基因表達(dá)載體構(gòu)建

1、二 基因表達(dá)載體的構(gòu)建,思考與討論,1 基因載體必須具備的基本條件是什么,2 基因工程可做載體的結(jié)構(gòu)有那些？最常 使 用 的載體是什么,3 請圖示大腸桿菌質(zhì)粒結(jié)構(gòu),4 從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞DNA分子中提取得到 Bt毒蛋白基因能否直接進(jìn)入普通棉細(xì)胞中？ 如果把目的基因人工注射到普通棉細(xì)胞中， 那么該基因在棉細(xì)胞中會穩(wěn)定存在，復(fù)制和表 達(dá)嗎,5 假如你是一個基因工程操作者，若使目的基因 進(jìn)入棉細(xì)胞，并能在棉細(xì)胞中遺傳和表達(dá)，你 應(yīng)當(dāng)采取什么辦法？你能說出其中的理由嗎 ,一 ）基因表達(dá)載體的構(gòu)建,2 請你定義：基因表達(dá)載體構(gòu)建之含義,1 基因工程操作中，構(gòu)建基因表達(dá)載體之目的 是什么,將目的基因、啟

2、動子和終止子科學(xué)按裝 在經(jīng)修飾和改造完備的載體之上,確保目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在、復(fù)制、遺傳和表達(dá)，使其發(fā)揮作用,3 基因表達(dá)載體之基本組成是什么,1）結(jié)構(gòu)基因即提取的目的基因核苷酸序列，負(fù)責(zé) 編碼目標(biāo)蛋白質(zhì),2）啟動子位于編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因之首一段殊結(jié) 構(gòu)的DNA片段，RNA聚合酶的識別部位和結(jié)合部位,3）終止子位于編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因末端一段特殊 結(jié)構(gòu)的DNA片段，具有終止基因轉(zhuǎn)錄過程的作用,4）復(fù)制原點(diǎn)能夠自我復(fù)制保證目的基因在受體細(xì) 胞中復(fù)制遺傳和表達(dá),5）遺傳標(biāo)記基因檢測受體細(xì)胞中是否含有目的基 因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來,請你以質(zhì)粒作載體構(gòu)建基因表達(dá)載體之模式圖,基因表

3、達(dá)載體,基因表達(dá)載體,啟動子,復(fù)制原點(diǎn),終止子,插入目的基因,遺傳標(biāo)記基因,4 建構(gòu)基因表達(dá)載體方法,2）用同種限制酶切割目標(biāo)DNA分子，截取目 的基因，使其產(chǎn)生與質(zhì)粒相同的末端,1）用某種限制酶如EcoRI限制酶，在基因插 入位點(diǎn)切割質(zhì)粒，使質(zhì)粒出現(xiàn)一個切口， 露出兩個黏性末端,3）依據(jù)目的基因表達(dá)的特點(diǎn)和位置，用限制 酶切割受體細(xì)胞相應(yīng)的控制元件 啟動 子和終止子,4）用限制酶將啟動子和終止子與目的基因連 接起來，成為一個整體,5）將目的 基因 插入質(zhì) 粒切口處，用 Ecoli DNA連接酶把基因與質(zhì)?？p合起來，成功 創(chuàng)建一個重組DNA分子,建議模擬完成建構(gòu)大腸桿菌基因表達(dá)載體 ，并寫出具

4、體步驟,三 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,基因?qū)胧荏w細(xì)胞的標(biāo)志是什么,1目的基因與載體在受體細(xì)胞共同復(fù)制、遺 傳和表達(dá)?；蚰康幕虿迦爰?xì)胞染色體上DNA分 子之中，隨同受體細(xì)胞DNA分子復(fù)制、遺傳和表 達(dá)。 2 實(shí)際上外源目的基因變成了受體細(xì)胞的一部 分，這種現(xiàn)象叫做轉(zhuǎn)化,2 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞遵循的基本原理是什么,通常借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞和寄生之途徑,一）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞,農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，在 自然條件下易感染雙子葉植物和裸子植物，而 對大多數(shù)單子葉植物沒有感染力,2 感染原理,當(dāng)植物體受到損傷時，傷口處細(xì)胞分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，這時農(nóng)桿菌中的T

5、i質(zhì)粒上的TDNA分子可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色DNA分子之上,1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,目標(biāo),二） 將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞,2 實(shí)例,基因工程培育轉(zhuǎn)基因動物最常用、最有效的 方法顯微注射技術(shù),1）將含有目的基因的表達(dá)載體提純,2）從雌性動物體內(nèi)取出受精卵細(xì)胞,3）用顯微注射儀把目的基因注射到受精卵細(xì)胞,4）把含有目的基因的受精卵移植到雌性動物子 宮或輸卵管發(fā)育成具備新性狀的動物,世界上第一例體型比普通小鼠大1.8 倍的轉(zhuǎn)基因“超級小鼠”就是用顯微注射技術(shù)獲得成功,三） 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞,目的基因?qū)氪竽c桿菌最常用的轉(zhuǎn)化方法是,1 用Ca2+ 處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于能 夠吸收環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞,2 用大腸