疑難血型鑒定及配性

1、疑難血型鑒定及配型,在ABO血型系統(tǒng)內(nèi)，幾乎所有缺乏抗原的人體，在其血清內(nèi)必具有所缺乏抗原的抗體，若在紅細胞上具有抗原時，則其血清內(nèi)必缺乏對應(yīng)的抗體，但這種規(guī)則偶然也有例外，血清中的抗體和細胞上的抗原不互補，正反定型相互不支持，出現(xiàn)血型難以確定。 另外會遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗體或紅細胞上致敏有意外抗體及其它原因造成交叉配血不能相合,在ABO分型實驗中，技術(shù)上的錯誤與各種臨床情況或疾病，都能造成正反定型之間的矛盾，當預(yù)期的正反定型不能產(chǎn)生ABO抗原與抗體的互補結(jié)果時，首先需要排除在技術(shù)上可能發(fā)生的錯誤，如果細心而反復(fù)的實行對照試驗產(chǎn)生相同形式的凝集反應(yīng)，則需要考

2、慮到細胞和血清的變異情況,一）、實驗者技術(shù)問題,有時造成正反定型不符，并不是紅細胞或血清本身的問題，而是由于操作不當造成。主要原因有： 1. 標本或試劑搞錯 2.紅細胞懸液過濃或過 3.標本混亂 4.未加試劑,5.試劑受到污染 6.溫度在離心過程中增高 7.忽略觀察溶血現(xiàn)象 8.細胞與血清間比例不適當，未發(fā)現(xiàn)弱凝集 9.如果使用血清來懸浮細胞，血清中的高濃度血型物質(zhì)中和了抗體試劑，使其不能再與紅細胞抗原發(fā)生反應(yīng) ，出現(xiàn)了假的陰性反應(yīng) 10.在反定型試驗時沒有加血清，誤認為是陰性結(jié)果； 11 結(jié)果判斷錯誤,二）如何解決技術(shù)原因造成的正反定型不符,為解決ABO血型不一致而開始做深入試驗之前，首先要

3、排除技術(shù)上可能發(fā)生的錯誤，首先要重復(fù)作正反定性試驗使用質(zhì)量合格的試劑，嚴格地執(zhí)行正規(guī)的操作，再者則重新抽取標本。如果先前試驗中紅細胞懸浮在血清或血漿中，改為用鹽水洗滌紅細胞后配成懸液，以及細心觀察和解釋試驗結(jié)果就可解決許多明顯的問題如果細心而反復(fù)的實行對照實驗還是與先前一樣的結(jié)果。就要根據(jù)情況從細胞和血清中尋找原因,ABO血型定型中由于細胞和血清本身的原因造成正反定型不一致,一、減弱或缺少的抗原反應(yīng) 二、未知的抗原反應(yīng) 三、減弱或缺少的抗體反應(yīng) 四、未知的抗體反應(yīng),絕大多數(shù)A和B型人紅細胞用合格的抗-A和抗-B試劑檢測都呈3十和4+的凝集強度，血清用合格的試劑紅細胞檢測絕大部分呈2+至4+的凝

4、集強度。在A和B型紅細胞凝集強度低于2+和1+的人中，有一部分是變異基因所致的亞型紅細胞或者是疾病相關(guān)的抗原減弱。血清中的抗A或抗B凝集強度低于2+和1+的人中，是抗體減弱或缺乏,一個人減弱或缺少抗原的反應(yīng)范例,一、減弱或缺少的抗原反應(yīng),促成紅細胞抗原表面減弱或減少的情況包括下列3種情況： A或B抗原的亞型 疾病狀態(tài)（如白血?。?血型特異性可溶性物質(zhì),1） 這位病人的紅細胞分型法與正常的強凝集反應(yīng)相比，證明是減弱的反應(yīng)，依據(jù)反定型法，應(yīng)預(yù)期病人具有A抗原的活性。紅細胞與抗AB的減弱凝集反應(yīng)及抗A試劑缺乏凝集反應(yīng)，都暗示為A型的亞型。 （2） 補充的實驗室試驗：吸收和放散試驗證明紅細胞附著有抗A

5、。病人唾液含有A與H物質(zhì)。 （3） 討論：A亞型的問題要比B亞型者多而常見，因為A2或A2B型的人體血清中可能有抗A1抗體。比A2型為弱的A亞型不多見。若一位弱亞型病人錯誤地分型為O型而輸予O型血液時，預(yù)期應(yīng)無嚴重的后果。但若將一位弱亞型病人錯誤地分型而輸給一位O型的病人時，則能引發(fā)嚴重的輸血反應(yīng)問題,1.A或B抗原的亞型,當A、B及AB型紅細胞與試劑抗血清作實驗時，預(yù)期發(fā)生的反應(yīng)皆為4+的強反應(yīng)。正定型減弱的凝集反應(yīng)，可暗示這可能是A、B亞型。當減弱的反應(yīng)在健康供血者檢查時，亞型是最可能的解釋?？笰B分型血清能檢出某些不與抗A抗B試劑發(fā)生反應(yīng)的A及B型,2、疾病狀態(tài)：減弱的A抗原表現(xiàn)也可病人

6、后天的特性，如：A型急性白血病患者在疾病活動期改變?yōu)锳2型或A3亞型，在疾病緩解期又恢復(fù)到原來A型反應(yīng)?？乖詮姸鹊臏p弱，也能發(fā)生于B抗原與H抗原以及其他血型系統(tǒng)的抗原。 3、過量血型特異性可溶性物質(zhì)：在患卵巢囊腫，胃癌或胰腺炎、腸道阻塞的稀有情況，能查見多量的血型特異性可溶性物質(zhì)。病人血清中的ABH物質(zhì)濃度極高，以抑制抗A或抗B試劑的作用，在正定型中，這種情形能產(chǎn)生假陰性，這種情況并非是病人的紅細胞抗原發(fā)生改變，而是其血清含有過量的病人血清時，則能進行正確的ABO分型試驗,二、未知的抗原反應(yīng),未知的抗原反應(yīng)在正定型中產(chǎn)生的情況范例，能有以下七種情況所引起,1、獲得性B抗原 獲得性B抗原的特性

7、，獲得性B只表現(xiàn)在A型紅細胞上，使紅細胞的反應(yīng)像AB型，而血清中只有抗B 抗體，正定型中反應(yīng)的強度，A抗原大于B抗原，自身對照實驗為陰性反應(yīng)且分泌型人體內(nèi)有A物質(zhì)，但B物質(zhì)則缺乏,當紅細胞血型似乎是型而血清中含有抗時，應(yīng)該考慮是獲得性抗原只有型的紅細胞能獲得活性，因此稱為獲得性抗原，鑒別獲得性抗原的方法如下： .觀察細胞與抗及抗的凝集強度，與抗的反應(yīng)要比與抗的反應(yīng)強； .用自身的紅細胞檢查本人的血清其血清中的抗不能凝集自身紅細胞中的類抗原； .檢查唾液是否存在、物質(zhì)，如果病人是分泌型，那么有物質(zhì)而無物質(zhì),4. 獲得性抗原在正常PH介質(zhì)中，紅細胞與抗-B血清發(fā)生凝集，但在等于和低于PH6的酸性條

8、件下，凝集消失，這是獲得性抗原最主要的血清學特征。 5. 核對病人的診斷。獲得性抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌，革蘭氏陰性細菌變形桿菌的感染有關(guān)。 結(jié)論：病人為A型，具有獲得性B抗原,類B抗原具有下例特點 1.類B與抗B的反應(yīng)一般無溶血現(xiàn)象。類B是獲得性的，不符合遺傳規(guī)律，病情好轉(zhuǎn)，類B就消失，真正B抗原符合遺傳規(guī)律終生不變。 2.類B與抗B結(jié)合疏松，用類B紅細胞作吸收放散試驗，可放散出大量抗B抗體，類B病人的唾液中不含B血型物質(zhì),3.因類B抗原而錯定血型，其血清中天然抗體不合規(guī)律，如是AB型血清中應(yīng)該不含天然抗B抗體。但A型類B表現(xiàn)似AB型，血清中卻含有抗B抗體，此抗體并不凝集患者本人的紅細胞，

9、只要按正規(guī)操作，在血型鑒定中很容易發(fā)現(xiàn)被檢者紅細胞所含抗原與血清中所含抗體的矛盾。在AB型的交叉配血時，如發(fā)現(xiàn)主側(cè)凝集，應(yīng)考慮類B存在，重新鑒定血型并檢查唾液中的血型物質(zhì)，測出被檢者真正的血型，最后選擇同型人輸血。 4.類B與全凝集或多凝集紅細胞不同，前者只與抗B反應(yīng)，在AB型血清中不凝集,二）改變的抗原,紅細胞表面遺傳產(chǎn)生的多凝集反應(yīng)可分為先天性的或為獲得性的。紅細胞被大多數(shù)正常人類血清所凝集的反應(yīng)稱為多凝集反應(yīng)。三種形式的多凝集反應(yīng)包括：T抗原活化， Tn 抗原活化多凝集性,所有正常人的血清含有抗T抗體，所以T活化的紅細胞都是多凝集的。 T活化的紅細胞與血清的反應(yīng)，是一種混合視野的凝集反應(yīng)

10、， T活化的紅細胞不為臍帶血清所凝集，因為臍帶血清中缺乏抗T抗體，預(yù)備T活化的紅細胞，使其吸附血清中的抗T抗體，就能正確定出ABO分型法,三）抗體附著的紅細胞,有抗體稠密的附著的紅細胞，顯示直接抗人球蛋白試驗陽性?？稍谡ㄐ椭挟a(chǎn)生混合視野或減弱的凝集反應(yīng)。引起這種現(xiàn)象的原因包括： 自身免疫溶血性貧血癥 產(chǎn)生藥物抗體 輸血反應(yīng) 新生兒溶血病,患新生兒溶血病(HDN)嬰兒，其紅細胞嚴重地包被IgG抗體分子，時常是與抗D試劑和抗-A、抗-B試劑發(fā)生這種自發(fā)凝集，在45C進行放散試驗，可以從紅細胞上解禽掉這些抗體，此后，即可用抗-A、抗-B很容易地檢測這些紅細胞血型。含冷抗體IgM自身凝集素的紅細胞標

11、本在鹽水中也發(fā)生凝集，這類冷抗體可能由37孵育和37C洗滌被清除掉，也可由DTT等巰基化合物消除掉。 （還存在遮蔽現(xiàn)象,自身免疫性溶血性貧血病人血清中可有溫性自身抗體。能凝集自身和其它各型紅細胞，病人的細胞上吸附了這種抗體，在自身或他人血清中，均可出現(xiàn)凝集，因此，其紅細胞常被誤定為AB，將其血清定型又被誤定O型。由這種抗體造成的血型檢查上的困難，可以用遞增溫度（由22度37度45度）的鹽水許多紅細胞后，在通過檢查血型來解決，如此類抗體在配血中只影響影響病人紅細胞，而血清內(nèi)無游離抗體，也可用遞增溫度鹽水洗滌紅細胞后再進行配型，如果血清中有游離的抗體存在，表示病情嚴重，配血就較困難，不得已可選用凝

12、集較弱的血，密切觀察，一旦出現(xiàn)反應(yīng)立即停輸,四）紅細胞的混合性族群,在ABO分型法中的混合視野型視野反應(yīng)，通常是指示輸了一種不同血型的血液，如輸O型血至A型人或A型血或O型血人。因為輸和病人自己血型不同ABO血型的嚴重性，故在輸血前解釋混合視野型凝集反應(yīng)的原因至為重要。假設(shè)一位病人為A型時，而在他（她）的循環(huán)內(nèi)，有些紅細胞為B型或，故能招致不幸的結(jié)果。調(diào)查此病的病史，可有助于證實混合視野型凝集反應(yīng)的原因。若新近輸血或母兒出血或骨髓移植的受髓者能予確定排除，應(yīng)考慮的其他原因為：A3亞型，Tn多凝集反應(yīng),三、減弱的或缺少的抗體反應(yīng),抗體的減弱或缺少，是由降低或缺少抗體的產(chǎn)生所致。在反定型中缺少抗體

13、反應(yīng)，可有下列四種情況引起： 年齡 丙球蛋白過低血癥 丙球蛋白缺乏血癥 嵌合現(xiàn)象,一個缺少抗體的反應(yīng)范例,1）正定型抗A4+，暗示為A型，但反定型提示為AB型 （2）補充試驗：將正反定型試管放4度1030分鐘，證明反定型的BC管能夠出現(xiàn)凝集，自身對照試驗仍保持陰性；加大血清量。 （3）結(jié)論：病人為A型，抗B減弱,一）年齡,新生兒與幼兒及老年人可顯示種屬抗體的減弱或缺少。對新生兒血清常規(guī)不做血清分型法，是因他們尚未開始產(chǎn)生抗體所致。在新生兒或幼兒能檢的抗體，都是在母體子宮內(nèi)被動獲得者,二）丙球蛋白過低血癥,血漿蛋白的丙球蛋白部分減少（丙球蛋白低血癥）能導(dǎo)致抗體的減弱或減少。證明的丙球蛋白過低血癥

14、的情況包括：免疫抑制藥物的應(yīng)用，白血病，免疫缺乏性疾患及骨髓移植后,三）丙球蛋白缺乏血癥,丙球蛋白缺乏血癥（血漿丙球蛋白減少）可為先天性的或為后天性的。如丙球蛋白缺乏血癥、免疫缺乏性疾患、以及物理性（如放散線的暴露）與細胞毒殺劑的作用，都有促成丙球蛋白缺乏血癥狀態(tài)之發(fā)生,溶血反應(yīng),溶血反應(yīng)和凝集反應(yīng)在血型檢定和交叉配血上的意義相同。在血型鑒定中因有相對應(yīng)的抗原抗體而出現(xiàn)溶血反應(yīng)時，應(yīng)按血型不合處理， 處理：滅活補體或用EDYA處理,四、未知的抗體反應(yīng),反定型中所產(chǎn)生的未知的抗體反應(yīng)是有四種情況引起： 緡錢狀形成 冷型自身抗體 未知的ABO種屬凝集素 未知的同種抗體,一）緡錢狀形成,如紅細胞被懸

15、浮在自己的血漿中，紅細胞的緡錢狀形成或聚合現(xiàn)象可疑似凝集反應(yīng)。能產(chǎn)生緡錢狀形成的種種情況包括：血清蛋白濃度異常，球蛋白濃度在疾病中升高（如多發(fā)性骨髓瘤），原發(fā)性巨球蛋白血癥，纖維蛋白原濃度增高，任何A/G倒置的病人，有血漿擴張劑存在。新生兒臍帶內(nèi)血內(nèi)的華通氏膠亦能引起緡錢狀形成,二）冷型自體抗體,血清內(nèi)可能有未知的自體抗體，與反定型中所用的A或B型紅細胞抗原起反應(yīng)?？笽是血清分型法最常見碰到的自體抗體?？笽通常凝集所有給血者的紅細胞，包括病人自己的及反定型中所用的紅細胞。一般由抗I所引起的凝集反應(yīng)常比抗A及抗-B所引起者為弱。臍帶血球顯示的I抗原量較少，通常不被凝集。 抗抗體,三）未知的種屬凝

16、集素,血清內(nèi)未知的種屬凝集素，可在室溫與試劑紅細胞上的對應(yīng)抗原起反應(yīng)。此種范例包括A2型及A2B型人體能產(chǎn)生“天然發(fā)生的”抗-A抗體，在A2或A2B型人體血清內(nèi)的抗-A抗體可與A型紅細胞發(fā)生強的凝集反應(yīng),四）未知的同種抗體,在一個人的血清內(nèi)，除了ABO種屬凝集素以外，未知的種屬抗體可引起反定型的矛盾。在血清內(nèi)存在的其他未知抗體，可能與試劑紅細胞發(fā)生反應(yīng)。如在這種情況下普檢同種抗體的試驗與O型紅細胞的反應(yīng)為陰性，則反定型應(yīng)反復(fù)的與其他A1及B型紅血球作試驗。如此抗體與極罕見的抗原起反應(yīng)，則隨機選擇的A1及B 型紅細胞，亦可預(yù)想到缺少該抗原,一個典型未知的抗體的反應(yīng)范例（1,1）正定型與抗A及抗A

17、B發(fā)生（+）凝集及反定型與BC發(fā)生（4+）凝集，代表一個典型的A型反應(yīng)。但與AC細胞有1+反應(yīng)， 暗示有額外減弱的反應(yīng)抗體。 （2）補充試驗：血清各與三個的A1，A2及O型紅細胞作試驗。所有A1型紅細胞都有凝集反應(yīng)，但A2或O型紅細胞反應(yīng)為陰性,3）結(jié)論：病人為A2表現(xiàn)型，血清中有抗A1抗體,一個典型未知的抗體的反應(yīng)范例（2,1）依據(jù)（4+）的凝集反應(yīng)，暗示為A型；但與O型紅細胞發(fā)生反應(yīng)，預(yù)示有額外的抗體存在。 （2）補充的試驗：病人紅細胞與抗A反應(yīng)。病人血清與額外的O、A2、A1型紅細胞及O型臍帶紅細胞作試驗。證明所有O型與A2型紅細胞有凝集反應(yīng)。額外的A1型紅細胞為陰性反應(yīng) （3）結(jié)論：病

18、人為A型表現(xiàn)型，具有抗-I H抗體,一個典型未知抗體的反應(yīng)范例（3,1）自身對照試驗（病人的血清+病人的紅細胞）為陽性反應(yīng)， 示初步認為血清有問題。 （2）補體的實驗室試驗：實行冷自身抗體吸收法，用吸收的血清與抗A，B及O型紅細胞作試驗，吸收的血清與這些試劑紅細胞未察見凝集反應(yīng)。 （3）結(jié)論：病人為AB型表現(xiàn)型，具有自身抗I抗體,在每逢ABO分型問題發(fā)生時，有八個重要的自我答問方式，有助于矛盾問題的解決,第一，受檢的紅細胞是洗滌后懸浮于生理鹽水的嗎 第二，所用的檢驗技術(shù)為最敏感的試管方法嗎？ 第三，已知病人年齡小于1歲或大于60歲嗎？ 第四，已知病人的丙球蛋白濃度減低嗎？ 第五，病人血清與O型普檢紅細胞發(fā)生的反應(yīng)和反定型所用的試劑紅細胞一樣嗎？ 第六，病人的診斷是白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸或直腸癌瘤嗎？ 第七，血液標本是