針對SRBSDV水稻病毒的ELISA檢測方法

1、針對SRBSDV水稻病毒的ELISA檢測方法,水稻病毒的主要檢測方法,病株癥狀觀察:但前期感染水稻無典型癥狀特征，且無法觀察稻飛虱是否帶病毒； 電鏡觀察； RT-PCR和qRT-PCR方法； 核酸檢測方法：核算雜交和測序； 高通量的血清方法：ELISA(dot-ELISA、ACP-ELISA、DAS-ELISA、TAS-ELISA)、免疫膠體金試紙條； 血清學檢測方法關(guān)鍵是獲得高特異性、高靈敏度的病毒抗體,ELISA基本原理,把具有免疫活性的免疫蛋白(抗原或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面。使該免疫蛋白與某種特異性的酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體在檢測中由于未經(jīng)過其他任何處理,所以既有

2、免疫活性,同時又保留其酶的活性。在試驗時,把受檢樣品(待測的抗原或抗體)與酶標抗原或抗體按不同的步驟在固相載體表面起反應(yīng)。然后用緩沖液洗漆,使固相載體上的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開。在一定范圍內(nèi),結(jié)合在固相載體上的酶量與樣品中受檢物質(zhì)的量成一定的比例關(guān)系。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,因為產(chǎn)物的量與樣品中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)反應(yīng)物顏色的深淺進行定性或定量分析。由于酶是一種生物催化劑,催化效率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達到很高的靈敏度,dot-ELISA實驗方法,一、材料： 具有典型矮縮癥狀和條紋葉枯癥狀的水稻植株 采自田間水稻植株上的白背飛風材料，

3、暫時浸泡在無水乙醇中備用。 二、抗原： 用感染RBSDV的玉米病葉的粗提液作為免疫抗原 合成SRBSDV CP 蛋白的多肽與牛血清白蛋白交聯(lián)成免疫抗原 上述2種制備的抗原分別免疫BALB/C小鼠，分別制備RBSDV、SRBSDV的單抗,酶標儀,酶聯(lián)免疫檢測儀又稱微孔板檢測器，是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器 原理：光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測 標本.該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上，光電檢測器 將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放 大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和

4、計算，最后由顯示器和打印機顯 示結(jié)果. 檢測單位用常用OD值表示，即被檢測物吸收掉的光密度， OD=log（1/trans），其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)LB法則，OD值與光強度成下述關(guān)系：E=OD=log(l0/) 其中E表示 被吸收的光密度， 0 為在檢測物之前的光強度，為從被檢測物出來的光強度。 可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析和蛋白定量，酶活、酶動力學檢測，酶聯(lián)免疫測定（ELISAs），細胞增殖與毒性分析，細胞凋亡檢測，報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析等,習題,1.ELISA技術(shù)的基本原理是 A A.酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng) B.抗原與抗體產(chǎn)生反應(yīng) C.酶標反應(yīng)

5、2.酶標儀的應(yīng)用范圍不包括：C A.酶活、酶動力學檢測 B.酶聯(lián)免疫測定 C.DNA、RNA定量及純度分析 D.均可應(yīng)用,針對水稻病毒的檢測的高通量血清方法有： （ELISA方法）、（免疫膠體金試紙條） ELISA方法的兩大特點： （靈敏性高）、（ 特異性強） 血清學檢測方法關(guān)鍵是獲得高特異性、高靈敏度的病毒抗體。 酶標儀的檢測單位也可以用A表示,簡述ELISA方法的基本原理。 把具有免疫活性的免疫蛋白(抗原或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面。使該免疫蛋白與某種特異性的酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體在檢測中由于未經(jīng)過其他任何處理,所以既有免疫活性,同時又保留其酶的活性。在試驗時,把受檢樣品(待測的抗原或抗體)與酶標抗原或抗體按不同的步驟在固相載體表面起反應(yīng)。然后用緩沖液洗漆,使固相載體上的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開。在一定范圍內(nèi),結(jié)合在固相載體上的酶量與樣品中受檢物質(zhì)的量成一定的比例關(guān)系。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,因為產(chǎn)物的量與樣品中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)反應(yīng)物顏色的