液相色譜柱的清洗

1、液相色譜柱的清洗一、 液相色譜柱按基體成分的分類1、硅膠基體：不鍵合任何化學(xué)基團(tuán)的為硅膠柱，鍵合的化學(xué)基團(tuán)有C18、C8、C4、氨基、氰基、苯基等。2、聚合物基體：常見的聚合物基體為聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。聚合物上再鍵合化學(xué)基團(tuán)。根據(jù)填料基體的成分不同可以分為： 二、 色譜柱常見問題的成因1、硅羥基的死吸附 ：硅膠粒子表面存在硅羥基，這些硅羥基會吸附樣品和流動相中的很多物質(zhì)，當(dāng)吸附達(dá)到飽和時(shí)就會出現(xiàn)柱效下降、峰形劣化的現(xiàn)象。有些吸附是可逆的，可以通過清洗解決。2、重金屬離子：重金屬以金屬氧化物的形式殘存在硅膠粒子的表面,這些金屬氧化物很容易與其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造成峰形劣

2、化。 3、緩沖液中鹽的析出：當(dāng)流動相中含有緩沖鹽溶液，而且分析結(jié)束后,如果沒有先用水進(jìn)行沖洗,而是直接用純有機(jī)相沖洗,瞬間柱子中的微環(huán)境是高有機(jī)相、低水相。這時(shí)流動相中的緩沖鹽溶液極易析出鹽份,將柱子堵塞,使柱壓升高,柱效下降。 4、色譜柱變干：如果對色譜柱保存不當(dāng),使 色譜柱中的保存液全部揮發(fā),柱子內(nèi)部變干,造成色譜柱的損傷,會影響分離效果。三、 對色譜柱進(jìn)行適當(dāng)清洗的意義以上提到的部分故障可以通過適時(shí)、適當(dāng)?shù)那逑吹玫浇鉀Q，恢復(fù)色譜柱的功能，延長色譜柱的使用壽命。下面對比較常見的幾種型號的色譜柱的清洗方法進(jìn)行討論，具體的沖洗方法要根據(jù)實(shí)際情況作適當(dāng)?shù)倪x擇和調(diào)整。當(dāng)然，不同的用戶和色譜產(chǎn)品廠商

3、對自己的色譜柱會有不盡相同的處理方法。四、 新柱使用前的沖洗新柱在使用前應(yīng)先認(rèn)真閱讀說明書及性能測試報(bào)告,了解柱子的性能指標(biāo)。分析用的流動相往往與柱子的保存試劑不同,故在分析樣品之前,應(yīng)使用合適的試劑將柱子中的保存試劑清洗出來。要注意清洗用的流動相與保存溶劑的相溶性。 1、反相柱如島津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可用1020倍柱體積的甲醇或乙腈來平衡色譜柱。流速應(yīng)緩慢提高,如開始0.3mL/min,1015min后可慢慢加快。2、正相柱或稱極性色譜柱一般保存在正庚烷或正己烷中。如果分析時(shí)的流動相含有極性溶劑,應(yīng)使用乙醇或異丙醇沖洗,流速0.10.3mL/min ,將保存液沖洗干凈后,再

4、用流動相平衡。 3、鈣柱等糖柱只能用純水作流動相進(jìn)行沖洗，有機(jī)溶劑會造成色譜柱損壞，尤其要注意。沖洗后可以記錄色譜柱的一些性能指標(biāo),如柱效、柱壓等,供今后參考。分析樣品前,要用流動相對色譜柱進(jìn)行平衡,待基線平穩(wěn)后再進(jìn)樣分析。一般用流動相平衡的時(shí)間為30min,若系統(tǒng)中有鹽或水,平衡時(shí)間應(yīng)延長。五、 反相柱日常清洗色譜柱清洗是日常的重要維護(hù)工作。分析工作結(jié)束 后,要用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑聪到y(tǒng)中殘留的樣品。在反相系統(tǒng)中, 若流動相中無酸、堿、鹽類物質(zhì), 可用甲醇沖洗3060min ；若含酸、堿、鹽類物質(zhì),應(yīng)先用10 %甲醇,或用與分析用流動相相同比例的不含酸、堿、鹽的溶液,沖洗3060min , 再用甲

5、醇沖洗。直接用純甲醇沖洗,會導(dǎo)致緩沖鹽沉淀于柱子或檢測池中。 關(guān)于純水的問題：純水極性很強(qiáng),ODS等填料的硅烷鍵是非極性的,在純水中各鍵合基團(tuán)會因疏水作用而改變空間構(gòu)型, 使柱效很快降低。很多公司推出可以使用100%純水進(jìn)行沖洗的柱子,原理是鍵合基團(tuán)互相之間有排斥力,這類柱子一般鍵合相比較豐富，游離硅羥基比較少，從而阻止了鍵合基團(tuán)性能的改變。能否用純水沖洗要參考該色譜柱的說明書。 關(guān)于離子對試劑：常用的離子對試劑有烷基磺酸鈉等, 這時(shí)通常采用pH35的緩沖鹽體系。對于酸性樣品一般使用常用四丁基銨鹽，這時(shí)采用堿性體系。容易出問題的是前一種情況。分析結(jié)束后,柱子應(yīng)先用有機(jī)溶劑-水體系沖洗,再用水沖

6、洗,最后用有機(jī)溶劑沖洗。這是因?yàn)橥榛撬徕c都是表面活性劑,可以洗掉脂肪油(如烷烴及其衍生物)。在水的環(huán)境下烷基磺酸鈉會將鍵合的烷烴基洗脫下來,造成固定相的流失。所以應(yīng)該先用有機(jī)溶劑-水體系沖洗柱子,表面活性劑會溶解在有機(jī)相中逐漸被沖洗出來,從而減少表面活性劑對鍵合相的洗脫。六、 反相柱的修洗復(fù)清1、如果柱子污染嚴(yán)重可以使用以下方法清洗：2、以水、甲醇、乙腈、氯仿依次清洗，再以相反的順序清洗。3、氯仿的作用是洗去殘留的非極性雜質(zhì)。4、在用甲醇沖洗時(shí)可以將四氫呋喃作為樣品注射，有助于去除強(qiáng)疏水性雜質(zhì)。5、四氫呋喃和甲醇的混合溶液可以去除類脂類污染物，也可同時(shí)注射二甲亞砜。6、乙腈、丙酮、三氟乙酸（0.1%）的混合溶液有助于去除蛋白類污染物。七、正相柱的清洗1、硅膠柱可以用以下方法清洗：2、正己烷（正庚烷）、二氯甲烷、甲醇依次清洗，再按照相反順序沖洗。3、甲醇的作用是洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì)。4