植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、實(shí)驗(yàn)1 植物組織滲透勢的測定（質(zhì)壁分離法）原 理當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)的汁液與其周圍的某種溶液處于滲透平衡狀態(tài)，植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢為零時(shí)，細(xì)胞汁液的滲透勢就等于該溶液的滲透勢。該溶液的濃度稱為等滲濃度。當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時(shí)，細(xì)胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間的深液濃度。代入公式即可計(jì)算出春滲透勢。儀器藥品顯微鏡 載玻片及蓋玻片鑷子 刀片配成0.50.1mol/L梯度濃度的蔗糖溶液各50ml。稱34.23g蔗糖用蒸餾水配成100ml，其濃度為1m0le/L（母液）。再配制成下列各種濃度：0.50mol/L：吸母液25ml+水25ml0.

2、45mol/L：吸母液22.5ml+水27.5ml0.40mol/L：吸母液20.0ml+水30.0ml0.35mol/L：吸母液17.5ml+水32.5ml0.30mol/L：吸母液15.0ml+水35.0ml0.25mol/L：吸母液12.5ml+水37.5ml0.20mol/L：吸母液10.0ml+水40.0ml0.15mol/L：吸母液7.5ml+水42.5ml0.10mol/L：吸母液5.0ml+水45.0ml操作步驟將帶有色素的植物組織（葉片），一般選用有色素的洋蔥鱗片的外表皮、紫鴨跖草、苔蘚、紅甘藍(lán)或黑藻、絲狀藻等水生植物，也可用蠶豆、玉米、小麥等作物葉的表皮。撕取下表皮，迅速分

3、別投入各種濃度的蔗糖溶液中，使其完全浸入，510分鐘后，從0.5mol/L開始依次取出表皮薄片放在滴有同樣溶液的載玻片上，蓋上蓋玻片，于低倍顯微鏡下觀察，如果所有細(xì)胞都產(chǎn)生質(zhì)壁分離的現(xiàn)象，則取低濃度溶液中的制片作同樣觀察，并記錄質(zhì)壁分離的相對程度。實(shí)驗(yàn)中必須確定一個(gè)引起半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛剛從細(xì)胞壁的角隅上分離的濃度，和不引起質(zhì)壁分離的最高濃度。在找到上述濃度極限時(shí)，用新的溶液和新鮮的葉片重復(fù)進(jìn)行幾次，直至有把握確定為止。在此條件下，細(xì)胞的滲透勢與兩個(gè)極限溶液濃度之平均值的滲透勢相等。將結(jié)果記錄下表中。測出引起質(zhì)壁分離剛開始的蔗糖溶液最低濃度和不能引起質(zhì)壁分離的最高濃度平均值之后，可按下列公式

4、計(jì)算在常壓下該組織細(xì)胞質(zhì)液的滲透勢。為細(xì)胞滲透勢。R為氣體常數(shù)=0.083105/LP/molK。T為絕對溫度，單位K，即273+t，t為實(shí)驗(yàn)濕度。I為解離系數(shù)，蔗糖為1。C為等滲溶液的濃度，單位為mol/L。則：=0.083105(273+t)1C實(shí)驗(yàn)人 時(shí)期 材料名稱 實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫 蔗糖摩爾濃度（mol/L）滲透勢（P）質(zhì)壁分離的相對程度（作圖表示）0.500.450.400.350.300.250.200.150.10實(shí)驗(yàn)2 植物組織水勢的測定（小液流法）原理水勢表示水分的化學(xué)勢，象電流之由高電位處流向低電位處一樣，水從水勢高處流向低處。植物體細(xì)胞之間，組織之間以及植物體和環(huán)境間的水分移動

5、方向都由水勢差決定。當(dāng)植物細(xì)胞或組織放在外界溶液中時(shí)，如果植物的水勢小于溶液的滲透勢（溶質(zhì)勢），則組織吸水而使溶液濃度變大；反之，則植物細(xì)胞內(nèi)水分外流而使溶液濃度變??；若植物組織的水勢與溶液的滲透勢相等，則二者水分保持動態(tài)平衡，所以外部溶液濃度不變，而溶液的滲透勢即等于所測植物的水勢。可以利用溶液的濃度不同其比重也不同的原理來測定試驗(yàn)前后溶液的濃度的變化，然后根據(jù)公式計(jì)算滲透勢。儀器藥品試管 毛細(xì)滴管移液管 剪刀鑷子 甲烯藍(lán)操作步驟首先配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mol/L）各10 ml注入8支試管中，各管都加上塞子，并編號。按

6、編號順序在試管架上排成一列，作為對照組。另取8支試管，編好號，按順序放在試管架上，作為試驗(yàn)組。然后由對照組的各試管中分別取溶液4ml移入相同編號的試驗(yàn)組試管中，再將各試管都加上塞子。用剪刀將菠菜葉剪成約0.5cm2大小相等的小塊6080片。向試驗(yàn)組的每一試管中各加相等數(shù)目（約10片）的葉片小塊，塞好塞子，放置30分鐘，在這段時(shí)間內(nèi)搖動數(shù)次，到時(shí)間后，向每一試管中各加甲烯藍(lán)粉末少許，并振蕩，此時(shí)溶液變成藍(lán)色。用毛細(xì)滴管從試驗(yàn)組的各試管中依次吸取著色的液體少許，然后伸入對照組的相同編號試管的液體的中部，緩慢從毛細(xì)滴管尖端橫向放出一滴藍(lán)色試驗(yàn)溶液，并觀察小液滴移動的方向。如果有色液滴向上移動，說明溶

7、液從細(xì)胞液中吸出水分而被沖淡，比重比原來小了；如果有色液向下移動，則說明細(xì)胞從溶液中吸了水，溶液變濃，比重變大；如果液滴不動，則說明試驗(yàn)溶液的密度等于對照溶液，即植物組織的水勢等于溶液的滲透勢。記錄液滴不動的試管中蔗糖溶液的濃度。重復(fù)測定一次。按計(jì)算水勢。式中為細(xì)胞水勢，其余符號同實(shí)驗(yàn)4。注意：毛細(xì)滴管要各個(gè)濃度專用。實(shí)驗(yàn)3 蒸騰強(qiáng)度的測定（鈷紙法）原理本實(shí)驗(yàn)方法系根據(jù)氯化鈷紙?jiān)诟稍飼r(shí)為藍(lán)色，當(dāng)吸收水分后，變?yōu)榉奂t色，根據(jù)變色所需時(shí)間的長短，然后按鈷紙標(biāo)準(zhǔn)吸水量計(jì)算出作物蒸騰強(qiáng)度。儀器藥品扭力天平 烘箱干燥器 瓷盤鑷子 剪刀玻璃板 載玻片薄橡皮 有塞指管濾紙 彈簧紙夾5%氯化鈷溶液（9.2g

8、CoCl16H2O用蒸餾水配成100ml）滴幾滴鹽酸調(diào)成弱酸性。操作步驟1氯化鉆紙的制備選取優(yōu)質(zhì)濾紙，剪成0.8cm寬，20cm長的濾紙條，浸入5%氯化鈷溶液中，待浸透后取出，用吸水紙吸去多余的溶液，將其平鋪在干潔的玻璃板上，然后置于6080烘箱中烘干，選取顏色均一的鈷紙條，小心而精確地切成0.8cm的小方塊，再行烘干，取出貯于有塞指管中，再放入氯化鈣干燥器中備用。2鈷紙標(biāo)準(zhǔn)化使用前，先將鉆紙標(biāo)準(zhǔn)化。測出每一鈷紙小方塊由藍(lán)色轉(zhuǎn)變成粉紅色需吸收多少水量。取12鈷紙小方塊，置于扭力天平上稱重，并記下開始稱重的時(shí)間，及每隔一分鐘記一次重量，當(dāng)鉆紙藍(lán)色全部變?yōu)榉奂t色時(shí)，要立即準(zhǔn)確地記下重量和時(shí)間，如此

9、重復(fù)數(shù)次，計(jì)算出鉆紙小方塊由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色時(shí)平均吸收多少水分，以mg表示，作為鈷紙吸水量。3測定取二片玻片，薄橡皮一小塊，在其中央開1cm2的小孔，用膠水將它固定在玻片當(dāng)中，另準(zhǔn)備一只彈簧夾。用鑷子從干燥器（管）中取出鉆紙小塊，放在玻片上的橡皮小孔中，立即置于待測作物葉子的背面（或正面），將另一玻片在葉子的正面（或背面）的相應(yīng)位置上，用夾子夾緊，同時(shí)記下時(shí)間，注意觀察鉆紙的顏色變化，待鉆紙全部變?yōu)榉奂t色時(shí)，記下時(shí)間。以時(shí)間的長短作相對比較，可用鉆紙小方塊的標(biāo)準(zhǔn)吸水量成小紙塊由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色所需的時(shí)間來計(jì)算術(shù)為該葉片表面蒸騰的強(qiáng)度，用mg/cm2min表示之。本實(shí)驗(yàn)可選擇不同作物的功能葉片，或同

10、一作物的不同部位的葉片測其蒸騰強(qiáng)度，或者可測定作物在不同環(huán)境條件下的蒸騰強(qiáng)度。例如光和暗對植物蒸騰作用的影響，事先把一組盆栽的蠶豆、小麥或其他植物放在黑暗中過夜或幾個(gè)小時(shí)，另一組放在光下，二者都要適當(dāng)灌水，分別測其蒸騰強(qiáng)度（注：黑暗中的植物在測定時(shí)可移到實(shí)驗(yàn)室柔和的光線下進(jìn)行）。 每一處理最少要測10次左右，然后求其平均值。實(shí)驗(yàn)4 小孔的擴(kuò)散（示范）原 理氣孔蒸騰是植物散失水分的主要途徑，氣孔口很小，其總面積一般不超過葉面積的1%，可是葉子通過氣孔蒸騰所損失的水分卻達(dá)到與葉面積相等的自由表面的5080%，如此驚人的蒸騰量，可以用小孔擴(kuò)散原理加以說明。水分通過小孔擴(kuò)散的量和小孔的周緣長度成正比，

11、而和小孔面積不成比例。通過此試驗(yàn)所產(chǎn)生的現(xiàn)象，可以證明小孔邊緣效應(yīng)的存在。儀器獲品小燒杯 臺天平 培養(yǎng)皿 刀片 尺及解剖針 卡片紙 1%瓊脂 石蠟 紅墨水或藍(lán)墨水 酒糟或丙酮操作步驟1物質(zhì)通過小孔擴(kuò)散的途徑預(yù)備聚乙烯塑料薄膜（可用食品袋）一張，大小約55cm，取解剖針于煤氣燈上加熱，在薄膜中央穿刺一小孔。配制1%瓊脂，倒在一小燒壞中，如用10ml小燒杯，則更易于觀察。待瓊脂還未完全凝固時(shí)，將薄膜小心地貼在瓊脂的表面，使小孔位于燒杯的中央。等瓊脂凝固后，在薄膜上面倒上有色溶液少許。45小時(shí)后，即可看到有色溶液通過小孔向瓊脂凝膠中擴(kuò)散，形成一個(gè)有色的半球形，它顯示染料通過小孔擴(kuò)散的途徑。2將卡片紙

12、剪成與培養(yǎng)皿大小一致的圓片，然后在一張卡片紙的中部剪成一正方形大孔，每邊長3cm，則面積為9cm2。在另一卡片紙上剪成數(shù)個(gè)小孔，其總面積與大孔完全相等。為此，將其剪成 9個(gè)每邊長1cm的正方形小孔，并使其均勻地分布在圓形卡片紙上。再將此卡片紙浸于熔化的石蠟中，取出蓋于培養(yǎng)皿上，并用石蠟將邊緣封嚴(yán)。于兩皿中各加入等量的酒精（或丙酮），將此皿分別置于臺天平兩邊用酒精調(diào)節(jié)使之平衡。隔1530分鐘后，由于小孔具有較高的邊緣效應(yīng)，酒精蒸發(fā)較快，因此臺天平指針傾向大孔一邊，由此可看出孔的總面積雖相等，但酒精通過小孔的散失比大孔要快得多。證明小孔的邊緣效應(yīng)要大，因其周緣長度比大孔大。實(shí)驗(yàn)5 單鹽毒害及離了間

13、拮抗現(xiàn)象原理離子間的拮抗現(xiàn)象的本質(zhì)是復(fù)雜的，它可能反映不同離子對原生質(zhì)親水膠粒的穩(wěn)定度、原生質(zhì)膜的透性，以及對各類酶活性調(diào)節(jié)等方面的相互制約作用，從而維持機(jī)體的正常生理狀態(tài)。儀器藥品燒杯 紗布石蠟 0.12mol/L KCl0.06mol/L CaCl2 0.12mol/L NaCl（所用藥品均需用AR）操作步驟實(shí)驗(yàn)前34天選擇飽滿的小麥種子100粒浸種，在室溫下萌發(fā)，待根長1cm時(shí)即可用作材料。取4個(gè)小燒杯，依次分別倒人不列鹽溶液： （1）0.12molL KCI （2）0.06 molL CaCl2 （3）0.12 molL NaCI （4）0.12 molL NaCl 100 ml0.0

14、6 molL CaCl2 1 ml十0.12molL KCl 2.2 ml小燒杯用涂石蠟的紗布蓋上。挑選大小相等及根系發(fā)育一致的小麥幼苗10株或20株，小心種植在紗布蓋的孔眼里，使根系接觸到溶液，在室溫下培育23星期后，即可看出在單鹽溶液中，小麥幼苗生長，特別是它們的根部出現(xiàn)畸形。 實(shí)驗(yàn)6 植物根系對離子的選擇吸收原理 植物根系對不同離子吸收量是不同的，即使是同一種鹽類，對陽離子與陰離子的吸收量也不相同。本實(shí)驗(yàn)是利用植物對不同鹽類的陰、陽離子吸收量不同，使溶液的pH發(fā)生改變以說明這一吸收特性。此實(shí)驗(yàn)也使我們了解什么是生理酸性鹽與生理堿性鹽。儀器藥品pH計(jì) 精密pH試紙移液管 100ml三角燒瓶

15、0.5mg/ml（NH4）2SO4 0.5mg/ml NaNO3 操作步驟1在實(shí)驗(yàn)前約23周按實(shí)驗(yàn)19方法培養(yǎng)根系完好的小麥（或其他植物）植株。2實(shí)驗(yàn)開始時(shí)吸取0.5mg/ml濃度的（NH4）2SO4和NaNO3各100ml分別置于兩個(gè)100ml三角燒瓶中，另一三角燒瓶中放蒸餾水 100ml。用 pH計(jì)或精密pH試紙測定以上各溶液和蒸餾水的原始pH值。 3取根系發(fā)育完善的、大小相似的小麥3份，每份數(shù)株，但數(shù)目相等，分別放于上述3個(gè)三角燒瓶中，在室溫下經(jīng)2一3小時(shí)后*取出植株，并測定溶液的pH值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果按下表記錄。 植物從鹽溶液中吸收離子后溶液pH值的變化處 理pH值放植株前 放植株后0.5m

16、g/ml（NH4）2SO40.5MG/ML NaNO3蒸餾水注：為了避免根系的分泌作用影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故用蒸餾水作對照，將上述pH值變化進(jìn)行修正，即得真實(shí)的pH變化。實(shí)驗(yàn)7 鉀離子對氣孔開度的影響原理保衛(wèi)細(xì)胞的滲透系統(tǒng)歌可由鉀離子所調(diào)節(jié)，無論是環(huán)式或非環(huán)式光合磷酸化，都可形成ATP。ATP不斷供給保衛(wèi)細(xì)胞原生質(zhì)膜上的鉀氯離子交換泵作功，支持保衛(wèi)細(xì)胞逆著離子濃度差而從周圍表皮細(xì)胞吸收鉀離子，降低保衛(wèi)細(xì)胞的滲透勢，從而使氣孔張開。儀器藥品顯微鏡 鑷子 溫箱載玻片、蓋玻片 培養(yǎng)皿0.5%硝酸鉀 0.5%硝酸鈉操作步驟1配0.5%KNO3及0.5%NaNO3溶液。2在3個(gè)培養(yǎng)皿中分別放0.5%KNO3、

17、0.5%NaNO3及蒸餾水各15ml。3撕蠶豆葉表皮若干放入上述3個(gè)培養(yǎng)皿中。4培養(yǎng)皿放入25溫箱中，使溶液溫度達(dá)到25。5將培養(yǎng)皿置于人工光照條件下照光半小時(shí)。6分別在顯微鏡下觀察氣孔的開度。 實(shí)驗(yàn)8 植物的元素缺乏癥（溶液培養(yǎng)）原理植物的生長發(fā)育，除需要充足的陽光和水分外，還需要礦質(zhì)元素，否則植物就不能很好地生長發(fā)育甚至死亡。應(yīng)用溶液培養(yǎng)技術(shù)，可以觀察礦質(zhì)元素對植物生活的必需性；用溶液培養(yǎng)做植物的營養(yǎng)試驗(yàn)，可以避免土壤里的各種復(fù)雜因素。近年來也已應(yīng)用溶液培養(yǎng)進(jìn)行無污染蔬菜的栽培生產(chǎn)。儀器藥品分析天平 培養(yǎng)缸（瓷質(zhì)或塑料）魚缸打氣泵 量筒燒杯 移液管按下表分別配制貯備液，所用藥品均需為分析純

18、：藥品名稱用 量（g/L）Ca（NO3）282.07KNO350.56MgSO47H2O61.62KH2PO427.22NaNO342.45MgCl223.81Na2SO435.51CaCl255.50KCl37.28Fe-EDTANa2-EDTA 7.45g,FeSO47H2O 5.57g微量元素H3BO3 2.860g,MnSO4 1.015g,CuSO45H2O 0.079g,ZnSO4.7H2O0.220G,H2MOO4 0.090g操作步驟1材料準(zhǔn)備番茄、蓖麻、小麥、玉米等都作為材料。粒小的種子，從種了帶來的營養(yǎng)元素少，缺乏癥容易出現(xiàn)，粒大的種子可以在幼苗未做缺元素培養(yǎng)之前，先將胚乳

19、（或子葉）除去，這樣也可以加速缺乏癥的出現(xiàn)。種子用漂白粉溶液滅菌30分鐘，用無菌水沖洗數(shù)次，然后放在洗凈的石英砂中發(fā)芽，加蒸餾水，等幼苗長出第一真葉時(shí)待用。2配制缺元素培養(yǎng)液按下表用量配制缺元素培養(yǎng)液：貯備液貯備液（ml）完全-N-P-K-Ca-Mg-S-Fe缺微量元素Ca(NO3)2KNO3MgSO4KH2PO4Fe-EDTA微量元素NaNO3MgCl2Na2SO3CaCl2KCl101010101010101010101010101010101010101010101010101010101111111111111111010101010102.5配制時(shí)先取蒸餾水900ml，然后加入貯備液

20、，最后配成1 000ml，以避免產(chǎn)生沉淀。培養(yǎng)液配好后，用稀酸、堿調(diào)節(jié)至pH563培養(yǎng)觀察先取大小一致的植株，用泡沫塑料包裹莖部，插入培養(yǎng)缸蓋的孔中，每孔一株。將培養(yǎng)缸移到溫室中，經(jīng)常注意管理并觀察，用蒸餾水補(bǔ)充缸中失去的水分。每隔一定時(shí)間（一周左右，隨植株大小而定）更換培養(yǎng)溶液，并測定換出溶液的pH。植株長大后要通氣，通氣可用魚缸打氣泵。注意記錄植株的生長情況，各種元素缺乏癥的癥狀及出現(xiàn)的部位。4元素缺乏癥檢索1老葉受影響。（1）影響遍及全株，下部葉子干枯并死亡。a.植株淡綠色，下部葉子發(fā)黃，葉柄短而纖弱缺Nb.植株深綠色，并出現(xiàn)紅或紫色，下部葉子發(fā)黃，葉柄短而纖弱缺P（2）影響限于局部，有

21、缺綠斑，下部葉子不干枯，葉子邊緣卷曲呈凹凸不下。a.葉子缺綠斑有時(shí)變紅，有壞死斑，葉柄纖弱缺Mgb.葉子缺綠斑，在葉邊緣和近葉消耗或葉脈間出現(xiàn)小壞死斑，葉柄纖弱缺Kc葉子缺綠斑，葉子包括葉脈產(chǎn)生大的壞死斑，葉子變厚，葉柄變短缺Zn2幼葉幼葉受影響。（1）頂芽死亡，葉子變形和壞死。a.幼葉變鉤狀，從葉尖和邊緣開始死亡缺Cab.葉基部淡綠，從基部開始死亡，葉子扭曲缺B（2）頂芽仍活著，缺綠或萎蔫而無壞死斑。a.幼葉萎焉，不缺綠，莖尖弱缺Cub.幼葉不發(fā)生萎蔫，缺綠。（a）有小壞死斑，葉脈仍綠色缺Mn（b）無壞死斑，葉脈仍綠色缺Fe（c）無壞死斑，葉脈壞死缺S5待植株癥狀表現(xiàn)明顯后，將缺元素培養(yǎng)液換

22、成完全培養(yǎng)液，留下一株繼續(xù)培養(yǎng)，觀察植株癥狀是否減輕以至消失。其余植株測量根、莖的長度，重量，葉子數(shù)目、大小和重量，節(jié)數(shù)和節(jié)間長度，然后在烘箱中烘干，作為實(shí)驗(yàn)15、16、17、18的材料，測定植株中的氮，磷，鐵，銅的含量。實(shí)驗(yàn)9 硝酸還原酶活性的測定原理硝酸還原酸是植物氮素代謝作用中關(guān)鍵性酶，與作物吸收各利用氮肥有關(guān)。它作用于NO-3使還原為NO-3；NO-3+NADH+H+NO-2+NAD+H2O產(chǎn)生的NO-2可以從級織內(nèi)滲透到外界溶液中，并積累在溶液中，測定反應(yīng)溶液中NO-2含量的增加，即表現(xiàn)該酶活性的大小。這種方法簡單易行，在一般條件下都能做到。NO-2含量的測定用磺胺對氨基苯磺酸胺（s

23、ulfanil-amide）比色法。在酸性溶液中磺胺與NO-2形成重氮鹽，再與-萘胺偶聯(lián)形成紫紅色的偶氮染料。反應(yīng)液的酸度大則增加重氮化作用的速度，但降低偶聯(lián)作用的速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度可以增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽的穩(wěn)定度，所以反應(yīng)需要在相同條件下進(jìn)行。這種方法非常靈敏，能測定每ml含0.5g的NaNO2。儀器藥品721型分光光度計(jì) 真空泵（或注射器）保溫箱 天平真空干燥器 鉆孔器三角燒瓶 移液管燒杯0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.5（見附表2）。0.2mol/L KNO3：溶解20.22gKNO3于1 000ml蒸餾水中?；前吩噭?g磺胺加25ml濃鹽酸，用蒸餾水稀釋至100m

24、l。-萘胺試劑：0.2g-萘胺溶于含1ml濃鹽酸的蒸餾水中，稀釋至100ml。NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液：1g NaNO2用蒸餾水溶角成1 000ml。然后吸取5ml，再加蒸餾水稀釋成1 000ml，此溶液每ml含有NaNO2 10g，用時(shí)稀釋之。操作步驟1將新鮮取回的葉片（蓖麻、煙草、向日葵、油菜、小麥、棉花等均可）水先，用吸水紙吸干，然后用鉆孔器鉆成直徑約1cm的圓片，用蒸餾水洗滌23次，吸干水分，然后于臺天平上稱取等重的葉子圓片兩份，每份約0.30.4g（或每份取50個(gè)圓片），分別置于含有下列溶液的50ml三角燒瓶中：（1）0.1mol/L磷酸緩沖溶液（pH7.5）5ml+蒸餾水5ml；（2）0

25、.1mol/L磷酸緩沖溶液（pH7.5）5ml+0.2mol/L KNO3 5ml。然后將三角燒瓶置于真空干燥器中，接上真空泵抽氣，放氣后，圓片即沉于溶液中（如果沒有真空泵，也可以用20ml注射器代替，將反應(yīng)液及葉子圓片一起倒入注射器中，用手指堵住注射器出口小孔，然后用力拉注射器使真空，如此抽氣放氣反復(fù)進(jìn)行多次，即可使圓片中的空氣抽去而沉于溶液中）。將三角燒瓶置于30溫箱中，使不見光，保溫作用30分鐘，然后分別吸取反應(yīng)溶液1ml，以測定NO-2含量。注意取樣前葉子要進(jìn)行一段時(shí)間的光合作用，以積累碳水化合物，如果組織中的碳水化合物含量低，會使得酶的活性降低，此時(shí)則可于反應(yīng)溶液中加入30g 3-磷

26、酸甘油醛或1，6-二磷酸果糖，能顯著增加NO-2的產(chǎn)生。2NO-2含量的測定保溫30分鐘的結(jié)束時(shí)，吸取反應(yīng)溶液1ml于一試管中，加入磺胺試劑2ml及-萘胺試劑2ml，混合搖勻，靜置30分鐘，用比色計(jì)進(jìn)行比色測定，比色波長為520nm，記下吸光度或透光率，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得NO-2含量，然后計(jì)算酶活性，以每小時(shí)每克鮮重產(chǎn)生的NO-2g或mol表示之。3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線測定NO-2的磺胺比色法很靈敏，可以檢出低于1g/ml的NaNO2含量，可于05g/ml濃度范圍內(nèi)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于顯色反應(yīng)的速度與重氮化作用及偶聯(lián)作用的速度有關(guān)，溫度、酸濃度等都影響顯色速度，同時(shí)也影響靈敏度，但如果標(biāo)準(zhǔn)與樣品的測定都在

27、相同條件下進(jìn)行，則顯色速度相同，彼此可以比較。吸取不同濃度的NaNO2溶液（例如5、4、3、2、1、0.5g/ml）1ml于試管中，加入磺胺試劑2ml及-萘胺試劑2ml，混合搖勻，靜置303分鐘（或于一定溫度的水浴中保溫30分鐘），立即于分光光度計(jì)中進(jìn)行測定，測定時(shí)的波長為520nm，比色，讀取吸光度或透光率。然后，以吸光度為縱坐標(biāo)，NaNO2濃度為橫坐標(biāo)。于毫米方格紙上繪制吸光度-濃度曲線。實(shí)驗(yàn)10 葉綠體色素的提取和分離（紙層析法）原理 葉綠體色素是植物吸收太陽光能進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。從植物葉片中提取和分離色素是對其認(rèn)識和了解的前提。利用

28、葉綠體色素能溶于有機(jī)溶劑的特性，可用丙酮提取。 分離色素的方法有多種，紙層析是其中最簡便的一種。當(dāng)溶劑不斷地從層析濾紙上流過時(shí)，由于混合物中各成分在兩相（即流動相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，它們的移動速度不同，使樣品中的混合物得到分離。儀器藥品 大試管 臺天平 研缽 量筒 燒懷 漏斗 軟木層 新華濾紙 丙酮 四氯化碳 無水硫酸鈉 碳酸鈣 石英砂操作步驟 1稱取新鮮葉子2 g，放入研缽中加丙酮 5ml，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成勻漿，再加丙酮 5 ml，然后以漏斗過濾之，即為色素提取液。 2取準(zhǔn)備好的濾紙條（22 cm），將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長約1.5cm，寬約0.5cm的窄條，如圖7

29、。 3用毛細(xì)管取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條的上方，注意一次所點(diǎn)溶液不可過多。如色素過淡，用電吹風(fēng)吹干后再點(diǎn)1一2次。4在大試管中加入四氯化碳35ml及少許無水硫酸鈉。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，使窄端浸入溶劑中（色素點(diǎn)要略高于液面，濾紙條邊緣不可碰圖到試管壁），蓋緊軟木塞，直立于陰暗處進(jìn)行層析。5經(jīng)過0.5一1小時(shí)后，觀察分離后色素帶的分布。最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次黃色為葉黃素，再下面藍(lán)綠色為葉綠素a，最后的黃綠色為葉綠素b。 實(shí)驗(yàn)11 植物體色素及其性質(zhì) 原理 植物色素包括脂溶性的葉綠體色素和水溶性的細(xì)胞波色素，前者存在于葉綠體，與光合作用有關(guān)，如葉綠素；后者存在于液泡中，特別與花朵

30、的顏色有關(guān)，如花青素屬黃酮類物質(zhì)。了解它們的性質(zhì)有助于對其生理功能的理解。儀器藥品 分光計(jì) 天平 研缽 分液漏斗 移液管 量筒 吸球 試管 碳酸鈣 氫氧化鉀 丙酮 乙醚 甲酸 鹽酸 醋酸銅操作步驟 1葉綠體色素的提取 取菠菜（或其他植物）葉子2g，放在研缽中，加石英砂和碳酸鈣少許，丙酮約 5 ml，研磨成勻漿，再加丙酮15 ml，則得深綠色提取液，用漏斗過濾之，即為色素提取液。 2葉綠素的熒光現(xiàn)象 取上述色素丙酮提取液少許于試管中，用反射光和透射光，觀察提取液的顏色有無不同，反射光觀察到的溶液顏色，即為葉綠素產(chǎn)生的熒光顏色 3光對葉綠素的破壞作用取上述色素丙酮提取液少許，分裝在2支試管中，1支

31、試管放在黑暗處（或用黑紙包裹），另1支試管放在強(qiáng)光下（太陽光）經(jīng)2一3小時(shí)后，觀察兩支試管中溶液的顏色有何不同？ 4，銅在葉綠素分子中的替代作用 取上述色素丙酮提取液少許于試管中，1滴1滴加入濃鹽酸，直至溶液出現(xiàn)褐綠色，此時(shí)葉綠素分子已遭破壞，形成去鎂葉綠素。然后加醋酸銅晶體1小塊，慢慢加熱溶液，則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。此即表明銅已在葉綠素分子中替代了原來鎂的位置。 5黃色素和綠色素的分離 取上述色素丙酮提取液 10 ml，加到盛有 20 ml乙醚的分液漏斗中，搖動分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入20ml蒸餾水，輕輕搖動分液漏斗，靜置片刻，溶液即分為兩層。色素已全部轉(zhuǎn)入上層乙醚中，棄去下層丙酮和水，再用

32、蒸餾水沖洗乙醚溶液12次。然后于色素乙醚溶液中加入5ml30%KOH甲醇溶液，用力搖動分液漏斗，靜置10分鐘，再加蒸餾水約 10 ml，搖動后靜置分離，則得到黃色素層和綠色素層，分別保存于試管中。 6觀察色素溶液的吸收光譜（1）調(diào)節(jié)分光計(jì)，觀察電燈光的光譜。 （2）觀察色素丙酮提取液，用丙酮將溶液稀釋1倍比較之。 （3）觀察黃色素乙醚溶液，用乙醚將溶液稀釋1倍比較之。 （4）觀察皂化葉綠素甲醇溶液，用甲醇將溶液稀釋1倍比較之。（5）觀察被光破壞的色素丙酮溶液，試與（2）作比較。（6）觀察被銅取代了鎂的色素溶液。實(shí)驗(yàn)12 葉綠素 a和b含量的測定（分光光度法）原理 如果混合液中的兩個(gè)組分，它們的

33、光譜吸收峰雖有明顯的差異，但吸收曲線彼此又有些重疊；在這種情況下要分別測定兩個(gè)組分，可根據(jù)Lambert-Beer定律，通過代教方法，計(jì)算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對吸光度的影響，最后分別得到兩種組分的含量。 如圖9葉綠素a和b的吸收光譜曲線，葉綠素a的最大吸收峰在 663nrn，葉綠素 b在 645nrn，吸收曲線彼此又在重疊。根據(jù)Lambert-Beer定律，最大吸收光譜峰不同的兩個(gè)組分的混合液，它們的濃度C與吸光度A之間有如下的關(guān)系（參閱實(shí)驗(yàn)86）：A1=Caka1+Cbkb1A2=Caka2+Cbkb2式中：Ca為組分a的濃度，gL。 Cb為組分b的波度，gL。 Al為在波長1（即組

34、分a的最大吸收峰波長）時(shí)，混合液的吸光度A值。 A2為在波長2（即組分b的最大吸收峰波長）時(shí)，混合液的吸光度A值。 kal為組分a的比吸收系數(shù)，即組分a當(dāng)濃度為 1g/L時(shí)，于波長1時(shí)的吸光度A值。 Kb2為組分b的比吸收系數(shù)，即組分b當(dāng)濃度為1gL時(shí)，于波長2時(shí)的吸光度A值。ka2為組分a（濃度為1 g/L）在波長2時(shí)的吸光度A值。 Kb1為組分b（濃度為1 g/L）在波長1時(shí)的吸光度A值。從文獻(xiàn)中可以查得葉綠素a和b的80%丙酮溶液，當(dāng)濃度為1g/L時(shí)，比吸收系數(shù)k值如下：波長（nm）葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60將表中數(shù)值代入上式（1）、（2），則得：

35、A663=82.04Ca+9.27CbA645=16.75Ca+45.60Cb經(jīng)過整理之后，即得到下式：Ca=0.012 7A6632.69A645 (3)Cb=22.9A6454.68A663 (4)CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 (5)（5）式中CT為總?cè)~綠素濃度，單位為mg/L。利用上面（3）、（4）、（5）式，即可計(jì)算出葉綠素a和b及總?cè)~綠素的濃度。注：一般大學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)室所用的人光光度計(jì)多為721型，屬低級類型，其單色光的半波寬值要比中級類型的751型大得多，而葉綠素a和b吸收峰的波長相差僅18nm（663645nm），難以達(dá)到精確測定。此外有時(shí)還由于儀器本身的

36、標(biāo)稱波長與實(shí)際波長不符，測定的正確性就更差了。根據(jù)公式計(jì)算往往會得到葉綠素ab值小于1，這就不很奇怪了。除向?qū)W生說明其中原因外，還可以在實(shí)驗(yàn)前對儀器的波長進(jìn)行校正，使標(biāo)稱波長與實(shí)際波長一致。校正可用純的葉綠素a和b進(jìn)行，分別在波長650670nm和630650nm之間，每隔12nm測定葉綠素a或b的吸光度A，以確定葉綠素a和b的吸收峰的波長。如果測得的峰值與文獻(xiàn)上的峰值663nm和645nm不同，可按照儀器說明書步驟進(jìn)行校正，或者更方便的方法可以打開儀器蓋子，松動波長刻度盤緊固螺絲，調(diào)節(jié)刻度盤使波長至正確值，而后旋緊螺絲復(fù)原儀器。為校正儀器波長所需的葉綠素a和b的用量是很少的，用紙層析法很快就

37、能分離制得。取植物葉子約1g，用乙醚提取葉綠體色素，再用毛細(xì)管將色素溶液畫在3mm厚濾紙上使成一直線，為使分離效果好，一般重復(fù)點(diǎn)樣一次即可。然后于密閉容器中進(jìn)行上行層析，溶劑為含0.5%丙醇的石油醚。層析結(jié)束，用剪刀小心地剪下藍(lán)綠色的葉綠素a和黃綠素的葉綠素b，注意剪時(shí)盡量避開有可能遭污染的地區(qū)。最后分別浸于80%丙酮中，洗下葉綠素a和b。實(shí)驗(yàn)13 葉綠體的分離原理分離葉綠體應(yīng)在等滲溶液中制備，以減少滲透壓對葉綠體的傷害，仔細(xì)研磨，然后離心取得葉綠體的懸浮液。整個(gè)過程應(yīng)在05下進(jìn)行，所有提取物、溶液和材料，也應(yīng)保存在該溫度下，分離后活性測定工作應(yīng)盡快進(jìn)行。儀器藥品離心機(jī) 天平容量瓶 量筒移液管

38、 研缽燒杯 紗布0.35mol/L NaCl 35m mol/L NaCl 10m mol/L Tris-HCl緩沖劑，Ph7.8（見附表2）操作步驟1最好在晴天上午10時(shí)左右，選取健康的菠菜葉（也可用豌豆葉），洗凈，擦干，去葉柄及主脈，稱取10g鮮重在冰浴中研磨。2研磨時(shí)加入20ml 0.35mll/L NaCl，2ml 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液，以及少量石英砂。3研磨成勻漿后，用4層紗布過濾于燒杯中。4濾液用1 000r/min離心2分鐘，棄去沉淀，收集上清液。5上清液用3 000r/min離心5分鐘，棄去上清液，沉淀即是葉綠體。6將沉淀分成2份，分別加入0.35mol/

39、L NaCl溶液和35mmol/L NaCl溶液各10 ml，制成懸液，使葉綠體分別處于等滲和低滲溶液中，以獲得完整葉綠體和破碎葉綠體。保存在冰箱中，用于實(shí)驗(yàn)41的測定。實(shí)驗(yàn)14 離體葉綠體對染料的還原作用（希爾反應(yīng)）原理離體的完整葉綠體，在合適的氧化劑存在下，例如染料二氯靛酚（DCPIP），當(dāng)照光時(shí)，可以使水光解釋放氧氣，同時(shí)使染料還原，結(jié)果染料從原來的藍(lán)色變?yōu)榉奂t色至無色。此反應(yīng)為希爾所發(fā)現(xiàn)，故常稱為希爾反應(yīng)。可用分光光度計(jì)測定反應(yīng)前后染料吸光度A的變化，變化在45分鐘內(nèi)呈線性關(guān)系。儀器藥品721型人光光度計(jì) 試管架燒杯 容量瓶移液管 試管100m mol/L磷酸緩沖液，pH7.3（見附表

40、2）0.3m mol/L 2，6二氯靛酚鈉；稱取8.7mg二氯靛酚鈉，加蒸餾水定容至100ml（如藥品純度低，可適當(dāng)提高濃度）。操作步驟1加樣取干凈試管6支，分為兩組，并分別編成1、2、3號，然后按下表加入試劑。管號磷酸緩沖液（ml）葉綠體懸液（ml）煮沸（分鐘）二氯靛酚（ml）完整葉綠體1239.49.49.90.20.20.250.50.5葉綠體碎片1239.49.49.90.10.10.150.50.5注：（1）葉綠體懸液為實(shí)驗(yàn)40所制備。（2）2號管加葉綠體懸液后于沸水浴上煮5分鐘，然后用蒸餾水補(bǔ)足喪失的水分。（3）3號管為比色時(shí)調(diào)節(jié)零點(diǎn)用。（4）各試管都在最后加入二氯靛酚以開始反應(yīng)，

41、并立即搖勻進(jìn)行比色測定，以代表作用時(shí)間為0。各管在加染料之前保存在冰浴中。2比色當(dāng)加入染料后立即搖勻倒入相應(yīng)的比色杯中，迅速測定吸光度，波長為620nm，此即代表0時(shí)的吸光度。然后將比色杯置于離150W燈光約60cm處照光，每隔1分鐘快速讀下吸光度的變化，連續(xù)進(jìn)行5、6次讀數(shù)，嚴(yán)格控制照光時(shí)間。3將結(jié)果以每分鐘A620的變化量（A620/min）為縱坐標(biāo)，以時(shí)間（分鐘）為橫坐標(biāo)作圖。實(shí)驗(yàn)15 改良半葉法測定大田光合強(qiáng)度原理 改良半葉法系將植物稱葉片的一部分遮光或取下置于暗處，另一部分則留在光下進(jìn)行光合作用，過一定時(shí)間后，在這兩部分葉片的對應(yīng)部位取同等面積，分別烘干稱重。因?yàn)閷ΨQ葉片的兩對應(yīng)部位

42、的等面積的干重，開始時(shí)被視為相等，照光后葉片重量超過暗中的葉重，超過部分即為光合作用產(chǎn)物的產(chǎn)量，并通過一定的計(jì)算可得到光合作用強(qiáng)度。儀器藥品 分析天平 烘箱 剪刀 稱量皿 刀片 金屬模板 紗布 錫紙 三氯乙酸操作步驟 1選擇測定樣品 在田間選定有代表性植株葉片（如葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件等）20張，用小紙牌編號。 2葉子基部處理 為了不使選定葉片中光合作用產(chǎn)物往外運(yùn)，而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，可采用下列方法進(jìn)行處理： （1）可將葉子輸導(dǎo)系統(tǒng)的韌皮部破壞。如棉花等雙子葉植物的葉片，可用刀片將時(shí)柄的外皮環(huán)割約0.5 cm寬。 （2）如小麥、水稻等單子葉植物，由于韌皮部和木質(zhì)部難以分開處理，

43、可用剛在開水中浸過的紗布或棉花做成的夾子。將葉子基部燙傷一小段即可（一般用90以上的開水燙20秒）。 （3）由于棉花葉柄木質(zhì)化程度低，葉柄易被折斷。用開水燙，又難以掌握燙傷的程度，往往不是燙得不夠便是燙得過重而葉片下垂，改變了葉片的角度。因此可改用化學(xué)方法來環(huán)割，選用適當(dāng)濃度的三氯乙酸，點(diǎn)涂葉柄以阻止光合產(chǎn)物的輸出。三氯乙酸是一種強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)沉淀劑，滲入葉柄后可將篩管生活細(xì)胞殺死，而起到阻止有機(jī)養(yǎng)料運(yùn)輸?shù)淖饔?。三氯乙酸的濃度，視葉柄的幼嫩程度而異。以能明顯灼傷葉柄，而又不影響水分供應(yīng)，不改變?nèi)~片角度為宜。一般使用5%三氯乙酸。 3剪取樣品 葉基部處理完畢后，即可剪取樣品，記錄時(shí)間，開始光合作用

44、測定。一般按編號次序分別剪下對秋葉片的一半（主脈不剪下），按編號順序夾于濕潤的紗布中，貯于暗處。過4一5小時(shí)后，再依次剪下另外半葉，同樣按編號夾于濕潤紗布中，兩次剪葉的速度應(yīng)盡量保持一致，使各葉片經(jīng)歷相等的照光時(shí)數(shù)。 4稱重比較 將各同號葉片之兩半按對應(yīng)部位疊在一起，在無粗葉脈處放上已知面積（如棉花可用1.52cm）的金屬模板，用刀片沿邊切下兩個(gè)葉塊，分別置于照光及暗中的兩個(gè)稱量皿中，8090下烘至恒重（約5小時(shí)），在分析天平上稱重比較。 5計(jì)算結(jié)果葉片干重差之總和（mg）除以葉面積（換算成dm2，1dm2=100cm2）及照光時(shí)數(shù)，即得光合作用強(qiáng)度，以干物質(zhì)，mg/（dm2b）表示之。計(jì)算公

45、式如下：光合作用強(qiáng)度=由于葉內(nèi)貯存的光合產(chǎn)物一般為蔗糖和淀粉等，可將干物質(zhì)重量乘系數(shù)1.5，得二氧化碳同化量，單位為CO2，mg/(dm2h)。實(shí)驗(yàn)16 淀粉的合成淀粉磷酸化酶原理植物的組織中有一種淀粉磷酸化酶，能利用1-磷酸葡萄糖合成淀粉，生成的淀粉可用I2-KI染色檢出。1-磷酸葡萄糖淀粉儀器藥品臺天平 離心機(jī)水浴鍋 研缽移液管 1%1-磷酸葡萄糖0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸緩沖液，pH6.5，（見附表2）。I2-KI溶液：溶液1.5gKI于少量蒸餾水中，加入結(jié)晶碘0.3g，待溶解后，稀釋100ml。操作步驟1取馬鈴薯塊莖一個(gè)，削去皮，切成小塊，稱取10g，于研缽中加石英砂

46、少許，用10ml 0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸緩沖溶液研磨成勻漿。2用紗布濾取汁液，于3 500 r/min離心15分鐘，以除去淀粉，即為粗制酶液。3取小試管2支，分別加入1%1-磷酸葡萄糖1ml，再于1管中加入1ml粗制酶液，另1管中加入已經(jīng)煮沸15分鐘的粗制酶液。搖勻試管，立即各吸取1滴于白瓷板上，分別加1滴I2-KI溶液，測試有無淀粉存在。4以后每隔10分鐘，取試管中混合液1滴，檢查淀粉的生成。比較煮沸能否使酶失活？實(shí)驗(yàn)17 植物呼吸強(qiáng)度的測定(小籃子法)原理利用Ba（OH）2溶液吸收呼吸過程中釋放的CO2，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留的Ba（OH）2，從空白和樣品兩者

47、消耗草酸溶液之差，即可計(jì)算出呼吸過程中釋放的CO2量。儀器藥品廣口瓶 溫度計(jì)酸式滴定管 干燥管尼龍網(wǎng)制小籃0.05 mol/L Ba（OH）2指示劑：0.1%麝香草酚酞酒精溶液（見附錄表4）。1/44 mol/L草酸溶液：準(zhǔn)確稱取重結(jié)晶的草酸H2C2O42H2O2.8652g，溶于蒸餾水，配成1 000ml，每ml溶液相當(dāng)于1mg的CO2。操作步驟1取500ml廣口瓶一個(gè)，裝配一只三孔橡皮塞，一孔插入盛堿石灰的干燥管，以吸收空氣中的CO2，保證進(jìn)入呼吸瓶的空氣無CO2，一孔插入溫度計(jì)，另一孔直徑約1cm左右供滴定用，滴定前用小橡皮塞塞緊。瓶塞下面掛一尼龍網(wǎng)制小籃，用以盛實(shí)驗(yàn)材料，整個(gè)裝置如圖所

48、示。2稱取萌發(fā)的小麥或水稻種子15g，裝于小籃內(nèi)，將小籃掛在廣口瓶內(nèi)，同時(shí)加0.05mol/L Ba（OH）2溶液25ml于廣口瓶內(nèi)，立即塞緊瓶塞，并用熔化的石蠟密封瓶口，防止漏氣。每10分鐘左右，輕輕地?fù)u動廣口瓶，破壞溶液表面的BaCO3薄膜，以利對CO2的吸收。31小時(shí)后，小心打開瓶塞，迅速取出小籃，加入2滴指示劑，立即重新塞緊瓶塞。然后拔出小橡皮塞，將滴定管插入小孔中，用1/44 mol/L的草酸滴定，直到藍(lán)綠色轉(zhuǎn)變成無色為止。記錄滴定所耗用的草酸溶液的ml數(shù)。4另取用沸水煮死的種子為材料，作同樣測定，以此作為對照。5計(jì)算式中 V0為煮死的種子，所耗用草酸的ml 數(shù)， V1為發(fā)芽的種子，

49、所耗用草酸的ml 數(shù)。 實(shí)驗(yàn)18 過氧化物酶活性的測定（比色法）原 理 過氧化物酶廣泛分布于植物的各個(gè)組織器官中。在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，可用分光度計(jì)測量生成物的含量。 儀器 藥品 721型分光光度計(jì) 離心機(jī) 秒表 天平 研缽 磁力攪拌器 愈創(chuàng)木酚 30過氧化氫 20 mmo1L KH2LPO4 100mmo1/L磷酸緩沖液，pH6.0（見附表2） 反應(yīng)混合液：100 mmo1L磷酸緩沖液（pH 60）50 ml于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚281，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后，加入 30%經(jīng)過氧化氫191，混合均勻，保存于冰箱中。操作

50、步矚 1稱取植物材料1g，加 20 mmolL KH2PO45 ml，于研缽中研磨成勻漿，以 4 000rmin 離心15分鐘，傾出上清液保存在冷處，殘?jiān)儆? ml KH2PO4溶液提取一次，合并兩次上清液貯于冷處備用。 2取光徑 Icm比色杯2只，于 1只中加入反應(yīng)混合液3m1，KH2PO4 1m1，作為校零對照，另1只中加入反應(yīng)混合液3ml，上述酶液1ml（如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒表記錄時(shí)間，于分光光度計(jì)上測量吸光度值，每隔1分鐘讀數(shù)一次，讀數(shù)于波長 470nm下進(jìn)行。3. 以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以A470/minmg蛋白質(zhì)（或鮮重g）表示之。蛋白質(zhì)含量測定參閱實(shí)驗(yàn)56。 實(shí)驗(yàn)19 多酚氧化酶活性的測定