臨床微生物：腸球菌奈瑟菌和卡他莫拉菌

1、腸球菌屬 （Enterococcus,Contents,重點,腸球菌是什么,腸道中中的一類正常菌群,革蘭陽性球菌,臨床意義,是人和動物腸道正常菌群之一 。 嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病的老年人和免疫力低下的患者易被感染（條件致?。?主要引起尿路感染，腹腔和盆腔的傷口感染次之，亦可引起腹膜炎、心內(nèi)膜炎和牙髓疾病,引起醫(yī)院感染常見的革蘭陽性球菌,腸球菌屬分類,腸球菌原歸于鏈球菌屬，與 D 群鏈球菌抗原相同相同。 1984年 Schleifer 和 Kipper-Bale 將其單獨(dú)成立為腸球菌屬。 種系分類法證實迄今腸球菌有5群38個種,6,分20個群，A群最多見，致病性最強(qiáng)，D群多無致病性,根據(jù)M蛋白不同進(jìn)一步

2、分型,莢膜,細(xì)胞壁,M蛋白,C多糖,肽聚糖,細(xì)胞膜,細(xì)胞質(zhì),1）C多糖抗原為群特異性抗原，細(xì)胞壁的多糖組分,2）表面抗原或稱蛋白質(zhì)抗原：主要為M蛋白，位于C抗原外層，具型特異性，與致病性有關(guān),鏈球菌的Lancefield血清分群依據(jù),腸球菌屬分群依據(jù)和各群生化特征,腸球菌分群及各群常見菌種,群：鳥腸球菌、惡臭腸球菌、假鳥腸球菌、棉子糖腸球菌、解糖腸球菌、E.gilvus、E.pallens 群：糞腸球菌（E.faecalis）、屎腸球菌（E.faecium）、鉛黃腸球菌、雞腸球菌、孟氏腸球菌 群：殊異腸球菌、堅韌腸球菌、希氏腸球菌、E.porcinus、E.ratti 群：盲腸腸球菌、硫磺腸球

3、菌、E.asini 群：鴿腸球菌、黃色腸球菌,腸球菌分5個群38個種,生物學(xué)特性,形態(tài)（染色性、排列）結(jié)構(gòu) 培養(yǎng)特性 生化反應(yīng)特點 抵抗力、血清學(xué)及其他,營養(yǎng)、pH、溫度、氣體環(huán)境等,形態(tài)染色： 形態(tài)染色：革蘭陽性球菌,腸球菌的生物學(xué)特性,排列：單個、成對或短鏈狀排列,氣體需求：兼性厭氧菌，CO2環(huán)境更好,糞腸球菌,培養(yǎng)特性,最適生長溫度 35 ，大多數(shù)可在 1045 范圍內(nèi)生長,營養(yǎng)要求不高,血平板：灰白色圓形凸起，多不溶血或有 溶血菌落。 麥康凱 ：較小、稍干燥、紫紅色菌落,雞腸球菌（血平板培養(yǎng)48h,13,SS平板（Salmonella-Shigella）分離腸道病原菌的強(qiáng)選擇培養(yǎng)基,成

4、分和作用： 基礎(chǔ)營養(yǎng)物：提供氮源和碳源 膽鹽、枸櫞酸鈉、煌綠：可抑制腸道非致病菌、部分真菌和革蘭陽性球菌的生長，而對腸道致病菌抑制作用弱。 乳糖、中性紅（pH6.8-8.0，紅橙黃） ：腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)菌落淡黃色；大腸桿菌等腸道非致病菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紅色 鐵離子：與硫化氫生成硫化亞鐵黑色沉淀。 不分解乳糖菌:小,無色或淡黃色,半透明或不透明菌落 分解乳糖菌:大,紅色菌落,14,SS平板（空白,大腸桿菌,傷寒桿菌,15,不分解乳糖菌: 無色或淡黃色小菌落 分解乳糖菌: 紅色（Mac） 、紫黑色(EMB)、藍(lán)色 (中國藍(lán)）混濁較大菌落,麥康凱（Mac）、 EMB

5、（Eosin Methyl Blue，伊紅美藍(lán))、中國蘭平板 分離腸道病原菌的弱選擇培養(yǎng)基,成分：與SS類似，但不含鐵離子，抑制劑只含膽鹽，可抑制革蘭陽性菌生長，不抑制腸道細(xì)菌生長,16,大腸桿菌在Mac上,志賀菌在Mac上菌落,大腸桿菌在Mac上菌落,生化特征,觸酶（,6.5%NaCl生長,膽汁七葉苷試驗,6.5%NaCl 培養(yǎng)基上生長,膽汁七葉苷試驗陽性,一般PYR（+） 發(fā)酵糖類產(chǎn)酸 含鏈球菌 D 群抗原,尿液、膿液、穿刺液 血液 葡萄糖肉湯增菌（5% CO2） 直接 血平板 （5% CO2） 涂片 分離培養(yǎng)（45可生長） 可疑菌落 藥敏試驗 2. PYR(+)、6.5%NaCL生長（+

6、） 1. G+C 觸酶 膽汁七葉苷試驗（+） 3.血清學(xué)鑒定為D群 腸球菌屬細(xì)菌 各種生化代謝鑒定到種,微生物學(xué)檢驗程序,尿液需離心取沉淀涂片,實驗室中根據(jù)觸酶試驗結(jié)果可縮小臨床常見G+球菌的鑒定范圍,葡萄球菌、微球菌屬等,鏈球菌、腸球菌屬,腸球菌的抗菌藥物敏感試驗 抗菌藥物的選擇（根據(jù)CLSI原則進(jìn)行） A組：青霉素、氨芐青霉素 B組：萬古霉素、利奈唑胺、達(dá)托霉素（MIC) C組：慶大霉素和鏈霉素，僅用于篩選氨基糖苷類高水平耐藥菌株 U組：環(huán)丙沙星、諾氟沙星、左氧氟沙星、呋喃妥因、四環(huán)素 腸球菌天然耐藥的抗菌藥物： 氨基糖苷類（一般劑量或中劑量） 有些菌種（如雞腸球菌、鉛黃腸球菌）對萬古霉素

7、低度耐藥（藥敏結(jié)果為中介水平,腸球菌不應(yīng)報告敏感的抗菌藥物： 一般或中等劑量的氨基糖苷類 頭孢菌素類 克林霉素類 復(fù)方磺胺甲惡唑（SMZ-TMP,氨基糖苷類高水平耐藥腸球菌的檢測： （high-level aminoglycoside resistance，HLAR） 培養(yǎng)基：MH瓊脂 菌液濃度：0.5麥?zhǔn)蠁挝?孵育時間：1618h 藥敏紙片：慶大霉素（120g/片）鏈霉素（300 g/片） 結(jié) 果：6mm=HLAR，7-9mm不確定，10mm敏感 意 義：腸球菌感染臨床常用“青霉素氨基糖苷類抗生素”聯(lián)合用藥的方式治療，但是對于HLAR腸球菌這種聯(lián)合用藥治療方式無效,小 結(jié) 形態(tài)學(xué)特點：革蘭陽

8、性球菌，單個、成雙或短鏈狀排列 培養(yǎng)特點： 營養(yǎng)要求不高，不容血或溶血，Mac上紅色菌落 生化特點：觸酶（-）， 6.5%NaCL生長（+）、膽汁七葉苷試驗（+）、PYR(+) 血清學(xué)特點：含D群鏈球菌抗原 不應(yīng)報告敏感的藥物：一般或中等劑量的氨基糖苷類、頭孢菌素類、克林霉素類、復(fù)方磺胺甲惡唑（SMZ-TMP,奈瑟菌屬 (Neisseria,Contents,分類和臨床意義,重點,一、奈瑟菌的分類,奈瑟菌屬屬于奈瑟菌科。 僅腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌對人致病,它”就在我們身邊,Introduction,1. 致病類型,性傳播疾病-淋病,流行性腦脊髓膜炎,腦膜炎奈瑟菌,淋病奈瑟菌,二、臨床意義,乙

9、類傳染病,2. 傳播途徑與易感人群,N. meningitidis,N. gonorrhoeae,性接觸 產(chǎn)道感染,學(xué)齡兒童 青少年,二、臨床意義,鼻咽部,隱性感染,菌血癥或敗血癥,流行性腦脊髓膜炎,局部感染,人是唯一易感宿主，隱性感染率高，5歲以下兒童易發(fā)病,血液,腦脊髓膜,腦膜炎奈瑟菌致病過程,患者腹部出血點,患者肩部紫癜樣變,流行性腦脊髓膜炎,流腦的淤點、淤斑,流腦的頸項強(qiáng)直,流腦的大面積出血性紫癜,流行性腦脊髓膜炎,淋?。?男性-急性淋菌性尿道炎 女性-淋菌性宮頸炎、尿道炎 初生嬰兒-淋菌性結(jié)膜炎,1. 菌體形態(tài)（Ng和Nm形態(tài)相似,腎形或 咖啡豆樣,形態(tài)結(jié)構(gòu)：G-雙球菌，腎形或咖啡豆

10、樣，凹面相對,三、生物學(xué)特性,2. 菌落形態(tài)（Ng和Nm菌落形態(tài)相似,三、生物學(xué)特性,光滑、濕潤、透明或半透明 直徑1 mm 左右 不溶血 圓形露珠樣菌落,血平板,巧克力平板,3. 培養(yǎng)特性（Ng和Nm培養(yǎng)特性相似,三、生物學(xué)特性,專性需氧 510% CO2 高濕度,最適溫度 3537,營養(yǎng)要求高 （加入血清等,4. 主要生化反應(yīng),三、生物學(xué)特性,生化反應(yīng)不活躍,氧化酶與觸酶試驗均陽性,氧化酶與觸酶試驗均陽性,淋病奈瑟菌生化特征,氧化酶（+）、觸酶（+） 不分解蛋白質(zhì)和氨基酸 僅 葡萄糖（+），其余碳水化合物陰性 硝酸鹽還原（-）、DNA酶（,腦膜炎奈瑟菌生化特征,氧化酶（+）、觸酶（+） 不

11、分解蛋白質(zhì)和氨基酸 僅 葡萄糖（+）和麥芽糖（+），其余碳水化合物陰性 硝酸鹽還原（-）、DNA酶（,5.抵抗力,三、生物學(xué)特性,極弱,在干燥、熱、冷的環(huán)境中極易死亡 一般消毒劑或肥皂液均能使其喪失活動力,三、生物學(xué)特性,根據(jù)莢膜多糖群特異性抗原分13個血清群,6. 血清分群與致病,95,標(biāo)本采集,N. meningitidis： 腦脊液、血液、瘀斑穿刺液,N. gonorrhoeae：泌尿生殖道膿性分泌物、 眼結(jié)膜表面分泌物,保溫、保濕、即刻送檢（床邊接種,四、微生物學(xué)檢驗,泌尿生殖道、眼結(jié)膜膿 性分泌物、宮頸拭子等,涂片染色鏡檢,血液、腦脊液 、皮 膚瘀點瘀斑穿刺液,N. meningit

12、idis,N. gonorrhoeae,檢出G-雙球菌， 疑似腦膜炎奈瑟菌,檢出G-雙球菌， 疑似淋病奈瑟菌,男性,必須經(jīng)培養(yǎng) 加以證實,女性,四、微生物學(xué)檢驗,1. 涂片檢查,淋病奈瑟菌檢驗程序 標(biāo)本（膿液）直接涂片 巧克力或MTM培養(yǎng)基分離培養(yǎng)（5%CO2） (24-48h) 露滴樣小菌落 藥敏試驗 涂片染色、氧化酶（+） 葡（+）、麥（-）G-球菌 果（-）、蔗（-） 乳（-） 報告,腦膜炎奈瑟菌微生物檢查腦脊液 瘀點、穿刺液 滲出物、鼻咽分泌物 血液離心 血平板或巧克力平板 葡萄糖肉湯增菌 （5% CO2 ） （5%CO2 ） 上清 沉淀 可疑菌落（露滴樣） 藥敏試驗檢查 抗原 涂片鏡

13、檢 涂片G-雙球菌 氧化酶（+） 葡（+）、麥（+） 果（-）、蔗（-）、乳（-） 報告,淋病奈瑟菌藥敏選藥： A組：頭孢曲松、頭孢克肟、環(huán)丙沙星、四環(huán)素 C組：大觀霉素,腦膜炎奈瑟菌藥敏選藥： 沒有推薦A組、B組藥物 C組：青霉素、氨芐西林、頭孢哌酮或頭孢噻肟、美樂培南、阿奇霉素、米諾環(huán)素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、氯霉素、利福平、復(fù)方SMZ,僅淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌對人類致病 標(biāo)本采集：保溫、保濕、床邊接種 革蘭陰性雙球菌，形似雙腎或咖啡豆樣，凹面相對 營養(yǎng)、生長要求高（需血液、5%10%CO2、高濕度） N.meningitidis 孵育24h易自溶 初步鑒定：菌落、菌體特征，氧化酶和觸酶

14、試驗 最終鑒定：糖類分解試驗（葡萄糖和麥芽糖,小 結(jié),卡他莫拉菌（ Moraxella catarrhalis,卡他莫拉菌臨床意義,多為人體上呼吸道無致病性的正常寄居菌。 條件致病：可引起中耳炎、鼻竇炎和下呼吸道等其它部位感染。 年老和免疫力低下的患者易感,卡他莫拉菌形態(tài)特征,與奈瑟菌屬相似,卡他莫拉菌培養(yǎng)特征及抵抗力,需氧菌。 最適生長溫度為35，22也生長良好。 營養(yǎng)要求不高。 血平板或巧克力：灰白色、不透明、光滑而凸起菌落。 可用接種環(huán)完整推過平板表面。 耐受較低溫度，耐干燥,卡他莫拉菌血平板菌落,卡他莫拉菌生化特征,觸酶、氧化酶均為陽性。 DNA酶（+） 硝酸鹽還原試驗（+）。 水解三

15、丁酸甘油酯。 不分解任何糖類和氨基酸蛋白質(zhì)類物質(zhì),卡他莫拉菌DNA酶（,56,奈瑟菌屬,57,鏈球菌屬/腸球菌屬,思考題,1. 關(guān)于淋球菌不正確的說法是 A 人是唯一的自然宿主 B 有菌毛 C 抵抗力弱 D 碳水化合物中僅分解葡萄糖 E 鏡檢是確定診斷的依據(jù) 2A群鏈球菌與其它鏈球菌的主要鑒別試驗是 A CAMP試驗 B 菊糖發(fā)酵試驗 C Optochin敏感試驗 D 桿菌肽敏感試驗 E 新生霉素敏感試驗 3能產(chǎn)生自溶酶的細(xì)菌是 A 葡萄球菌 B 肺炎鏈球菌 C A群化膿性鏈球菌 D 卡他莫拉菌 E 腸球菌屬,思考題,4下列哪個不是腸球菌的特點？ A G+球菌，成雙或短鏈排列 B 普通培養(yǎng)基能

16、生長 C 6.5%NaCl肉湯生長 D 40%膽汁培養(yǎng)基生長 E 只能在血平板上生長 5下列哪種細(xì)菌不產(chǎn)生溶血毒素？ A 金黃色葡萄球菌 B 乙型鏈球菌 C 肺炎鏈球菌 D 淋球菌 E 銅綠假單胞菌 1.淋病奈瑟菌可引起哪些疾?。咳绾螐哪撔苑置谖镏袡z測出該菌？ 2.腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌生物學(xué)特性的有何不同？ 3.試述腸球菌屬不同于鏈球菌屬的生化反應(yīng)特征,Special English,1. Members of cocci are divided into gram-positive cocci and gram-negative cocci by Gram stain. Staphylo

17、ccus, Streptococcus and Enterococcus belong to the former, while Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae and Moraxella catarrhalis belong to the latter. 2. Staphyloccus is the strongest resistant organism of the nonsporeforming organisms, and MRS (Methicillin-resistant staphylococcus) is a cha

18、llenge to clinical microbiologist. 3. The members of the genus Enterococcus are catalase-negative cocci. They can grow in medium containing 6.5% NaCl or in the presence of bile-esculin. 4. Optochin, bile solubility and inulin fermentation are the main tests to differentiate S. pneumoniae from viridans group streptococci. 5. Meningococcus is the pathogen of epidemic meningitis, and more than 95% infections are caused by the organism belonging to serogroup A in our country,Special English,6. Gram-negative diplococci and oxidase-posit