高、節(jié)省溶劑、易于自動(dòng)化，可避免使用易燃，有毒的有機(jī)溶劑，并能與色譜和光譜等儀器聯(lián)用。,二. 樣品的分離凈化,沉淀法 ：利用某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉

4、淀，分離沉淀或保留溶液的精制方法 蒸餾法 ：利用某些被測成分具有揮發(fā)性，采用蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測定；或某些成分經(jīng)蒸餾分解成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測定。 最常用：水蒸氣蒸餾法 適用：揮發(fā)油，小分子生物堿 優(yōu)化：蒸餾液中加入一定量無機(jī)鹽（鹽析作用），使揮發(fā)性成分更完全地蒸餾出來,液一液萃取法 直接萃取法 ：利用被測成分與干擾成分在有機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過多次萃取達(dá)到分離凈化的目的。 萃取次數(shù)：實(shí)驗(yàn)考察（回收率符合） 溶劑的選擇：根據(jù)被測組分疏水性的相對強(qiáng)弱 選擇極性適當(dāng)?shù)娜軇?水相pH的控制：弱酸性成分 pHKa-2 弱堿性成分 pHPKa+2 鹽析作用

5、：水相用NaCl飽和，提高提取率。,2.離子對萃取法 適用：高度離解的有機(jī)酸、有機(jī)堿 中藥制劑分析主要用于生物堿（B） 離子對試劑：常為酸性染料（In-） 如：溴百里酚藍(lán)（BTB）和溴甲酚綠（BCG） 注意：水相pH值的控制 離子對試劑的選擇。,色譜法 最常用：經(jīng)典微柱色譜（固相萃取、液固萃?。?方法：將樣品溶液加到裝有合適固定相的色 譜柱中，將被測成分保留于柱上，洗去 雜質(zhì)后，再洗脫被測成分進(jìn)行測定。 或者：使雜質(zhì)強(qiáng)烈保留于柱上，直接洗脫 被測成分進(jìn)行測定。 適用于：總類成分的含量測定 進(jìn)展：商品LSE柱作為GC、HPLC的預(yù)處理柱,LSE常用填料 ： 硅膠、氧化鋁等： 傳統(tǒng)吸附劑 不極性吸

6、附作用 氧化鋁：用于生物堿、苷類等堿性、中性成分的 測定，吸附酸性成分 硅膠：適合于分離中性或酸性化合物，強(qiáng)烈保留 堿性化合物。 鍵合相硅膠： 十八烷基鍵合相硅膠（C18，ODS）、 C8 分離脂溶性雜質(zhì)或成分 苯基、氰基鍵合相硅膠 分離水溶性雜質(zhì)或成分,大孔樹脂：分為極性和非極性型 ，D101最常用 注意：預(yù)處理；定量時(shí)回收率 聚酰胺： 氫鍵吸附常用于含phOH的黃酮類成分 硅藻土、纖維素：親水型填料，分配作用 流動(dòng)相：與水不混溶的有機(jī)溶劑 洗脫：親脂性的成分 離子交換樹脂： 萃取樣品液中可離解化合物 除去樣品中的離子，防止組分分解,消化法 目的： 重金屬檢查限量較低，有機(jī)成分 往往會(huì)嚴(yán)重干

7、擾測定，須采用合 適的方法破壞這些有機(jī)物 常用的破壞方法：濕法消化，干法消化,濕法消化 硝酸高氯酸法 適用于血，尿、組織等生物樣品和動(dòng)植物藥制劑的破壞 有機(jī)金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機(jī)金屬離子一般呈高價(jià)態(tài)。 本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞,硝酸硫酸法 適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞 破壞得到的無機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài) 不能用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞 （ 不適用于與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子）,硫酸硫酸鹽法 常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，破壞得到的無機(jī)金屬離子多為低價(jià)態(tài)（三價(jià)砷或銻）。 樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。,其它濕法

8、硝酸硫酸高氯酸法 硫酸氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀） 破壞后，金屬呈高價(jià)態(tài),注意點(diǎn)： 所用儀器一般為硅玻璃或硼玻璃制成的凱氏瓶 所用試劑應(yīng)為優(yōu)級(jí)純 水應(yīng)為去離子水或高純水 按相同條件進(jìn)行空白試驗(yàn)校正 操作在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行,干法消化 將有機(jī)物灼燒灰化達(dá)到分解目的 方法：將適量樣品置于瓷坩鍋、鎳坩鍋或鉑坩堝中，常加無水Na2CO3或輕質(zhì)MgO以助灰化?；靹蚝螅刃』鸺訜?，使樣品完全炭化，然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。,適用： 濕法不易破壞完全的有機(jī)物； 某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。 不適用：含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)藥物的破壞,注意事項(xiàng)： （1）加熱或灼燒時(shí)，應(yīng)控制溫度在42

9、0以下，防止金屬化合物的揮發(fā) （2）一定要灰化完全 （3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但不要輕易棄去,第二節(jié) 常用定量分析方法,藥物含量測定是評價(jià)藥品質(zhì)量優(yōu)劣的重要手段,常用測定方法：（Ch.P2000收載較多） 化學(xué)分析法 光譜法（UV、FD） 色譜法（HPLC、GC 、TLCS）,一. 化學(xué)分析法,包括重量分析和滴定分析 適用：主要用于測定制劑中含量較高的一些成分及含礦物藥制劑中的無機(jī)成分 如：總生物堿類、總酸類、總皂苷及礦物藥 特點(diǎn)：儀器簡單，結(jié)果準(zhǔn)確 但有一定的局限性，靈敏度低，操作繁瑣、耗時(shí)長，專屬性不高，不適宜微量成分測定,（一）重量分析法,揮發(fā)法：測定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)

10、化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分含量。 如：干燥失重 、水分 灰分及熾灼殘?jiān)臏y定,萃取法：根據(jù)被測組分在互不相溶的兩相中溶解度的不同，達(dá)到分離的目的。 適用：總皂苷、總有機(jī)酸、總生物堿 如：冰硼散中冰片的含量測定 地奧心血康膠囊中甾體總皂苷含量測定、昆明山海棠片中總生物堿的含量測定 甘草浸膏中甘草酸的含量測定,沉淀法：將被測組分定量轉(zhuǎn)化為難溶 化合物，測定其含量。 適用于：制劑中純度較高的成分。 如：西瓜霜潤喉片中西瓜霜的含量測定 苦參片中苦參總堿的含量測定 復(fù)方元胡注射液總堿的測定,（二）滴定分析法,1.容量分析法的適用性及特點(diǎn) 適用：常量組分的分析,特點(diǎn)：操作簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確， 一般相對誤差0.

11、2%,酸堿滴定法 適用于：測定中藥制劑中所含有的生物堿、有 機(jī)酸、內(nèi)酯類等酸、堿組分的含量。 沉淀滴定法 分為銀量法、四苯硼鈉法和亞鐵氰化鉀法 適用：主要用于測定生物堿、生物堿的氫鹵酸 鹽及含鹵素的其它有機(jī)成分的含量。,配位滴定法 包括EDTA法和硫氰酸銨法 適用于測定鞣質(zhì)、生物堿及含Ca2+、Mg2+、 Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量。 氧化還原滴定法 適用于測定具有氧化還原性的物質(zhì) 如：含酚類、糖類及礦物藥Fe、As等成分 的中藥制劑。 需嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，且方法的專屬性不高（干擾因素較多）。,滴定分析法的計(jì)算,滴定度T 每1mL滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y物質(zhì)的重量（mg/mL） aA +

12、bB = cC + dD T= CA MB b/a,注意：滴定劑與被測藥物的計(jì)量關(guān)系,百分含量計(jì)算,1直接滴定法 含量% = V消耗滴定劑的體積；T滴定度； W供試品取樣量；濃度校正因數(shù)F= C實(shí)際/C理論,2返滴定法（回滴定）,不做空白試驗(yàn)時(shí): 含量% = = C1，V1，F(xiàn)1先加入的過量滴定劑的濃度、體積、濃度校正因數(shù)； C2，V2，F(xiàn)2返滴定的滴定劑的濃度、體積、濃度校正因數(shù)；W供試品取樣量,做空白試驗(yàn)時(shí),含量% = V0空白試驗(yàn)時(shí)消耗滴定劑的體積； V樣品測定時(shí)消耗滴定劑的體積； T滴定度；F濃度校正因數(shù)； W供試品取樣量,二. 可見紫外分光光度法,特點(diǎn)：靈敏度高（107g/mL） 準(zhǔn)

13、確度高（相對誤差25）； 應(yīng)用廣泛 適用：在可見紫外區(qū)有吸收的物質(zhì) 原理：朗伯比爾定律 A = ElC =lC,吸收系數(shù)是吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸收度。 在給定單色光、溶劑和溫度等條件下，吸收系數(shù)是物質(zhì)的特性常數(shù)，表明物質(zhì)對某一特定波長光的吸收能力。 不同物質(zhì)對同一波長的單色光，可有不同的吸收系數(shù). 吸收系數(shù)可以作為吸光物質(zhì)定性分析的依據(jù)和定量分析靈敏度的估量。,吸收系數(shù)因溶液濃度單位不同，有兩種表達(dá)方式：,摩爾吸收系數(shù)：指溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)的吸收度。 單位為Lmol1cm1。 物質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)一般不超過105數(shù)量級(jí)，通常大于104為強(qiáng)吸收， 小于102為弱

14、吸收， 102 103間的為中強(qiáng)吸收。,百分吸收系數(shù)：,溶液濃度為1（即1g/100ml），液層厚度為 1cm時(shí)的吸收度，單位為100mLg1cm1.,百分吸收系數(shù)在藥物定量分析中應(yīng)用廣泛，我國現(xiàn)行藥典均采用百分吸收系數(shù)，尤其適用于摩爾質(zhì)量不清的待測組分。,（一）單波長分光光度法,中藥制劑成分復(fù)雜，不同組分的紫外吸收光譜彼此重疊、干擾測定，因此在測定前須經(jīng)適當(dāng)?shù)奶崛?，凈化或采用專屬的顯色反應(yīng)等步驟來排除干擾，以測定其中某一總成分或某個(gè)單一組分。,測量條件的選擇 1. 測定波長的選擇：原則 “吸收最大，干擾最小”。測定波長一般選擇在被測組分最大吸收波長處；如果被測組分有幾個(gè)最大吸收波長時(shí)，可選擇

15、不易出現(xiàn)干擾吸收、吸收度較大而且峰頂比較平坦的最大吸收波長。 2. 溶液吸收度的范圍：應(yīng)控制在0.20.7之內(nèi)，通過調(diào)節(jié)溶液的濃度和吸收池的厚度來達(dá)到。 3空白對比法,儀器波長校正：汞燈或氘燈的特征譜線 溶劑要求： 測定波長 溶劑的截止波長； 溶劑和比色皿的吸收度規(guī)定： 220240nm, A0.40 241250nm, A0.20 251300nm, A0.10 300nm以上, A0.05,定量方法,1標(biāo)準(zhǔn)對照法 按各品種項(xiàng)下要求，在相同條件下分別配制對照品溶液和供試品溶液，在規(guī)定波長處，分別測其吸收度，計(jì)算供試品溶液中被測組分的濃度。,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分

16、的標(biāo)示量的10010 標(biāo)準(zhǔn)對照法應(yīng)用的前提是方法學(xué)考察時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)過原點(diǎn)。,2. 吸收系數(shù)法,按各品種項(xiàng)下要求，根據(jù)AlC，若l和吸光系數(shù)已知，即可根據(jù)供試品溶液測得的A值求出被測組分的濃度。,EX、ES分別為供試品和對照品溶液的百分吸光系數(shù) 注意：儀器和操作條件的控制,3標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列不同濃度的對照品溶液 （n5），分別測定吸光度，繪制A-C曲 線或求出回歸直線方程（r0.999）。 在相同條件下測定供試品溶液的吸 光度，求得供試品中被測成分的濃度或 含量。,（二）計(jì)算分光光度法,適用：多組分的含量測定 原理：吸光度具有加和性 方法： 雙波長法（等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法） 三波長法 導(dǎo)

17、數(shù)光譜法,（三）差示光譜法,基本原理 1.能提供一個(gè)合適的參比溶液 2.在兩種不同的介質(zhì)環(huán)境或?qū)嶒?yàn)條件下，被測組分有不同的特征光譜（即不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)），而賦形劑或其它共存組分的光譜不變。因而可消除它們的干擾。,三.薄層掃描法,薄層吸收掃描法 適用于:在可見、紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，及 通過色譜前或色譜后衍生成上述化 合物的樣品組分 分:反射法和透射法，薄層掃描中大多采用 反射法,定量依據(jù),Kubelka-Munk理論及曲線 以斑點(diǎn)的相對反射率或相對透光率計(jì)算薄層色譜斑點(diǎn)的吸光度，說明固定相的散射參數(shù)SX對斑點(diǎn)中物質(zhì)的濃度與吸光度間關(guān)系的影響，獲得不同散射參數(shù)SX時(shí)斑點(diǎn)的A-KX理論曲線，即Kube

18、lka-Munk曲線。 不符合LB定律：薄層板存在明顯的散射現(xiàn)象,Kubelka-Munk曲線說明了薄層色譜斑 點(diǎn)的吸光度與其濃度間呈非線性關(guān)系， 解釋了薄層掃描法中標(biāo)準(zhǔn)曲線的彎曲 問題，,2.薄層熒光掃描法,適用于：本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后 可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測定 特點(diǎn)：專屬性強(qiáng)，靈敏度比吸收法高13個(gè)數(shù)量級(jí)，但適用范圍較窄。 定量原理：當(dāng)溶液濃度很稀時(shí)（abc0.05） F=KC,高效液相色譜法,高效液相色譜法是在經(jīng)典的液相柱色譜法的基礎(chǔ)上引入了氣相色譜的理論和技術(shù)，采用高壓泵，高效固定相以及高靈敏度在線檢測器發(fā)展而成的分離分析方法。,分析方法,正相分配色譜法 常用于分離強(qiáng)極性化合物。

19、 常用極性鍵合相為氨基鍵合相（強(qiáng)極性）、氰基鍵合相（中強(qiáng)極性）， 流動(dòng)相常選用低極性溶劑如烴類，加入適量極性溶劑如醇類等調(diào)節(jié)洗脫液。 梯度洗脫時(shí)，通常逐漸增大洗脫劑中極性溶劑的比例，故樣品中極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。,氰基鍵合相的分離選擇性與硅膠相似，但極性比硅膠弱。許多能在硅膠上分離的樣品，可以在氰基鍵合相上完成。氰基鍵合相對雙鍵異構(gòu)體有很好的分離選擇性。 氨基鍵合相是分析糖類最常用的固定相，常用乙腈-水為流動(dòng)相。,反相分配色譜法,適合于分離弱極性和中等極性的化合物。極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。 常用的固定相為十八烷基硅膠鍵合相C18(ODS)，其次是辛基硅烷鍵合硅

20、膠； 流動(dòng)相采用甲醇水或乙腈水。有時(shí)也可加入適當(dāng)?shù)乃峄驂A來控制流動(dòng)相的pH值，以防止出現(xiàn)不對稱色譜峰。 反相色譜常采用梯度洗脫，使每個(gè)組分都在適宜條件下獲得分離,離子對色譜（IPC）,在流動(dòng)相中加入溶質(zhì)分子電荷相反的離子對試劑，來分離離子型或可離子化的化合物的方法。 離子對色譜法分為正相離子對色譜和反相離子對色譜法，最常用的是反相離子對色譜。 它使用反相色譜中常用的固定相（ODS），能同時(shí)分離離子型化合物和中性化合物。,HPLC條件的選擇,固定相選擇 一般的液相色譜適合的相對分子質(zhì)量范圍200-2000，相對分子質(zhì)量大于2000的則用空間排阻色譜較佳。 樣品為酸、堿化合物，則采用離子交換色譜；

21、 異構(gòu)體采用液-固吸附色譜； 樣品為脂肪族或芳香族，可采用液-液分配色譜或液-固吸附色譜； 同系物不同官能團(tuán)及強(qiáng)氫鍵的樣品可用液-液分配色譜。,正相色譜主要用于分離極性化合物， 常用氫基、氰基鍵合固定相。 反相色譜應(yīng)用最為廣泛，適于分析非極性和中等極性的化合物 最常用的固定相是十八烷基鍵合固定相，,流動(dòng)相選擇,根據(jù)不同類型的色譜法選擇流動(dòng)相 正相分配色譜 流動(dòng)相是以烴類（如己烷、烷等）為主，加入少量極性溶劑（如氯仿、甲醇等）改變流動(dòng)相的極性和組成，分離異構(gòu)體、極性化合物等。 反相分配色譜 流動(dòng)相是以水為主，再加入能與水混溶的有機(jī)溶劑，通過改變有機(jī)溶劑的組成，調(diào)整組分的容量因子，改善分離效率，甲

22、醇是最常用的有機(jī)溶劑，其次是乙腈和四氫呋喃。,在反相鍵合相色譜中，用水-甲醇、水-乙腈溶液為流動(dòng)相，可分離極性物質(zhì)。 用水和無機(jī)鹽的緩沖溶液作流動(dòng)相，可以分離易離解的物質(zhì)，如有機(jī)酸、有機(jī)堿、酚類等。,離子交換色譜 流動(dòng)相通常是鹽類的緩沖溶液。 通過改變流動(dòng)相的PH、緩沖溶液的類型、離子強(qiáng)度、以及加入有機(jī)溶劑、配合劑都會(huì)改變分離選擇性，提高分離效果。,空間排阻色譜 流動(dòng)相的選擇不是為了提高色譜柱的選擇性，而是為了使樣品更好地溶解，或是為了減少流動(dòng)相黏度，提高柱效。選用低黏度的流動(dòng)相，其沸點(diǎn)要比柱溫高25-50，且應(yīng)與選用的固定相和檢測器相配。,洗脫技術(shù),根據(jù)分離度的要求，在色譜分離過程中樣品組分

23、的k值范圍應(yīng)控制在1-10之間。 如果樣品組分較少、性質(zhì)差別不大，一般采用等度洗脫（溶劑組成在一分析周期里保持恒定）可以使所有組分的k值都處于這個(gè)范圍內(nèi)。 對于組分?jǐn)?shù)目較多、性質(zhì)相差較大的復(fù)雜混合物，為使各組分均得到滿意的分離，必須采用梯度洗脫技術(shù)，即在一個(gè)分析周期中，程序控制流動(dòng)相的組成（如溶劑的極性、離子強(qiáng)度、PH值等）改變，使每個(gè)組分都在適宜的條件下獲得分離。,梯度洗脫可以采用二元混合溶劑或多元混合溶劑，即所謂二元梯度和多元梯度。梯度洗脫程序一般是以等強(qiáng)度洗脫的結(jié)果為基礎(chǔ)，通過實(shí)驗(yàn)加以確定的。對極性固定相，梯度溶劑范圍從正己烷到氯代烷； 對非極性固定相，一般采用水-乙腈、水-甲醇線性梯度

24、。 梯度洗脫特別適用于極性范圍很寬的混合物分離。 優(yōu)點(diǎn) 縮短總分析時(shí)間，提高分離度，是使k值相差103104的樣品組分，在合理分析速度下得到適當(dāng)分離度的唯一方法。 改善峰形，提高峰的對稱性，減少峰的區(qū)域?qū)挾龋刮⒘拷M分易被檢出，降低最小檢出量，提高檢測靈敏度。,檢測器的選擇,針對樣品的性質(zhì)不同選擇適合的檢測器。 紫外檢測器 高靈敏度，但只能用于有可見紫外吸收的化合物。主要用于芳烴與稠環(huán)芳烴、芳香基取代物、芳香氨基酸、核酸、甾體激素、羧基與羰基化合物等。 蒸發(fā)光散射檢測器 用于揮發(fā)性低于流動(dòng)相，紫外無吸收或呈末端吸收的樣品組分，但對于有紫外吸收的組分的檢測靈敏度較低。主要用于糖類、高分子化合物、

25、高級(jí)脂肪酸及甾體類等幾十類化合物。,熒光檢測器 適用于能產(chǎn)生熒光或其衍生物能發(fā)熒光的物質(zhì)。主要用于氨基酸、多環(huán)芳烴、維生素、甾體化合物及酶等的檢測。 電化學(xué)發(fā)光檢測器 對于電活性物質(zhì)來說是一類較好的選擇性檢測器。主要用于有機(jī)胺類化合物。,前處理,流動(dòng)相脫氣：流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，目的是除去其中溶解的氣體。常用的脫氣方法有：超聲波振動(dòng)脫氣、抽真空脫氣、加熱回流脫氣、吹氦脫氣、真空在線脫氣 。 超聲波振動(dòng)脫氣，將欲脫氣的流動(dòng)相置放于超聲波提取器中，用超聲波振蕩10-15min，此法的脫氣簡單，最常用。 過膜：流動(dòng)相及供試液須經(jīng)過0.45um或0.2um濾膜過濾,Van Deemter方程

26、式在HPLC中的表達(dá)式為： H = A + CU HPLC可以近似地認(rèn)為流動(dòng)相的流速與板高成直線關(guān)系，流速增大，板高增加，色譜柱柱效降低。 為了兼顧柱效與分析速度，一般都盡可能地采用較低流速。內(nèi)徑4.6mm柱，流量多采用1mL/min。,色譜適用性試驗(yàn),色譜適用性試驗(yàn)可以用來評價(jià)高效液相色譜法色譜條件。 按各品種項(xiàng)下要求對儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對照品對儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。,1.色譜柱的理論板數(shù)（n） 在選定的狀態(tài)下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留

27、時(shí)間tR（以分鐘或長度計(jì)）和半峰高寬（Wh/2），按n5.54（tR/ Wh/2）2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。 如果測得的理論板數(shù)低于此樣品規(guī)定的最小理論塔板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等），使理論塔板數(shù)達(dá)到要求。,2.分離度 定量分析時(shí)，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。 分離度（R）的計(jì)算公式為： R2（tR2tR1）/W1+W2 tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間； tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間； W1、 W2為此相鄰兩峰的峰寬。 分離度應(yīng)大于1.5。,3.重復(fù)性 樣品的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不

28、大于2.0。 也可按照各樣品校正因子測定項(xiàng)下，配置80、100、120的對照溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0。,4. 拖尾因子 為保證測量精度，特別當(dāng)采用峰高法測量時(shí)，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子（T）是否符合規(guī)定，或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計(jì)算公式為： TW0.05h/2d1 W0.05h為0.05峰高處的峰寬 d1為峰極大至峰前沿之間的距離。 除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.951.05之間。,定量分析方法,液相色譜法的定量方法，常用外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法，也可用內(nèi)加法、校正因子法定量。 1. 外標(biāo)法 以試

29、樣的對照品作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對比求算試樣含量的方法。 外標(biāo)法可分為外標(biāo)工作曲線法、外標(biāo)一點(diǎn)法及外標(biāo)二點(diǎn)法等，前二種方法常用。 優(yōu)點(diǎn)是不需要知道校正因子，只要被測組分出峰、無干擾、保留時(shí)間適宜，即可進(jìn)行定量分析。 缺點(diǎn)，進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確，否則定量誤差大。 在HPLC中，一般用六通閥定量環(huán)進(jìn)樣，進(jìn)樣量誤差相對較小，因此外標(biāo)法是HPLC常用的定量分析方法之一。,外標(biāo)工作曲線法（簡稱工作曲線法）,用試樣的對照品，配制一系列濃度不同的對照品溶液，準(zhǔn)確進(jìn)樣，測量峰面積或峰高，以對照品溶液的濃度或進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。 相同條件下，注入供試品溶液，利用

30、此曲線或回歸方程A=a+bC (計(jì)算樣品溶液的濃度）。,（2）外標(biāo)一點(diǎn)法,只有在工作曲線通過原點(diǎn)，即截距為零時(shí)，才可用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行定量分析，否則需用外標(biāo)二點(diǎn)法定量。 用一種濃度的對照品溶液對比，求算同一物質(zhì)的樣品（色譜組分）含量的方法，稱為外標(biāo)一點(diǎn)法。,Ci與 Ai分別為樣品中待測組分濃度和峰面積； Cs與As分別為對照品溶液濃度與峰面積。,峰形為正常峰時(shí)，常用隨行外標(biāo)一點(diǎn)法即每次測定都同時(shí)進(jìn)對照品與樣品，并且濃度接近，以減少因儀器不穩(wěn)定帶來的誤差。,2. 內(nèi)標(biāo)法,將一定量的內(nèi)標(biāo)物加入到樣品中，再經(jīng)色譜分析，根據(jù)樣品的重量和內(nèi)標(biāo)物重量以及待測組分峰面積和內(nèi)標(biāo)物的峰面積，就可求出待測組分的含量

31、。 內(nèi)標(biāo)法可分為工作曲線法、內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法（內(nèi)標(biāo)對比法）、內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法及校正因子法。 所用的內(nèi)標(biāo)物的要求同氣相色譜。,內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)： 可抵消儀器穩(wěn)定性差，進(jìn)樣量不夠準(zhǔn)確等原因帶來的定量分析誤差。 缺點(diǎn)： 樣品配置比較麻煩，不易尋找內(nèi)標(biāo)物。,（1）工作曲線法,內(nèi)標(biāo)工作曲線法與外標(biāo)法相同，只在各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中，加入相同量的內(nèi)標(biāo)物，進(jìn)樣。分別測量組分i與內(nèi)標(biāo)物s的峰面積A（或峰高），以其峰面積比Ai/AS濃度為縱坐標(biāo)，以對照品溶液的Ci（標(biāo)準(zhǔn)）繪制工作曲線，計(jì)算回歸方程式Ci= b Ai /As + a及相關(guān)系數(shù)。 b：斜率；a：截距 Ai：待測組分的峰面積或峰高； AS：內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高。,（2）

32、內(nèi)標(biāo)對比法（內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法）,內(nèi)標(biāo)對比法 不需知道校正因子又具有內(nèi)標(biāo)法的定量準(zhǔn)確度與進(jìn)樣量無關(guān)的特點(diǎn)。方法簡便實(shí)用。 在藥物分析中分析結(jié)果（含量）常用標(biāo)示量%表示,mi為藥物對照品的量，m是取樣量, W為平均片重（或丸重等）,3.內(nèi)標(biāo)法加校正因子法,用此法需要已知校正因子，而高效液相色譜法的校正因子很難由手冊中查到，常常需要測定。 測定校正因子需配制含有內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同實(shí)驗(yàn)條件條件下進(jìn)樣510次，分別測定峰面積，計(jì)算各組分的相對重量校正因子。,mi與ms分別為待測物與內(nèi)標(biāo)物的量； Ai與As分別為它們的峰面積。 自測的相對重量校正因子，只能在此實(shí)驗(yàn)條件下使用，而無通用性，引用時(shí)需注意。,內(nèi)

33、標(biāo)法的計(jì)算公式：,Cs為內(nèi)標(biāo)物的濃度， f 為較正因子 Ai、As分別為待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積。,氣相色譜法,特點(diǎn)：高靈敏度、高選擇性、高柱效、 快速、用量少 適用：具有揮發(fā)性且熱穩(wěn)定性好的物質(zhì) 一般色譜圖于30分鐘內(nèi)記錄完畢,色譜條件的選擇,主要依據(jù): 分離度方程 速率理論,色譜柱的選擇：固定相、柱長 柱溫的選擇： 載氣的選擇：峰擴(kuò)張、柱壓降 對檢測器的靈敏度 進(jìn)樣量的選擇：盡量少 氣化溫度的選擇：樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)及進(jìn)樣量 檢測室溫度,系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 同HPLC法,定量方法 由于GC一般手動(dòng)進(jìn)樣，且進(jìn)樣量小（0.1-1l），故GC大多采用內(nèi)標(biāo)法定量,1.歸一化法,1）前提：樣品中所有組分

34、都能流出柱且對檢測器都有響應(yīng)。 2）計(jì)算公式: mi Ai fi pi= 100%= 100% m A1f1 +A2f2 +Anfn,如果組分為同系物fi近似相同， 則可簡化為 Ai Pi= 100% A1+A2+ +An,優(yōu)點(diǎn)： a.簡便，結(jié)果與進(jìn)樣量無關(guān),操作條件影響不大。 b.比其它方法易行。宜于進(jìn)樣量少不易測準(zhǔn)的液體樣品。 c.當(dāng)分析同系物時(shí)可不求f而直接把面積歸一化。,缺點(diǎn)： a. 含高沸點(diǎn)或不出峰的組分 b.檢測器上無信號(hào)的組分 c.無法求得f的組分（未定性或峰重疊）,2、內(nèi)標(biāo)法,前提：有適合的內(nèi)標(biāo)物 對內(nèi)標(biāo)物的要求： a.樣品中不含此成分 b.能單獨(dú)出峰且能與組分完全分開 c.峰

35、位置盡量靠近組分 d.加入的重量接近于組分的量,公式 fi mi/Ai fi fs ms/As mi Ai = fi ms As mi mi ms Ai ms pi= 100%= 100%= fi 100% m ms m As m 一般來說，TCD標(biāo)準(zhǔn)物用苯，F(xiàn)ID用正庚烷。,操作過程 a.先配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，加一定量的內(nèi)標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)液 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖 b.未知濃度的樣品加同量內(nèi)標(biāo) 待測溶液 樣品色譜圖,(Ci%)樣品 (Aifi/Asfs )樣 (Ai/As)樣 (Ci%)標(biāo)準(zhǔn) (Aifi/Asfs )標(biāo) (Ai/As)標(biāo) (Ai/As)樣 (Ci%)樣品 (Ci%)標(biāo)準(zhǔn) (Ai/As)標(biāo),優(yōu)

36、點(diǎn)： a.定量準(zhǔn)確 b.操作條件影響不大 c.沒有歸一化的缺點(diǎn) 缺點(diǎn)： 每次測定都要精確配制含內(nèi)標(biāo)的樣品，另內(nèi)標(biāo)的選擇也較難。,3、外標(biāo)法 即以待測組分的標(biāo)準(zhǔn)品作對照物,與對照物對比求算待測組分含量的方法. 優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、計(jì)算方便 缺點(diǎn)：需嚴(yán)格控制進(jìn)樣體積，操作條件應(yīng)穩(wěn)定,單點(diǎn)校正 前提：曲線過原點(diǎn) 配一與被測組分含量接近的標(biāo)樣Ps，進(jìn)樣量同分析樣品。 Ai Pi Ps=Ki Ai As Ki：標(biāo)樣單位峰面積所代表的百分含量 不過原點(diǎn)，雙點(diǎn)校正。,熒光分析法,特點(diǎn)：靈敏度高，選擇性好。（熒光法靈敏度可達(dá)1010g/ml1012g/ml，而一般紫外可見分光光度法的靈敏度約為107g/ml。）

37、適用：成分本身具有熒光或經(jīng)衍生化能轉(zhuǎn)變 為熒光化合物 稀溶液中測定 產(chǎn)生熒光必須具備兩個(gè)條件： 第一是物質(zhì)分子必須有強(qiáng)的紫外可見吸收；第二是必須具備較高的熒光效率。,原理： 若濃度C很小，當(dāng)ECL0.05時(shí)，則： F= 2.3Kf I0ECL = K C 在低濃度時(shí)，溶液的熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系，此系熒光法定量分析的依據(jù)。,定量分析方法：,1標(biāo)準(zhǔn)曲線法 熒光分析一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法（校正曲線法），在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，常采用標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中某一溶液作為基準(zhǔn)，先將空白溶液的熒光強(qiáng)度調(diào)至0，再將該標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度調(diào)至100或50，然后測定系列中其它各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度F，再繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即

38、F-C曲線。,在實(shí)際工作中，當(dāng)儀器調(diào)零之后，先測定空白溶液的熒光強(qiáng)度F0，然后測定各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度F，得（FF0）就是標(biāo)準(zhǔn)溶液本身的熒光強(qiáng)度。通過這樣測定，再繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即（FF0）-C曲線。 為了使不同時(shí)間繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線能前后一致，每次繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)均采用同一標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正。,如果試樣溶液在紫外光照射下不很穩(wěn)定，則須改用另一種性質(zhì)穩(wěn)定，而且所發(fā)生的熒光和試樣溶液的熒光相近似的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為基準(zhǔn)。 如測定維生素B1時(shí)，采用硫酸奎寧的0.05mol/LH2SO4溶液作為基準(zhǔn)(適用于藍(lán)色熒光)； 若為黃綠色熒光可用熒光素鈉的水溶液； 紅色熒光可用羅丹明B水溶液為基準(zhǔn)。,2比例法,若標(biāo)準(zhǔn)曲線

39、通過零點(diǎn)，可用比例法進(jìn)行測定。 配制一標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其濃度在線性范圍內(nèi)，測定熒光強(qiáng)度FS，然后在同樣條件下測定試樣溶液的熒光強(qiáng)度FX。由標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度CS和兩種溶液的熒光強(qiáng)度比，求得試樣中熒光物質(zhì)的濃度CX或含量。在空白溶液的熒光強(qiáng)度不為零時(shí)，按下式計(jì)算。,3解線性方程法 多組分混合物的熒光分析也可以象吸收分光光度法一樣利用熒光強(qiáng)度的加和性質(zhì)，采用解線性方程組的方法、雙波長及多波長等方法從混合物中不經(jīng)分離即可測得被測組分的含量。,第四節(jié) 含量測定方法的效能指標(biāo),常用的效能評價(jià)指標(biāo)有： 準(zhǔn)確度、精密度、選擇性、檢測限、定量限、線性與范圍、耐用性等。,分析方法的效能指標(biāo)可以作為對分析方法的評估尺度，

40、也可作為建立新的分析方法的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。,一.準(zhǔn)確度,考察準(zhǔn)確度常用加樣回收率評價(jià) 中藥制劑含量測定的回收率一般要求在95%105%(n5)，RSD一般應(yīng)在3%以內(nèi) 復(fù)雜操作樣品，可要求略低，90%110% 生物樣品，一般控制回收率在 85%115%（樣品藥濃200g/L） 80%120%（樣品藥濃200g/L） RSD爭取達(dá)到5%以內(nèi)，但不超過10%。,二、精密度,重復(fù)性：在相同條件下，由一個(gè)分析人員同一次測定所得結(jié)果的精密度 重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果的精密度 當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn),三、選擇性,選擇性是指在樣品中有其他組分共存時(shí)，該分析方法對被測物

41、準(zhǔn)確而專屬的測定能力。 常用陰性對照法來考察分析方法的選擇性,四、線性與范圍,分析方法的線性是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度成正比關(guān)系的程度。 線性范圍是指能達(dá)到一定精密度，準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間 線性與范圍可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定。 一般 r0.999 薄層色譜掃描定量中r 0.995,五、耐用性,耐用性是指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。,三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目,1. 鑒別試驗(yàn)； 2. 雜質(zhì)定量或限度檢查； 3. 原料或制劑中有效成分含量測定； 4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定； 5. 溶出度、

42、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。,驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性,四、驗(yàn)證內(nèi)容,加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M,（一） 準(zhǔn)確度（accuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。,測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。,回收試驗(yàn) 空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M,數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測三次。,1. 含

43、量測定方法的準(zhǔn)確度,原料藥可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。,制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。,中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在95105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時(shí)，可要求在90110%范圍內(nèi)。RSD一般在3%以內(nèi)。,2雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法

44、進(jìn)行比較。,（二）精密度（precision） 精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。,偏差（d）：測量值與平均值之差,標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）,相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）,1. 重復(fù)性 在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進(jìn)行評價(jià)。,2. 中間精密度 同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影

45、響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備,3. 重現(xiàn)性 不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。,（三） 檢測限（limit of detection， LOD） 檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。是限度試驗(yàn)參數(shù)，無需定量測定。常用%、ppm、ppb表示。,1非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。,2信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號(hào)與空白樣品測出的

46、信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）31或21時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。,3數(shù)據(jù)要求 應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。,（四）定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。,常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為101時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定。,（五）專屬性（specificity） 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的

47、方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。,（六） 線性 在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。,UV HPLC GC,（七）范圍 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。,原料藥、制劑 80120 制劑含量均勻度檢查 70130 溶出度、溶出量 限量的20,（八） 耐用性 指測定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。,（九）應(yīng)用 1. 鑒別試驗(yàn)除專屬性、耐用性外，其它都不要求。,2. 雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求。雜質(zhì)的定量測定除檢測限外，其它都要求。,3. 含量測定及溶出量測定除檢測限、定量限外，其它都要求。,（十）各種含量測定方法對效能指標(biāo)的要求 1. 容量分析法：用原料藥精制品(含量99.5)或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏龋鄬?biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.2；進(jìn)行回收率試驗(yàn)