美白劑實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用PPT課件

1、.,1,美白劑實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用,大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科 涂彩霞,.,2,1.研究方法 2.研究方向 3.美白劑的應(yīng)用,.,3,1.主要研究方法,（1）美白活性成分分析 是指通過(guò)高效液相色譜等方法對(duì)美白化妝品中的美白活性物質(zhì)進(jìn)行種類(lèi)和含量的測(cè)定。,.,4,1.主要研究方法,（2）細(xì)胞水平功效測(cè)定 檢測(cè)內(nèi)容：黑素含量測(cè)定、酪氨酸酶活性、蛋 白表達(dá)、mRNA水平測(cè)定、信號(hào)傳導(dǎo)通路等。,.,5,1.主要研究方法,（2）細(xì)胞水平功效測(cè)定 1）細(xì)胞模型 B16黑素瘤細(xì)胞 大多數(shù)研究中，采用B16黑素瘤細(xì)胞檢測(cè)色素抑制作用（PI）,.,6,1）細(xì)胞模型,melan-a或mel-ab黑素細(xì)胞或正常人

2、黑素細(xì)胞(nHEM) 正常人黑素細(xì)胞(nHEM)更好的模擬體內(nèi)環(huán)境，但黑素細(xì)胞更難維持培養(yǎng)。 源于小鼠或人皮膚的黑素細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)更貼近體內(nèi)環(huán)境，體外系統(tǒng)的皮膚等效模型（SEM）也用于皮膚美白研究。,.,7,2）主要實(shí)驗(yàn)方法,酪氨酸酶活性檢測(cè)方法有放射性同位素法、免疫學(xué)法和生化酶學(xué)法，其中以生化酶學(xué)法較為簡(jiǎn)單成熟，如氧化多巴法。 細(xì)胞中色素含量測(cè)定是美白化學(xué)物功能評(píng)價(jià)的最重要檢測(cè)指標(biāo)。目前多采用生物化學(xué)-分光光度法測(cè)定黑素細(xì)胞中的黑素含量，此法經(jīng)典穩(wěn)定 。,.,8,2）主要實(shí)驗(yàn)方法,信號(hào)傳導(dǎo)通路蛋白表達(dá)Western Blot，免疫組化，流式細(xì)胞術(shù)，ELISA等 mRNA轉(zhuǎn)錄Rt-P

3、CR,.,9,（3）動(dòng)物實(shí)驗(yàn),棕色豚鼠模型 黃棕色豚鼠皮膚黑素細(xì)胞和黑素小體的分布近似于人類(lèi)，試驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好，常采用UV或-MSH誘導(dǎo)色素沉著。 斑馬魚(yú)模型 對(duì)顯示美白制劑體內(nèi)毒性具有意義,.,10,（4）人體實(shí)驗(yàn),視覺(jué)評(píng)分主觀性強(qiáng)，不精確 照相對(duì)比受光線及拍攝條件的影響 FoToFinder dermoscope 儀，由攝像機(jī)和顯微鏡頭組成，可以對(duì)色素沉著區(qū)進(jìn)行拍照、放大，并進(jìn)行圖像處理，計(jì)算各種參數(shù)如皮損大小、邊緣情況、結(jié)構(gòu)參數(shù)，同時(shí)作出安全評(píng)價(jià)，是一種常用的色斑評(píng)價(jià)法。,.,11,（4）人體實(shí)驗(yàn),三色分析法：通過(guò)檢測(cè)皮膚表層結(jié)構(gòu)上的紫外可見(jiàn)反射光，采用三維顏色空間分量的定量，來(lái)模擬并還

4、原描述人肉眼所看到的物體的顏色，經(jīng)過(guò)計(jì)算來(lái)綜合評(píng)價(jià)皮膚的色度。,.,12,（4）人體實(shí)驗(yàn),漫反射光譜法：針對(duì)皮膚顏色的特征性發(fā)色基團(tuán)，如黑色素、血紅蛋白等，選擇特定波長(zhǎng)掃描，測(cè)定皮膚表面的反射光譜，從而對(duì)皮膚中的血紅蛋白和黑色素等進(jìn)行定量，其測(cè)量參數(shù)能較好地從生理學(xué)上解釋皮膚顏色的改變。,.,13,（4）人體實(shí)驗(yàn),數(shù)字化成像定量技術(shù)是顯微鏡照相技術(shù)和計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)的結(jié)合，能夠?qū)ι爻林M(jìn)行掃描并進(jìn)行色度定量，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)信息的轉(zhuǎn)換，可以計(jì)算得出各種發(fā)色團(tuán)的含量，以此來(lái)綜合評(píng)價(jià)皮膚色度的變化，從而可對(duì)化妝品的祛斑效果進(jìn)行準(zhǔn)確的定量評(píng)價(jià)。,.,14,1.研究方法 2.研究方向 3.美白

5、劑的應(yīng)用,.,15,2.主要研究方向,2.1 抑制酪氨酸酶活性及表達(dá) 2.2 抑制黑素向角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)移 2.3 抑制氧化反應(yīng) 2.4 抑制炎癥反應(yīng) 2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,16,2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達(dá),4-羥基茴香醚：作為酪氨酸酶替代底物引起色素減退 針葉中提取茶多酚或從黑桑樹(shù)中分離的查爾酮衍生物可抑制酪氨酸酶活性。,.,17,從大豆胚軸酒曲soygerm koji分離出來(lái)的兩個(gè)8-羥基異黃酮： 具有不可逆抑制酪氨酸酶活性作用 面包樹(shù)(Artocarpus incisus)或龍膽(根) (Sophora flavescens)分離的間苯二酚特有的側(cè)基（與C4, C5 或C8

6、位置置換）抑制酪氨酸酶活性,2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達(dá),.,18,對(duì)天然化合物進(jìn)行修飾，如經(jīng)Veratrum patulum提取物的纖維素酶的處理，使二苯乙烯化合物去糖基化，可提高對(duì)酪氨酸酶的抑制作用。,2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達(dá),.,19,N-乙酰氨基葡萄糖(Nacetylglucosamine，NAG)是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)透明質(zhì)酸的主要成分，局部外用NAG可以減輕女性面部皮膚色素沉著?？赡芘c抑制酪氨酸酶的糖基化有關(guān)。,2.1 抑制酪氨酸酶活性或表達(dá),.,20,2.2 抑制黑素向角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)移,蛋白酶激活受體2（PAR-2）對(duì)于黑素小體從黑素細(xì)胞向角質(zhì)形成細(xì)胞的轉(zhuǎn)移非常重要，可以用于皮

7、膚美白的靶點(diǎn)。 維生素B3衍生物煙酰胺是一種抑制黑素小體轉(zhuǎn)移的制劑。,.,21,黑素細(xì)胞表達(dá)高水平的sAPP sAPP在通過(guò)樹(shù)突末梢釋放黑素小粒過(guò)程中可能發(fā)揮重要的作用 阻斷sAPP信號(hào)可能是另一種影響黑素小體輸送的途徑,2.2 抑制黑素向角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)移,.,22,2.3 抑制氧化反應(yīng),減少黑素細(xì)胞中活性氧ROS水平可能阻止黑素合成的活化 Fujiwara等發(fā)現(xiàn)每日給棕色豚鼠服用維生素C（抗壞血酸）、維生素E和半胱氨酸可減少UVB誘導(dǎo)的色素沉著 維生素C更穩(wěn)定的衍生物如抗壞血酸葡糖苷和抗壞血酸棕櫚酸酯已被用在不同的皮膚美白配方中,.,23,2.4 抑制炎癥介質(zhì),馬尾藻提取物具有抑制炎癥介質(zhì)產(chǎn)

8、生的作用。通過(guò)這種間接的方法減少色素細(xì)胞內(nèi)黑素生成。,.,24,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,25,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,UV反應(yīng)通過(guò)cAMP和PKA介導(dǎo)信號(hào)系統(tǒng)及蛋白激酶C (PKC)，可能增加小眼畸形轉(zhuǎn)錄因子(MITF)表達(dá)，導(dǎo)致酪氨酸酶活化。 通過(guò)特異性PKC抑制劑bisindolylmaleimide (bis)可減少豚鼠的曬黑反應(yīng)，使其毛發(fā)顏色變淡。,.,26,信號(hào)系統(tǒng)可誘導(dǎo)多種途徑產(chǎn)生堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、干細(xì)胞因子(SCF)、內(nèi)皮素-1 (ET-1)、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）和-促黑激素(-MSH)，結(jié)合黑素細(xì)胞上的受體，刺

9、激色素產(chǎn)生。,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,27,Wnt/-catenin途徑 ： Wnt蛋白和其受體的結(jié)合可被Dikkopf 1(DKK1)抑制，DKK1是一種成纖維細(xì)胞分泌的因子，可抑制黑素細(xì)胞生長(zhǎng)并強(qiáng)烈抑制黑素生成。,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,28,SCF/c-kit途徑： 肝細(xì)胞因子是一種結(jié)合于c-kit受體 (CD117)的細(xì)胞因子，活化c-kit而導(dǎo)致多重信號(hào)級(jí)聯(lián)的活化。 Na等發(fā)現(xiàn)苯基咪唑磺酰胺衍生物阻止干細(xì)胞因子誘導(dǎo)的人類(lèi)黑色素瘤細(xì)胞ckit磷酸化，進(jìn)而阻止了UV誘導(dǎo)的棕色豚鼠的色素沉著。,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,29,Yaar等提出骨形成蛋白(BMPs)

10、參與調(diào)節(jié)黑素合成。黑素細(xì)胞表達(dá)BMP受體并產(chǎn)生BMP-4，可降低培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞的黑素合成。 過(guò)氧化物酶體增殖子活化受體(PPAR)：十八碳烯二酸（octadecenedioic acid）結(jié)合PPAR降低黑素合成和酪氨酸酶表達(dá)。,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,30,Kim等報(bào)道細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)的信號(hào)通路可調(diào)節(jié)黑素生成。生長(zhǎng)因子（bFGF和HGF）和細(xì)胞因子(SCF)可激發(fā)此途徑。 c2-神經(jīng)酰胺通過(guò)活化ERK抑制黑素合成 2-亞胺基-1,3二氫噻唑衍生物，可通過(guò)誘導(dǎo)ERK降低B16黑素瘤細(xì)胞的黑素生成,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,31,土曲菌素可刺激ERK和下調(diào)MITF

11、，可抑制Mel-ab黑素細(xì)胞黑素合成 咪唑衍生物AVS-1357，可通過(guò)活化ERK和下調(diào)MITF、酪氨酸酶減少色素生成 Haginin A抑制酪氨酸酶并活化ERK，下調(diào)MITF、酪氨酸酶和TRP-1，降低棕色豚鼠和斑馬魚(yú)模型系統(tǒng)的色素沉著,2.5 調(diào)節(jié)黑素生成信號(hào)通路,.,32,1.研究方法 2.研究方向 3.美白劑的應(yīng)用,.,33,3、美白劑的應(yīng)用,氫醌(HQ)作為有效美白制劑曾廣泛使用，但最近已被禁用，因?yàn)榇嬖趪?yán)重的安全問(wèn)題：可能導(dǎo)致突變，增加非洲國(guó)家褐黃病的發(fā)生率。,.,34,曲酸、熊果苷和壬二酸常用 熊果苷是氫醌的糖基化形式，存在于熊果提取物中，也可由氫醌經(jīng)(葡萄)糖苷酶作用來(lái)合成。

12、脫氧熊果苷是是去除熊果苷全部葡萄糖側(cè)鏈中的羥基組制得，毒性明顯低于熊果苷。,3、美白劑的應(yīng)用,.,35,熊果提取物（-熊果苷的自然來(lái)源）可能增強(qiáng)Meladerm和Lucederm制劑中-熊果苷的作用。 桑椹和甘草活性成分具有酪氨酸酶抑制作用(TI)和色素減少(PI)的作用。,3、美白劑的應(yīng)用,.,36,檸檬提取物作為一種有效的皮膚脫色成分應(yīng)用于Skin Bright, Lucederm和Meladerm等國(guó)外產(chǎn)品。但高濃度容易引起皮膚刺激。 槐屬Sophora的一些活性成分作為酪氨酸酶和色素生成有效的抑制劑用于LiBiol的Synerlight產(chǎn)品中。,3、美白劑的應(yīng)用,.,37,獼猴桃中的黃

13、酮類(lèi)（如槲皮素）用于抑制黑素生成 煙酰胺除具有抑制酪氨酸酶作用外，還干擾黑素小體向角質(zhì)形成細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，用于Meladerm和Lucederm產(chǎn)品中,3、美白劑的應(yīng)用,.,38,Revitol公司的Skin Brightener產(chǎn)品含有二乙酰波爾定堿（diacetyl boldine）可影響酪氨酸酶表達(dá)水平。 Bayer公司的Mandresy（butterfly tree）含有兩種化合物四羥黃酮和毛蕊花糖苷，不僅抑制酪氨酸酶和色素生成，而且通過(guò)減少樹(shù)突的形成影響角質(zhì)形成細(xì)胞和黑素細(xì)胞之間的相互作用。,3、美白劑的應(yīng)用,.,39,Meladerm和Tosseki美白乳含有多種明顯抑制酪氨酸酶的提取

14、物的混合物（桑椹、甘草、槐屬和薔薇紅酰胺），還含有其他抗氧化劑或抗炎劑。 Meladerm制劑中的一種成分是TegoCosmo，含有一種胍化合物，影響酪氨酸酶活性。另一種成分是Giga white，含有阿爾卑斯山不同植物的提取物，可能具有酪氨酸酶抑制作用。,3、美白劑的應(yīng)用,.,40,Lipotec公司在其美白產(chǎn)品中使用二甲基甲氧基苯并二氫吡喃基棕櫚酸酯，可減少黑素生成。 Sederma公司利用一種稱(chēng)為O.D.A. White的活性成分，針對(duì)過(guò)氧化物酶體增殖子活化受體(PPAR)作用機(jī)制，減少酪氨酸酶mRNA的表達(dá)。,3、美白劑的應(yīng)用,.,41,薇諾娜（WINONA）美白系列醫(yī)學(xué)護(hù)膚品(滇虹藥業(yè))含甘草提取物、木瓜蛋白酶、透明質(zhì)酸、牛油果樹(shù)果油、馬齒莧提取物。 甘草提取物具有抑制抗炎作用 木瓜