藥理實驗指導 (2)

1、.藥理實驗指導 總論、鏈霉素毒性、肝臟在藥物代謝中的作用一、藥理學實驗課的目的和要求：（一）目的：（1）使學生掌握進行藥理學實驗的基本方法，了解獲得藥理學知識的科學途徑（2）驗證藥理學中的重要基本理論，更牢固地掌握藥理學的基本概念。（3）培養(yǎng)對科學工作的嚴肅的態(tài)度、嚴格的要求、嚴密的工作方法和實事求是的作風，并初步具備客觀地對事物進行觀察、比較、分析、綜合和解決問題的能力。（二）要求：（1）實驗前做好預習工作，結合實驗內(nèi)容，復習有關藥理學、生理學和生物化學等方面的理論知識，并領會實驗設計的原理。（2）實驗時認真操作，仔細觀察，并做好實驗記錄。（3）實驗后整理實驗結果，并進行分析思考，認真書寫實

2、驗報告，并做好實驗室的清潔衛(wèi)生，關好水、電。二、實驗設計的基本原則（1）重復性（2）對照性（3）隨機性三、藥理學實驗的一般方法和技術（一）實驗動物選擇的原則和方法1、首先要根據(jù)實驗的目的選擇實驗動物2、選用來源清楚、遺傳背景明確的實驗動物 3、選用容易獲得、價格便宜、易于飼養(yǎng)與管理的實驗動物4、必須注意實驗動物種類、品系的質(zhì)量及健康狀況是否良好5、選用人畜共患疾病的實驗物物和傳統(tǒng)應用的實驗動物 （二）實驗動物的選擇：常用的實驗動物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、貓、狗。常根據(jù)不同的實驗目的和要求選用不同的實驗動物，所選用的動物必須能較好地反映試驗藥物的選擇性作用并符合節(jié)約的原則。蛙和蟾

3、蜍：離體心肌，觀察藥物對心臟的作用。坐骨神經(jīng)和腓腸肌，觀察藥物對周圍神經(jīng)肌肉或橫紋肌的作用。小白鼠：1.小鼠屬于脊椎動物門，哺乳綱，嚙齒目，鼠科，小鼠屬動物。2.成熟早，繁殖力強。3.體形小，易于飼養(yǎng)管理。4.性情溫順，膽小怕驚。 5.對外來刺激極為敏感。6.便于提供同胎和不同品系動物。7.喜居于光線較暗的安靜環(huán)境，習于晝伏夜動，喜歡啃咬。8.體小嬌嫩，不耐饑餓，不耐冷熱，對環(huán)境的適應性差。9.成年雌鼠在動情周期不同階段陰道粘膜可發(fā)生典型變化。適用于需要大量動物的實驗，如藥物篩選，半數(shù)致死量，藥物效價。大白鼠：與小白鼠相似，一些在小白鼠身上不便進行的實驗可用大白鼠。豚鼠：易致敏，常用于平喘藥和

4、抗組胺藥的實驗。家兔：觀察藥物對心臟、呼吸的影響及農(nóng)藥中毒和解救實驗。貓：血壓穩(wěn)定，常用于血壓實驗。狗：觀察藥物對心臟泵功能和血流動力學的影響，心肌細胞電生理研究、降壓及抗休克藥的研究（三）常用的藥物給藥途徑1、經(jīng)口給藥（灌胃）2、皮下注射3、肌肉注射4、腹腔注射5、靜脈注射（四）實驗動物的捉拿和給藥方法小白鼠：捉拿法：右手提起尾部，放在鼠籠或其他糊糙面上，向后上方輕拉，迅速用左手食指和拇指捏住小鼠頸背部皮膚并以小指和手掌尺側夾其尾根部固定于手中。給藥法：（1） 灌胃法：左手捉拿小鼠后，使口朝上，頸部輕輕拉直，右手持吸有藥液的注射器，將灌胃針頭從口角插入口腔，沿上腭向食道輕輕推進，如遇阻力應抽

5、出灌胃針管重插。當推進約23公分時，動物安靜，呼吸無異常，即可將藥液緩緩推入。0.1-0.3ml/10g。（2） 腹腔注射法：左手捉拿小鼠后，使腹部朝上。右手持盛有藥液的注射器，自左腹下部插入，針頭與腹壁的角度呈45度。針頭進入腹腔時可有抵抗力消失感。先回抽一下無氣泡或血后，輕輕推入藥液。0.1-0.2ml/10g。（3）皮下注射法：左手捉拿小鼠固定頭部，然后用左手無名指及小指將小鼠左后肢及背部壓在掌面，右手持注射器，自頭側背部插入皮膚，注入藥液。拔針時，輕捏針刺部位片刻，以防藥液溢出。注射量0.050.25ml/10g。（4）肌肉注射法：將小鼠捉住，固定左后肢，將注射器插入大腿肌肉，在注射前

6、，應回抽針栓，如無回血，則可給藥。注射量一般為0.2ml/次。（5）尾靜脈注射法：將小鼠置入特別鼠筒中，尾巴露出。用酒精棉球擦拭使尾血管擴張。以無名指和小指夾持尾尖，用中指托起尾巴，使之固定。選其一側尾靜脈穿刺。如針頭在血管內(nèi)，推注藥液無阻力。否則皮膚隆起發(fā)白，阻力增大，此時應退回針頭重新穿刺。注射量0.05-0.2ml/10g。家兔：捉拿法：以右手抓住頭頸部皮膚，左手托起臀部，使兔在實驗者手中呈自然匐狀即可。給藥法：（1）腹腔注射法：同小鼠。（2）靜脈注射法：一般采用耳緣靜脈給藥。先將家兔固定于兔箱內(nèi)，拔去注射部位的兔毛，用酒精棉球涂擦耳緣靜脈皮膚使血管擴張。以左手食指放在耳下將兔耳墊起，并

7、以拇指按住耳尖部。右手持帶有6號針頭的注射器，盡量從血管遠端刺入血管。注射時針頭先刺入皮下，向前推進少許，然后刺入血管。針頭刺入血管后再稍向前推進，輕輕推動針栓，若無阻力和局部皮膚發(fā)白隆起現(xiàn)象，即可注藥。否則應將針頭退出，再重新刺入血管。注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭。（五）實驗動物的取血方法（1）小白鼠、大白鼠的取血方法:頸動靜脈和股動靜脈取血：將動物麻醉，暴露相應的血管，用注射器從血管中抽血或剪斷血管，從血管外吸血。心臟取血：動物仰臥位固定，用連接有45號針頭的注射器在左側第34肋間于心搏最強處穿刺，當針刺入心臟時，血液由心臟收縮的力量自動壓入注射器中。也可開胸直接將注射器針刺入心臟抽

8、取血液。尾尖取血：即剪斷尾尖，讓其自行流血，依取血量的多少與次數(shù)處理方法不同。量需要較多時采用麻醉動物并輔以尾部按摩或加溫浴。需多次采用時可分次剪尾?？魟用}或眶靜脈取血：先將動物倒掛壓迫眼球，使眼球突出充血后，以止血鉗迅速摘取眼球后，眼眶內(nèi)很快流出血液，將血滴入預先加有抗凝劑的玻璃器皿內(nèi)，直至不流為止。一般可取動物體重的4%5%血液量。用畢動物死亡，只適于一次使用。斷頭取血：用剪刀剪掉鼠頭，立即將鼠頸向下，提取動物，并對準已準備好的盛血容器，則鼠血從頸部皮膚很快滴入容器內(nèi)。（2）兔取血法：心臟取血：在心搏最明顯處取血。部位是胸骨左緣第3肋間隙旁約3mm處進針。耳緣靜脈取血：局部去毛，用酒精涂擦

9、，使血管擴張，然后以粗大針頭插入耳緣靜脈取血。頸動靜脈和股動靜脈取血：同在、小白鼠的方法。（六）實驗動物的處死方法實驗結束后，常須將動物處死，常用方法如下：頸椎脫臼法：本法適用于小鼠，用手指壓住小鼠的后頭部，捏住鼠尾，用力向上牽拉，使之頸椎脫臼致死。空氣栓塞法：用注射器將空氣急速注入靜脈，可使動物死亡。心臟取血法：用粗針頭一次大量抽取心臟血液，可到動物立即死亡。大量放血法：處死狗時常用此法。操作用在股三角區(qū)橫切約10cm長的切口，切斷股動脈和股靜脈。血液立刻噴出。此時可同時用自來水沖洗。動物可在35分鐘死亡。其它方法：蛙類可斷頭處死，也可用探針經(jīng)枕骨大孔破壞腦和脊髓處死動物。四、處方（一）處方

10、的結構處方包括下列幾項：1、病人的姓名、年齡、科別、處方日期、門診或住院號2、處方箋上常印有R的符號，它是拉丁文Recipe的縮寫，意思是“請取”。3、藥名、劑型和份量：藥名和份量應一起寫，每藥寫一行。劑量和份量寫在藥名的右側。藥物的用量，固體以克（g）為單位，液體以毫升(ml)為單位。一般情況下，克(g)與毫升(ml)不必寫出，其它單位，如：毫克(mg)、微克(g)、國際單位則須注明。藥量小于1單位時，在小數(shù)點前必須加零，整數(shù)后加小數(shù)點和零，以免出差錯。4、調(diào)配方法和用法：必要時必須寫清調(diào)配方法。用法包括每次劑量、每日用藥次數(shù)、給藥途徑與給藥時間。5、處方醫(yī)生簽名。（二）處方的注意事項1、處

11、方必須認真、嚴肅。字跡要清楚，不得任意涂改。不得用鉛筆書寫。2、藥品名稱一律使用經(jīng)正式注冊的藥名或國際非專用藥品名稱，不可使用含義不清未經(jīng)公認的藥名縮寫，以免造成誤解或藥名混淆。3、用藥方法的文字說明應準確明了。藥量不應超過中國藥典的極量。因特殊需要超過的，應加簽醫(yī)生姓名，或用“！”號示意。4、急診處方，須立即取藥的應在處方上寫“急”字。5、處方開好，核對無誤后，才可交與病人。6、開寫英文處方時，制劑名放于藥名后，而拉丁文處方時，制劑名置于藥名前，藥名一般用第二格。肝臟功能狀態(tài)對藥物作用的影響1、目的：觀察肝功能損害時戊巴比妥鈉作用的影響。2、原理：四氯化碳是一種肝臟毒物，其中毒動物常被作為中

12、毒性肝炎的動物模型，用于觀察肝臟功能狀態(tài)對藥物作用的影響。3、材料：小鼠2只、鼠籠、天平、注射器、5%四氯化碳油溶液、0、25%戊巴比妥鈉溶液。4、方法與步驟：在實驗前48小時先取小鼠2只，皮下注射5%四氯化碳油溶液0.1ml/10g，造成肝臟損害。實驗課中取注射過四氯化碳的小鼠和正常小鼠各1只，同樣腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg（即0.25%的溶液0.2 ml/10g）。觀察動物反應。記錄各鼠的翻正反射開始消失時間和恢復時間。注射過四氯化碳的小鼠與正常小鼠的麻醉作用開始時間及麻醉持續(xù)時間有無顯著差別。5、結果動物給戊巴比妥時間麻醉開始時間麻醉恢復時間麻醉持續(xù)時間甲鼠乙鼠6、結論：肝損害鼠較

13、正常鼠麻醉出現(xiàn)更早、持續(xù)時間更長。7、實驗結束后進行討論，肝臟的功能狀態(tài)對藥物作用究竟產(chǎn)生什么樣的影響？為什么？ 鏈霉素的毒性及氯化鈣的對抗作用1、目的：觀察鏈霉素對小白鼠的毒性反應及氯化鈣的對抗作用。2、器材：1ml注射器2副，鼠籠、天平、針頭4號或5號。3、藥品：8%硫酸鏈霉素溶液，5%氯化鈣溶液。4、動物：小白鼠5、方法：取小白鼠兩只，稱重，編號。觀察小白鼠的正常活動情況，甲鼠皮下注射8%硫酸鏈霉素0.1 ml/10g，仔細觀察給藥后小鼠的反應（出現(xiàn)反應的時間與癥狀）；乙鼠先腹腔注射5%氯化鈣溶液0.2 ml/10g，接著皮下注射8%的硫酸鏈霉素0.1 ml/10g，觀察該鼠有哪些反應，

14、并與甲鼠比較。 項目鼠號處理階段呼吸（次/分）四肢肌張力體位甲給藥前給鏈霉素后乙給藥前給氯化鈣、鏈霉素6、結論：鏈霉素的急性毒性為神經(jīng)肌肉接頭阻滯作用，表現(xiàn)為小白鼠肌肉松馳、翻正反射消失、可用CaCL2解救。7、討論：8、實驗結束后進行討論。劑型對藥物吸收作用的影響目的：比較不同劑型烏拉坦液對小鼠作用之差別，認識膠漿劑的延緩藥物擴散作用。材料：小鼠2只、8%烏拉坦水溶液、8%烏拉擔膠漿液（含2.5%羧甲基纖維素）方法與步聚：性別相同、體重接近的小鼠，稱體重，觀察小鼠的一般情況，再分別給藥。1號：皮下注射8%烏拉坦水溶液0.2ml/10g。2號：皮下注射8%烏拉坦膠漿液0.2ml/10g。觀察小

15、鼠對所注射藥物的反應。記錄小鼠出現(xiàn)步態(tài)蹣跚，俯伏不動或臥倒，翻正反射消失等反應的時間。結果：組別反應性質(zhì)起效時間維持時間8%烏拉坦水溶液8%烏拉坦膠漿液傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對小鼠胃腸蠕動的影響目的：觀察新斯的明、阿托品對小鼠胃腸平滑肌的作用。材料：小鼠3只、量尺、0.05%硫酸阿托品溶液、0.002%新斯的明溶液、碳素墨水方法與步聚：小鼠3只實驗前禁食12小時，稱重1號：腹腔注射0.05%硫酸阿托品溶液0.1mg/10g2號：腹腔注射0.002%新斯的明溶液0.1mg/10g3號：腹腔注射生理鹽水0.1mg/10g給藥10分鐘后，用碳素墨水0.2ml灌胃。15分鐘后，將動物處死，打開腹腔，輕輕剝離

16、腸系膜并分離出小腸。從幽門和回盲部剪斷小腸，測量小腸全長和碳末運行距離，計算碳末在小腸的運行率。綜合全班的結果，計算平均值。（標明自己小組的結果。）碳末運行率=幽門至遠端碳末處距離（cm）/小腸全長（cm）100%結果組別小腸長度（cm）碳末運行距離（cm）碳末運行率%0.05%阿托品溶液0.002%新斯的明溶液生理鹽水抗心絞痛藥的抗心肌缺氧作用目的：觀察抗心絞痛藥的抗心肌缺氧作用。原理：由于心肌耗氧量大，相對于其它器官組織更易缺氧，應用異丙腎上腺素后心肌耗氧量更為增加，故藥物提高動物全身抗缺氧能力可視為藥物的抗心肌缺氧作用。材料：小鼠4只、磨口廣口瓶（250ml或125ml）、0.1%普萘洛

17、爾溶液、0.1%異丙腎上腺素溶液、0.005%硝酸甘油溶液方法：將鈉石灰10g（用小紗布包扎）放在廣口瓶的底層，用以吸收小鼠呼出二氧化碳和水分，并在瓶塞磨口處涂抹適量的凡士林，以便密閉，選用同性別、體重相近的小鼠3只，稱重。1號：腹腔注射生理鹽水0.2ml/10g2號：腹腔注射0.005%硝酸甘油溶液0.1ml/10g3號：腹腔注射0.1%普萘洛爾溶液0.2ml/10g15分鐘后，再對各小鼠皮下注射0.1%異丙腎上腺素溶液0.2ml/10g，再過15分鐘，將小鼠放入磨口廣口瓶內(nèi)，每瓶放1只，放入后立即將瓶密閉，并記錄時間，計算出各小鼠的存活時間，統(tǒng)計各組的實驗結果，分析藥物作用。注意事項：1.

18、實驗前先用水測廣口瓶的容量，選用容量相等的廣口瓶。2.動物的性別，體重及室溫對實驗影響較大，可雌雄各半，體重相差不得超過2g。異戊巴比妥鈉的抗驚厥作用目的觀察異戊巴比妥鈉對藥物性驚厥的對抗作用。材料5%尼可剎米溶液、0.5%異戊巴比妥鈉溶液、生理鹽水、小鼠2只方法小鼠2只，稱重1號：腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g2號：腹腔注射0.5%異戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g10分鐘后，各注射5%尼可剎米溶液0.1ml/10g。觀察各鼠有無驚厥（以后肢伸直為驚厥指標）及出現(xiàn)驚厥的速度和程度有何不同。結果：組別驚厥出現(xiàn)時間及程度生理鹽水0.5%異戊巴比妥鈉全血水楊酸鈉二室模型藥動學參數(shù)測定目的：用比

19、色法測定水楊酸鈉血濃度，并利用測得的血藥濃度數(shù)據(jù)計算二室模型的藥動學參數(shù)。器材：試管（10ml9），離心管（10ml11），刻度吸管，注射器，細塑料管，兔氣管插管，動脈夾，小玻棒，試管架，玻璃蠟筆，移液吸管，普通剪刀及手術刀，彎血管鉗，線，天平，分光光度計，離心機，電腦。藥品：10%及0.04%水楊酸鈉溶液，三氯化鐵和三氯醋酸混合液，3%戊巴比妥鈉溶液，0.5%肝素，生理鹽水，0.2%肝素生理鹽水。動物：兔方法：1.術前準備：取離心管11支，編010號，各加入三氯化鐵和三氯醋酸混合液2ml，9號管再加入0.04%水楊酸鈉標準溶液0.6ml，10號管再加蒸餾水0.6ml。2.稱重，麻醉（3%戊巴

20、比妥鈉靜脈注射，1ml/kg或25%烏拉坦腹腔麻醉，1ml/kg），固定，分離左側頸總動脈，在耳緣靜脈注射1%肝素生理鹽水（0.5ml/kg）后再做動脈插管供采血用。3.用干燥注射器從頸總動脈取血0.6ml加入0號管。4.從已分離出的左頸總動脈對側的耳緣靜脈注射10%水楊酸鈉溶液2ml/kg（彈丸式注射）在給藥完畢后的第1、3、5、10、20、50、80和110分鐘從頸總動脈分別取血0.6ml，依次加入第18號管中，振蕩。每次采血后洗凈注射器，用肝素生理鹽水濕潤備用。5.用小玻棒攪拌08號管各1分鐘，分別加入蒸餾水5ml再攪拌1分鐘，3000轉/分，離心10分鐘，移液管取上清液6ml備用，9、

21、10號管各加蒸餾水5ml，搖勻備用。6.在分光光度計上，以波長510nm，1cm光徑比色皿，10號管調(diào)零，測09號管光密度d0-d10。7.將所得數(shù)據(jù)依次輸入電腦，可得相應二室模型的藥動學參數(shù)及曲線。注意事項：1、10%水楊酸鈉溶液注射要快，準確（使Vmax=0）。2、每次取血前放掉一些血，采血準確及時，采血后應洗凈注射器，用肝素生理鹽水濕潤備用。3、攪拌順序應從低濃度向高濃度。扭體法和藥物劑量、給藥途徑對藥物作用的影響及錄像一、扭體法：1、目的：觀察鎮(zhèn)痛藥的鎮(zhèn)痛作用并聯(lián)系其臨床應用。2、動物：小白鼠，同性別，健康鼠。3、器材：燒杯、鑷子、天平、1ml注射器、鼠籠4、藥品：0.2%哌替啶生理鹽

22、水溶液、生理鹽水、2%苦味酸、0.6%冰醋酸溶液。5、方法和步驟：取體重相近同性別小鼠2只，分別稱重，標記，分成2組。腹腔注射給藥，甲組給生理鹽水0.1ml/10g，乙組給哌替啶20mg/kg(0.2%，0.1ml/10g)，20分鐘或30分鐘后，每只鼠腹腔注射0.5%冰醋酸溶液0.1ml/10g，觀察15分鐘內(nèi)小鼠是否出現(xiàn)扭體反應（痛苦癥狀，表現(xiàn)為伸展后肢，收縮腹部、軀體扭曲、使腹肌間歇性地收縮等癥狀）并記錄10分鐘或15分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應次數(shù)，綜合全實驗室結果，求甲、乙二組各鼠10或15分鐘內(nèi)出現(xiàn)的平均扭體反應次數(shù)，并計算藥物鎮(zhèn)痛的百分率。甲組平均扭體反應次數(shù)用藥組平均扭體反應次數(shù)藥物鎮(zhèn)痛

23、百分率-X100%甲組平均扭體反應次數(shù)組別鼠別藥物及劑量15分鐘內(nèi)平均扭體反應次數(shù)鎮(zhèn)痛百分率甲乙二、給藥途徑對藥物作用的影響1、目的：觀察以不同給藥途徑給予同劑量的尼可剎米時，所引起藥理作用的差別。2、材料：小鼠4只、鼠籠、天平、注射器、小鼠灌胃針頭、注射針頭、0.25%硫噴妥鈉溶液。3、方法與步驟：取性別相同、體重相近的小鼠4只，以1、2、3、4編號，分別稱重，觀察各鼠的一般情況，依次給藥。1號鼠，以灌胃法給予0.25%硫噴妥鈉溶液 (0.2ml/10g)。2號鼠，以皮下注射法給予0.25%硫噴妥鈉溶液(0.1ml/10g)。3號鼠，以腹腔注射法給予0.25%硫噴妥鈉溶液(0.2ml/10g

24、)。4號鼠，腹腔注射0.025 %氯丙嗪0.1 ml/10g，10分鐘后腹腔注射硫賁妥鈉0.2mg/10g(0.25%溶液0.2ml/10g)每次給藥后立即記下當時時間，密切觀察小鼠的反應。動物首次出現(xiàn)驚厥時，也立即記下時間。從給藥到首次出現(xiàn)驚厥的一段時間為藥物作用的潛伏期。比較4只小白鼠結果的差別。鼠號性別體重硫噴妥鈉劑量給藥途徑作用潛伏期最后結果12344、對實驗結果進行討論?？剐穆墒С＜把獕簩嶒炓?、目的：1、觀察酚妥拉明、腎上腺素、心得安對血壓的影響2、觀察酚妥拉明對腎上腺素的升壓翻轉作用3、觀察大劑量腎上腺素所到的心律失常及心得安的對抗作用。4、觀察中毒劑量強心苷所致心律失常及利多卡因

25、的抗心律失常作用。二、原理：略三、步驟：1、取一只家兔，稱重，腹腔注射烏拉坦（20%烏拉坦5ml/kg）。麻醉后將兔仰臥固定于手術臺上。2、剪去兔頸部正中毛，切開正中頸部皮膚，分離左側頸總動脈，耳緣靜脈注射0.1%肝素1ml/kg。進行動脈插管，在其遠心端用絲線結扎，近心端用動脈夾夾住，向心方向插與換能器相聯(lián)的充滿抗凝劑的塑料插管，絲線結扎固定。 3、記錄正常血壓變化，然后依次給藥（每次給藥后要注入少量生理鹽水以沖洗管內(nèi)殘留藥物，待血壓等指標恢復到原水平或平穩(wěn)后再給下一藥物）觀察血壓變化給藥順序：1/10000 腎上腺素0.1% ml/kg1%酚妥拉明0.1% ml/kg1%酚妥拉明0.1% ml/kg1/10000 腎上腺素0.1% ml/kg 0.1%普萘洛爾0.5ml/kg 0.1%普萘洛爾0.5ml/kg1/10000 腎上腺素0.1% ml/kg4、在家兔的四肢皮下插入心電電極。(紅右前，藍左前，黑右下)5、觀察心電圖變化。給藥順序：1/5000 腎上腺素1ml/kg (竇律恢復5分鐘后)0.1%普萘洛爾0.5ml/kg(記錄1分鐘后)1/5000 腎上腺素1ml/kg 6、觀察強心苷對心臟毒性及利多卡因的抗心律失常作用：快速推注去乙酰毛花苷47支/只，一出現(xiàn)