常用pH緩沖溶液的配制和pH值;

1、（一）溶液配制注意事項 1藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級純（保證試劑，guaranteedreagent，gr）、分析試劑（antalyticalreagent，ar）化學(xué)純（chemicalpure，cp）和實驗試劑（laboratoryreagent，lr）等等。工業(yè)用的化學(xué)試劑，雜質(zhì)較多，只在個別情況下應(yīng)用，如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。 2藥品稱量要精確。 3配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水，比電阻值在50萬歐姆以上，ph在5.57.0之間才可應(yīng)用，在組織培養(yǎng)等特殊用途時應(yīng)注意此項要求，配制一般化驗用溶液只要求用雙蒸餾水或去離子水。 配好后的溶液，應(yīng)立即除菌處理（如高壓

2、滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)），以防雜菌生長。 （二）0.067（1/15）mol/l磷酸緩沖液 11/15mol/l磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀（kh2po4，ar）9.08g，用蒸餾水溶解后，傾入1000ml容量瓶內(nèi)，再稀釋至刻度（1000ml）。 2/15mol/l磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無水磷酸氫二鈉（na2hpo4，a.r.）9.47g（或者na2hpo42h2o11.87g）用蒸餾水溶解后，放入1000ml容量瓶內(nèi)，再加蒸餾水稀釋至刻度（1000ml）。 3按附表的比例，配制成不同ph值的緩沖溶液。 附表1磷酸鹽緩沖液配制法（單位：毫升） ph1/15mol/lna2hpo41

3、/15mol/lkh2po4ph1/15mol/lna2hpo41/15mol/lkh2po4 5.88.092.07.166.623.4 5.99.990.17.272.028.0 6.012.287.87.376.823.2 6.115.384.77.380.819.2 6.218.681.47.584.115.9 6.322.477.67.687.013.0 6.426.773.37.789.410.6 6.531.868.27.891.58.5 6.637.562.57.993.26.8 6.743.556.58.894.75.3 6.849.64.2 6.955

4、.444.68.297.03.0 7.098.02.0 （三）0.15mol/lpb液 附表20.15mol/lpb液配制法 ph0.15mol/lna2hpo4（ml）0.15mol/lnah2po4（ml） 6.426.573.5 6.637.562.5 6.849.051.0 7.061.039.0 7.272.028.0 7.481.019.0 7.687.013.0 na2hpo42h2o分子量=175.050.15mol/l溶液含26.7g/l。 na2hpo412h2o分子量=358.220.15mol/l溶液含53.7g/l。 nah2po4h2o分子量=

5、138.000.15mol/l溶液含20.7g/l。 nah2po42h2o分子量=156.030.15mol/l溶液含23.4g/l。 （四）0.2mol/lpb緩沖液 附表30.2mol/lpb緩沖液配制法 ph0.2mol/lna2hpo4（ml）0.2mol/lnah2po4（ml） 5.88.092.0 6.012.387.7 6.218.581.5 6.426.573.5 6.637.562.5 6.849.051.0 7.061.039.0 7.272.028.0 7.481.019.0 7.687.013.0 7.891.58.5 8.094.75.3 0.2mol/lna2h

6、po42h2o溶液35.61g/l na2hpo412h2o溶液含71.64g/l 0.2mol/lnah2po4h2o溶液含27.60g/l nah2po42h2o溶液含31.21g/l 欲配0.1mol/lpb緩沖液則在0.2mol/lpb緩沖液的基礎(chǔ)上加h2o稀釋1倍即可。欲配制pbs液時，則在溶液中加0.85的nacl溶液即可。 （五）無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（pbs） （0.15mol/lph7.2） nacl8.0g kcl0.2g na2hpo41.15g （如為na2hpo412h2o，則為2.89g） kh2po40.2g 將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，

7、115高壓滅菌10min15min，存在4冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細胞分散劑以及洗滌細胞培養(yǎng)物。 （六）硼酸鹽緩沖液（boratesalinebuffer）文章來自：醫(yī)藥園()整理：zfg 1硼酸（3bo3） 0.2mol/l硼酸：硼酸12.37g加水至1000ml。 2硼砂（na2b4o7） 0.05mol/l硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。 附表4不同ph的0.2mol/l硼酸緩沖液配制法 ph0.05mol/l硼砂（ml）0.2mol/l硼酸（ml）ph0.05mol/l硼砂（ml）0.2mol/l硼酸（ml） 7.41.09.0

8、 7.82.08.08.76.04.0 8.03.07.09.08.02.0 （七）巴比妥緩沖液 1ph8.2離子強度0.05mol/l巴比妥緩沖液 巴比妥鈉47.6g 蒸餾水3000ml 1.17nhcl55.0ml （1.17nhcl=193ml濃hcl加1807ml蒸餾水） 將4.76g巴比妥鈉溶于3000ml蒸餾水。 加1.17nhcl55ml。 用hcl調(diào)節(jié)ph到8.2，并加蒸餾水至4265ml。 2ph8.40.06mol/l巴比妥緩沖液 巴比妥1.84g 巴比妥鈉10.30g 加蒸餾水至1000.00ml 3ph8.60.0

9、6mol/l巴比妥緩沖液 巴比妥1.66g 巴比妥鈉12.76g 加蒸餾水1000.00ml （八）0.2mol/l醋酸鹽緩沖液見表附表5 附表50.2mol/l醋酸鹽緩沖液配制法 ph0.2mol/l tris（ml）0.1mol/l hcl（ml）ph0.2mol/l tris（ml）0.1mol/l hcl（ml） 23372337 9.108.952558.067.902527.5 8.928.76257.57.967.822530.0 8.758.602510.57.877.732532.5 8.628.482512.57.777.632535.0 8.508.372515.57.6

10、67.522537.5 8.408.272517.57.547.402540.0 8.328.182520.07.367.222542.5 （九）三羥甲基甲烷鹽酸緩沖液（trishcl緩沖液） 不同ph，0.05mol/l 25ml0.2mol/l三羥甲基氨基甲烷加ml0.1nhcl，加水稀釋至100ml（見下表） 附表6trishcl緩沖液配制法 ph0.2mol/l tris(ml)0.1nhcl (ml)ph0.2mol/l tris(ml)0.1nhcl (ml) 23372337 9.108.962558.057.902527.5 8.928.78257.57.967.822530.

11、0 8.748.602510.07.877.732532.5 8.628.482512.57.777.632535.0 8.508.372515.07.667.522537.5 8.408.272517.57.547.402540.0 8.328.182520.07.367.222542.5 8.238.102552545.0 8.148.002525.025 三羥甲基氨基甲烷（tris） 分子量=121.14 0.2mol/l三羥甲基氨基甲烷：tris24.23g，加水至1000ml。 0.1nhcl：取hcl8.6ml，加水至1000ml。 （十）0.5mol/lph

12、9.5碳酸鹽緩沖液 nahco33.70g na2co30.60g 溶于600.00ml蒸餾水中即得。 不用時塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使ph下降。最好小量配制。 （十一）甘油磷酸緩沖液 1配制ph8.0磷酸緩沖液 0.1mol/lna2hpo494.50ml 0.1nnah2po45.50ml 混合即可 29份甘油與1份ph8.0磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。 用途：用于免疫熒光試驗。 （十二）hanks液 1貯存液 nacl80.00g kcl4.00g na2hpo412h2o1.52g kh2po40.60g 葡萄糖4.00g 0.4酚紅液50.00ml 雙餾水加至100.

13、00ml 115高壓滅菌15min，冰凍保存。 2工作液 貯存液1份 雙餾水9份 115高壓滅菌15min。臨用時用滅菌的5.6nahco3液調(diào)ph值至7.2左右（溶液呈橙紅色）。 （十三）萘（鈉）氏試劑（nesslersreagent） 配方1：氯化汞6.0g 碘化鉀12.4g 20naoh30ml 加蒸餾水至100ml 配方2：碘化汞11.5g 碘化鉀8g 蒸餾水50ml （完全溶解后）過濾，加20naoh50ml。 用途：檢測溶液中氨離子。 （十四）阿氏（alsevers）液 葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.80g 氯化鈉0.42g 蒸餾水100ml 溶解后，以10%檸檬酸調(diào)節(jié)ph至6.1

14、，過濾，分裝，10磅10min滅菌，4保存。 （十五）青、鏈霉素混合液（簡稱sp液或雙抗液） 青霉素（40萬u）5支 鏈霉素（200萬g）1支 分別溶于100ml滅菌無離子水中或共同溶于200ml滅菌無離子水中，混合后分裝小瓶，置-10-20冰箱保存?zhèn)溆茫?萬單位g/ml）。 臨用時，按1%的量加入營養(yǎng)液或其他溶液中，最后濃度是青霉素100u/ml，鏈霉素100ug/ml。 （十六）洗液（清潔液） 配方1：重鉻酸鉀150g 蒸餾水300ml 濃硫酸3000ml 將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩堝中加熱溶解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見發(fā)熱過劇則稍停，冷卻后再繼續(xù)

15、加。此為強洗液。 盛清潔液的容器要堅固，上加厚玻璃蓋，操作時要穿橡皮圍裙、長統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。 洗液一旦變綠，表示鉻酸已經(jīng)還原，失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗液加熱，再加適量重鉻酸鉀，又可重新使用。 配方2：濃硫酸50% 蒸餾水50% 重鉻酸鉀5% 此為中等強度洗液。 配方3：重鉻酸鉀100g 蒸餾水1000ml 加熱溶解，冷卻后緩慢加入 工業(yè)硫酸100ml 此液為弱洗液，為棕紅色。使用此液時，必須預(yù)先用熱肥皂水將玻璃器皿洗凈，經(jīng)自來水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效緩沖溶液（英文：buffer solution）是一種能在加入少量酸或堿和水時大大減低ph

16、變動的溶液。ph緩沖系統(tǒng)對維持生物的正常ph值和正常生理環(huán)境起到重要作用。多數(shù)細胞僅能在很窄的ph范圍內(nèi)進行活動，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的ph變化。在生物體中有三種主要的ph緩沖體系，它們是蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng)、重碳酸鹽緩沖系統(tǒng)以及磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常需要使用緩沖溶液來維持實驗體系的酸堿度。研究工作的溶液體系ph值的變化往往直接影響到研究工作的成效。如果“提取酶”實驗體系的ph值變動或大幅度變動，酶活性就會下降甚至完全喪失。所以配制緩沖溶液是一個不可或缺的關(guān)鍵步驟。 編輯本段常用作緩沖溶液常用作緩沖溶液的酸類由弱

17、酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的ph值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。 硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。 檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。 磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在ph7.5以上時緩沖能力很小。 三羥甲基氨基甲烷

18、：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點時溫度效應(yīng)。這點往往被忽視，在室溫ph是7.8的tris緩沖液，4時是8.4，37時是7.4，因此，4配制的緩沖液在37進行測量時，其氫離子濃度就增加了10倍。在ph7.5以下，其緩沖能力極為不理想。 編輯本段緩沖溶液組成緩沖體系由 、弱酸和它的鹽（如hac-naac） 2、弱堿和它的鹽（nh3.h2o-nh4cl） 3、多元弱酸的酸式鹽及其對應(yīng)的次級鹽（如nah2po4-na2hpo4） 的水溶液組成。 編輯本段決定緩沖液ph值的因素設(shè)緩沖系統(tǒng)的弱酸的電離常數(shù)為k（平衡常數(shù)），平衡時弱酸的濃度為酸，弱酸鹽的濃度為鹽，則由弱酸的電離平衡式可得下式： h+ = ka 弱酸/共軛堿 ph = pka + log 共軛堿/弱酸 這就是henderson-hasselbach 等式。 如果弱酸 = 共軛堿， ph = pka 根據(jù)此式可得出下列幾點結(jié)論