生化實(shí)驗(yàn)：酶活力及蛋白含量測定_第1頁
生化實(shí)驗(yàn)：酶活力及蛋白含量測定_第2頁
生化實(shí)驗(yàn)：酶活力及蛋白含量測定_第3頁
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文檔簡介

1、E1、E2、E3酶活力及蛋白質(zhì)濃度的測定,酶活力的測定： 1樣品前處理：測定E1、E2、E3酶活時(shí)，用pH4.6, 0.2mol/L的醋酸緩沖液進(jìn)行稀釋。（E1稀釋5倍、10倍、20倍；E2稀釋50倍、100倍; E3稀釋20倍，50倍） 取兩支試管分別加入用pH4.6,0.2mol/L的醋酸緩沖液適當(dāng)稀釋過的酶液2ml； 一支中加入0.5ml 1mol/L的NaOH，搖勻，使酶失活（對照取E1 20倍稀釋 1管即可）； 另一支做測定管； 把兩支試管和5%的蔗糖溶液放入35水浴中預(yù)熱恒溫（10min）； 分別取2ml 5%的蔗糖加入上述兩試管中，開始計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確反應(yīng)3分鐘，于測定管中加入0.5m

2、l 1mol/L的NaOH，搖勻，終止反應(yīng)。,2.酶活力的測定：從兩個(gè)反應(yīng)試管中各取出0.5ml溶液放入血糖管中，加入3ml 3,5 二硝基水揚(yáng)酸試劑和1.5ml水，搖勻，于沸水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5min，立即用冷水冷卻，加水稀釋至25ml，搖勻，于540nm處測光密度。 3. 酶活力計(jì)算：在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到所測定光密度值對應(yīng)的葡萄糖含量毫克數(shù)，按下面公式計(jì)算酶活力： E = (葡萄糖mg數(shù)(4.5/0.5)E的稀釋倍數(shù)/2ml)/2 蔗糖酶活力的規(guī)定：在本實(shí)驗(yàn)條件下，每3分鐘釋放1毫克還原糖所需的酶量定義為一個(gè)活力單位。 注意：在測定E1、E2、E3酶活力和蛋白濃度時(shí)，應(yīng)留取少許樣品（100ml左右），留作電泳實(shí)驗(yàn)。 注：在正交試驗(yàn)的測定中，共需稀釋到50U/mL的E3約為12mL。,蛋白含量的測定：,樣品的測定：取兩支試管（平行）各加入樣品液（稀 成一定濃度的）1ml ，其他操作（反應(yīng)和比色測定）同 工作曲線的制作。 蛋白質(zhì)濃度的計(jì)算： A650值對應(yīng)的g數(shù)(Pr)10-3 Pr (mg/ml)= 稀釋倍數(shù) Pr溶液的ml數(shù) 測定E1蛋白含量（大約稀釋200、100倍），測定E2蛋白 含量（大約稀釋5

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