五味子提取物體外抑菌作用研究2800字

1、五味子提取物體外抑菌作用研究2800字【摘要】目的研究五味子提取物體外抑菌作用。方法用75%乙醇從五味子中提取其活性成分進(jìn)行抑菌試驗。結(jié)果在PH=6的情況下，抑菌效果最強。濾紙片瓊脂擴散法表明MIC值金黃色葡萄球菌為62.5mg/ml，大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌為31.3mg/ml;與二倍稀釋法測得的結(jié)果基本一致，除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其余3種菌的MIC均為25mg/ml。另外，瞬時高溫處理后，仍具有較強的抑菌作用。結(jié)論五味子提取物在體外對微生物有明顯的抑制作用，并且其抑菌成分具有一定熱穩(wěn)定性。【關(guān)鍵詞】五味子;提取物;抑菌作用;實驗五味子(Schisandrac

2、hinensis(Turcz.)Baill)別名北五味子、遼五味子、山花椒、烏梅子、軟棗子等，為木蘭科五味子屬植物。多年生落葉木質(zhì)藤本，以野生為主，為常用中藥材。主要以果實入藥，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有斂肺、滋腎、止汗、生津、止瀉、澀精等功能?？梢灾委熆人?、哮喘、口渴自汗、盜汗、遺精、久瀉、神經(jīng)衰弱等癥，也是很好的果酒和飲料的原料1，具有極高的藥用價值和營養(yǎng)價值，是一種新型的“藥食同源”功能性保健食品，其果實在國際上已成為一種新興食品工業(yè)的重要原料2?3。本實驗采用濾紙片瓊脂擴散法，研究五味子提取物對常見的幾個污染菌的抑制作用，為五味子的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法1.

3、1菌種與培養(yǎng)基試驗選用金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapeneumoniae)。以上菌種由浙江省臺州醫(yī)院微生物實驗室友情贈送。采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，按文獻(xiàn)4自制，pH為6.0(用磷酸緩沖液配制5)，其中固體培養(yǎng)基加瓊脂20。1.2五味子提取物的制備實驗用五味子飲片購自臨海市醫(yī)藥有限公司，經(jīng)70烘干后研成粉末。取粉末10g用75%乙醇在超聲波清洗器中提取，反復(fù)多次，直至浸出液色淡。將浸出液濃縮，并定容至10ml，即1ml提取液為1g

4、五味子粉末的提取物6。提取液過0.22m濾膜除菌，貯存于4冰箱中備用。1.3抑菌試驗1.3.1抑菌效力的測定分別將菌種從斜面上轉(zhuǎn)接到5ml的液體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，30培養(yǎng)24h，再從中吸取50l到5ml液體培養(yǎng)基中，30培養(yǎng)6h后吸取100l菌液均勻涂抹到滅菌平板上。將浸漬過提取液的濾紙圓片(?6mm)稍風(fēng)干，貼到每個涂有菌液的平板上(每皿4片)，每個濃度重復(fù)3次。37倒置培養(yǎng)24h后測定抑菌圈大小，并用無菌水作空白對照(以CK表示)，確定抑菌效果。1.3.2最低抑菌濃度(MIC)的測定采用二倍稀釋法7測定五味子提取物對4種供試菌的MIC。取7支試管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加

5、入5ml無菌水，從第1支吸取5ml提取液移至第2支，混勻后，再吸取5ml至第3支，以此類推，最后1支試管取出5ml棄去，每一試管的濃度分別為1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.3mg/ml和15.6mg/ml。分別將5ml上述各濃度的提取物與20ml牛肉膏固體培養(yǎng)基混勻，制成提取物的濃度分別為200mg/ml，100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5mg/ml，6.3mg/ml，3.2mg/ml(五味子粉末重量/培養(yǎng)基體積)的平板，隨后涂布接種菌液，倒置培養(yǎng)24h后觀察，以完全沒有供試菌生長的最低濃度為提取物的M

6、IC。1.3.3抑菌活性的pH范圍用磷酸緩沖液配制4種pH(分別為5、6、7和8)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，制成平板并分別涂布各種供試菌;再將濾紙片置于濃度為500mg/ml的提取液中浸泡24h，稍風(fēng)干后貼在涂有供試菌的平板中，測定其抑菌效果。1.3.4熱穩(wěn)定性試驗將五味子提取液置于80水浴、100水浴和121濕熱條件下8，熱處理20min，并制成濃度為500mg/ml的提取液，將濾紙片置于其中浸泡24h，稍風(fēng)干后貼在涂有各種菌液的乎板中，測定其抑菌效果。2結(jié)果與分析2.1pH對提取物的抑菌活性影響在pH為5時，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌均不能生長，在pH為68范圍內(nèi)，五味

7、子提取物對4種供試菌的生長均有一定的抑制作用，其中pH為6時的抑制作用最強(見表1)。表1pH對五味子提取物抑菌效力的影響(略)2.2提取物濃度對抑菌效力的影響濾紙片法測定結(jié)果(見表2)顯示，五味子提取物對4種供試菌的生長均有很強的抑制作用，其中對綠膿桿菌的抑制作用最強，肺炎克雷伯氏菌其次，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最弱。表2五味子提取物的濃度對抑菌效率的影響(略)2.3不同菌的MIC五味子提取物(二倍稀釋法)對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表3所示。除了對金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，對其余三種菌的MIC為25mg/ml(與濾紙片法的結(jié)果基本一致)。

8、表3五味子提取物的MIC(略)2.4提取物的熱穩(wěn)定性試驗五味子提取物經(jīng)3種溫度的熱處理20min后，仍具有較強的抑菌效力，其抑菌圈直徑與未經(jīng)高溫處理的樣品(對照)接近，其中只有對綠膿桿菌抑制作用，經(jīng)100處理和濕熱滅菌后有顯著下降，對金黃色葡萄球菌的抑制作用，經(jīng)濕熱滅菌后有顯著降低;而對大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3種處理與對照均無顯著差異(見表4)。說明五味子提取物中的抑菌成分具有一定的熱穩(wěn)定性。表4熱處理對五味子提取物抑菌效力的影響(略)3結(jié)論經(jīng)反復(fù)實驗，結(jié)果表明五味子提取物的濃度在31.31000mg/ml范圍內(nèi)，pH為68時，對常見的4種致病菌有廣譜的抑菌作用，其中在pH=6時具有最佳的抑菌效果，抑制效應(yīng)依次為：綠膿桿菌肺炎克雷伯氏菌大腸桿菌金黃色葡萄球菌。濾紙片瓊脂擴散法結(jié)果顯示，除金黃色葡萄球菌MIC為62.5mg/ml外，其余3種供試菌MIC