微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用演示課件

1、1,11微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用,2,一、微生物培養(yǎng)基的配制,1、培養(yǎng)基定義： 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為人工培養(yǎng)微生物而制備的，提供適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。,思考：微生物細(xì)胞的元素組成是什么？,3,2類型,（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。,區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的形態(tài)。 熔點(diǎn)：96度 凝固點(diǎn)：40度 注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。,應(yīng)用微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)和 菌種保存等方面,4,微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落,用途：純化、計(jì)數(shù)、鑒定,5,液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn),表面生長(zhǎng),均勻混濁生長(zhǎng),沉淀生長(zhǎng),6,半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng),無(wú)動(dòng)力 有

2、動(dòng)力(彌散),7,例、下列敘述不正確的是 A 培養(yǎng)基是為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì) B 液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基所含的最基本物質(zhì)不相同 C 微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，可以形成肉眼可見(jiàn)的單個(gè)細(xì)菌,B.C.,8,（2）按成分分：天然培養(yǎng)基、合成 培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。,依據(jù)：成分是否明確 判斷下列培養(yǎng)基按成分屬于何種培養(yǎng)基？ 牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基 葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基 馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基,9,（3）按功能分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。,基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有微生物生長(zhǎng)所需的基本物質(zhì)。 選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基加入某種物質(zhì)或缺少某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)需要微生物生長(zhǎng)。 舉例說(shuō)明：加鏈霉

3、素培養(yǎng)基作用 加青霉素培養(yǎng)基作用 無(wú)氮培養(yǎng)基作用 鑒別培養(yǎng)基：區(qū)別微生物 伊紅美藍(lán) 產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色 大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤,抗生素，抑制細(xì)菌,10,按功能狀態(tài)分,選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基,從眾多微生物中分離所需的微生物,鑒別不同種類的微生物,加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌,伊紅美籃培養(yǎng)基使大腸桿菌的菌落呈深紫色，可以鑒別大腸桿菌,11,幾種選擇培養(yǎng)基：,加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物,12,微生物生長(zhǎng)需要條件 1、夏天為什么食物

4、容易腐?。?如何處理可以防止腐??？ 2、為什么真空包裝的食品不容易腐敗？ 3、醋酸是否具有殺菌作用？ 以上反應(yīng)了微生物生長(zhǎng)受到哪些條件影響？,細(xì)菌3037 霉菌2528 放線菌2528 12d 34d 57d,大腸桿菌 乳酸菌 破傷風(fēng)桿菌 大多數(shù)細(xì)菌為好氧型,霉菌 5.06.0 細(xì)菌6.57.5 放線菌 7.58.5,13,微生物的類群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌、霉菌,單細(xì)胞的動(dòng)植物 如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類等,微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物,無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu),真核細(xì)胞,細(xì)菌、藍(lán)藻等,原核細(xì)胞,14,3.培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分：,不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、

5、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。,討論：為什么大多數(shù)培養(yǎng)基 都含有這四類物質(zhì)？,？,（1）基本成分：,15,碳源,無(wú)機(jī)碳源：,有機(jī)碳源：,CO2、CO32-、HCO3-,牛肉膏、蛋白胨等,自養(yǎng)微生物,異養(yǎng)微生物,氮源,無(wú)機(jī)氮源：,有機(jī)氮源：,NH4、NO3-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,自養(yǎng)微生物,異養(yǎng)微生物,16,1000mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方,（2）特殊營(yíng)養(yǎng)：,細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而往往自身不能合成的化合物，如維生素、某些氨基酸、堿基等,（3）pH、氧氣等要求,17,碳源,可作為碳源的物質(zhì)有: 含碳無(wú)機(jī)物: 含碳有機(jī)物：,蛋白質(zhì),脂肪酸,不同微生物所利用的碳源不同 異養(yǎng)型微生物的碳源為 自養(yǎng)型微生

6、物的碳源為,碳酸鹽、碳酸氫鹽、二氧化碳,糖類（主要）,含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）,含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)碳）,18,氮源,可作為氮源的物質(zhì)有: 含氮無(wú)機(jī)物： b.含氮有機(jī)物：,蛋白胨,牛肉膏,尿素,氮?dú)?氨氣,硝酸鹽,銨鹽,19,二、無(wú)菌操作,1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵： 2、無(wú)菌操作,防止外來(lái)雜菌的入侵,20,1、下列細(xì)菌中，能利用含碳無(wú)機(jī)物作碳源的是 A 光合細(xì)菌 B 根瘤菌 C 硝化細(xì)菌 D 乳酸菌 2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是 A 糖、有機(jī)酸等 B 二氧化碳、碳酸鹽 C 蛋白質(zhì) D 無(wú)機(jī)氮化物,A.C,A.C,二. 無(wú)菌技術(shù)（思考）,1. 什么是無(wú)菌技術(shù)？包括哪些方面？ 2.

7、無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？ 3. 消毒和滅菌有何不同？ 4. 常用的消毒和滅菌方法有哪些？ 5哪些地方有菌可能導(dǎo)致菌體感染？ 操作者 培養(yǎng)基、接種工具、器皿 空間,無(wú)菌技術(shù)：泛指培養(yǎng)微生物操作中，所有防 止雜菌污染的方法。,無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。,22,1、滅菌和消毒 1.）滅菌：強(qiáng)烈的因素殺死所有微生物，包括芽孢和孢子。 思考：哪些因素可以滅菌、消毒？ 物理高溫、紫外線 化學(xué)酒精、氯氣、石碳酸 2.）消毒：溫和的因素殺死一部分對(duì)人體有害的微生物。 舉例：煮沸 問(wèn)題：一段時(shí)間后為什么會(huì)腐敗？,不包括芽孢和孢子,3）. 常用的消

8、毒方法：,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外線或化學(xué)藥劑消毒法,4）常用的滅菌方法：,灼燒滅菌 干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌 ：100kPa 121 15-30min,牛奶,接種室、接種箱或超凈工作臺(tái),接種工具，接種環(huán)、接種針或其他金屬用具,玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）,24,思考：以下應(yīng)當(dāng)用何種方法滅菌、消毒？ 操作者 培養(yǎng)基 接種工具 器皿 空間 牛奶,手用酒精消毒,高壓蒸汽滅菌,灼燒,干熱滅菌,紫外線,巴氏消毒 7075度30min 80度15min,25,灼燒滅菌,微生物的接種工具 (接種環(huán)、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒,26,干熱滅菌 160170 ；12h,能耐高溫的需要保持干

9、燥的物品( 玻璃器皿),高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30min,通常用于培養(yǎng)基的滅菌,27,總結(jié)：無(wú)菌技術(shù) 1、實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者、衣著和手要 和 。 2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行 。 3、為了避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 附近進(jìn)行。 4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。,清潔,滅菌,酒精燈,消毒,28,例：下列關(guān)于腐乳制作的描述中，錯(cuò)誤的是 A在腐乳制作過(guò)程中必須有能產(chǎn)生蛋白酶的微生物參與B含水量大于85%的豆腐利于保持濕度，適宜制作腐乳C加鹽和加酒都能抑制微生物的生長(zhǎng)D密封瓶口前最好將瓶口通過(guò)火焰以防雜菌污染,29,六

10、、培養(yǎng)基的配制,（一）、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制,1.計(jì)算: 100ml蒸餾水中各物質(zhì)的量。,2.稱量：注意牛肉膏的粘稠度大。,3.溶化： 牛肉膏連同稱量紙一同放入 不斷攪拌 4.調(diào)節(jié)pH: 7.07.2 思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？,30,31,32,5.分裝： 培養(yǎng)基高度1/5 不要污染試管口 棉塞塞緊,33,6、包扎,34,7 .滅菌： 思考：滅菌的溫度、壓力、時(shí)間分別是多少？,8 .擱置斜面/倒平板,35,圖中哪些措施是防止雜菌污染的？,36,培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50度左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 剛剛不燙手。 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 防止瓶口附

11、近的微生物污染培養(yǎng)基,37,平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基 在倒平板的過(guò)程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 空氣中的微生物會(huì)在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，最好不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。,38,六、接種技術(shù) 無(wú)菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過(guò)程稱為接種。,1、接種工具,39,常用的接種方法,斜面劃線法,40,41,問(wèn)題：上述結(jié)果反應(yīng)了什么情況？ 問(wèn)題：可對(duì)菌液如何處理？,42,稀釋涂布平板法VS稀釋混合平板法,43,菌種的保存,1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于4冰箱保存

12、。 2、長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法,44,從哪里可以獲得微生物呢？ 微生物的大本營(yíng)：土壤 從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？ 根據(jù)微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、pH不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。 對(duì)微生物進(jìn)行分離的培養(yǎng)基是？ 固體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基上不同菌的區(qū)別是什么？ 菌落 菌落作用：分類、鑒定的依據(jù),七、微生物的分離、數(shù)量測(cè)定,45,菌落,細(xì)菌的菌落特征因種而異 菌苔：菌落連成片,46,主題：分離土壤中分解尿素的微生物,1、原理： 分離：以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng) 基進(jìn)行選擇。 計(jì)數(shù)：稀釋倒平板法,47,48,2、實(shí)驗(yàn)步驟：,49,50,51,52,問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)細(xì)菌和統(tǒng)計(jì)分解尿素所用的細(xì)菌的稀釋倍數(shù)相同嗎？ 細(xì)菌：4、5 、6 放線菌：3、4、5 真菌 2、3、4 問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌實(shí)際數(shù)目偏低？,每克樣品中的菌落數(shù) =C（菌落數(shù)）* M （稀釋倍數(shù)）/ V（涂布體積）,53,本課題知識(shí)小結(jié):,54,做什么準(zhǔn)備？ 點(diǎn)燃酒精燈 斜面向上,55,斜面用什么接種？ 接種環(huán)如何滅菌？,56,取棉塞（不放到桌面？） 試管口滅菌,57,挑取少量菌體,58,輕輕劃“S”，