幾種常見的魚類致病菌及其培養(yǎng)鑒定方法

1、愛德華氏菌屬1. 遲緩愛德華氏菌特征：遲緩愛德華氏菌為革蘭氏陰性病原菌， 短桿菌，大小多在（0.51） X（ 1-3） g，無莢膜，亦不形成芽孢，為周毛菌，能運動。生長溫度范圍為15-42 C,最適為37C, 適宜pH值范圍為5.5-9.0。但以pH 7.2較好，耐食鹽濃度為 0-4% ,培養(yǎng)：該菌在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上25 C培養(yǎng)24,能形成圓形隆起灰白色濕潤并帶有光澤呈半透明狀的菌落直徑約為0.5-1mm ,在含5%-10%血液的普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板常用綿羊或家兔脫纖血液上的菌落與在普通營養(yǎng)瓊脂上的基本一致，但稍大些。在麥康凱瓊脂、SS瓊脂、膽鹽硫化氫乳糖瓊脂（DHL ）、木糖-賴氨酸-

2、去氧膽酸鹽（XLD ）瓊脂等腸道菌選擇性培養(yǎng)基上可形成較小菌落因其產(chǎn)生硫化氫能使菌落中央為黑色。在普通營養(yǎng)肉湯中呈均勻混濁生長。危害：德華氏菌感染癥，鱉發(fā)生白板病，鰻鱺紅頭病，鱔魚的紅病和渠道鮎魚的氣腫性腐爛病等感染：感染可發(fā)生于全年缺乏明顯的季節(jié)性，在水溫20C以上時均可發(fā)生，但一般認為水溫在15C時，就能發(fā)生高峰期多出現(xiàn)在水溫25-30 C時，一般于春季和夏季易發(fā)流行。人工養(yǎng)殖的淡水魚和海水魚中均發(fā)現(xiàn)有該菌感染的發(fā)生如鯽、金魚、虹鱒、大鱗大馬哈魚、 黑鱸、真鯛、麗鯛、黑鯛、鯔魚、川鰈、牙鲆等均可被感染發(fā)病，實驗性可感染鯉魚和青蛙。分離培養(yǎng)：對于遲鈍愛德華氏菌的分離培養(yǎng)，常見的臨床標本材料是

3、表皮肌肉壞死組織及內(nèi)臟器官組織等。通常將被檢材料接種于普通營養(yǎng)瓊脂血液瓊脂及某種腸道菌選擇性培養(yǎng) 基（如SS瓊脂、DHL瓊脂、XLD瓊脂、麥康凱瓊脂等）平板，置28C或37C恒溫培養(yǎng)18-24h。形態(tài)特征檢查：包括對標本材料中及純培養(yǎng)物的愛德華氏菌形態(tài)檢查，常采用革蘭氏染色鏡檢，按該菌相應形態(tài)特征予以判定。2. 鲇魚愛德華氏菌特征：鮎魚愛德華氏菌屬于愛德華氏菌屬，在該屬細菌中最難培養(yǎng)。菌體大小約1umx（2-3） um,為小直桿菌，革蘭氏染色陰性，無莢膜，不形成芽孢，兼性厭氧，25C時有動力，在37 C時無動力。菌落大小為 0.5mm左右，圓形光滑、邊緣整齊、稍隆起。由鮎魚 愛德華氏菌所引起的

4、魚類愛德華氏菌病主要是鲇魚腸道敗血癥。該病有季節(jié)性，常發(fā)生于春季和秋季，鳙等可被感染發(fā)病， 病魚在咽部及口腔附近出現(xiàn)皮膚出血或淤血、鰓色變淡、突 眼癥狀，解剖可見腎臟和脾臟腫脹，肝臟出血且有壞死灶，腹膜內(nèi)有血性腹水。培養(yǎng)：鲇魚愛德華氏菌除為該屬細菌中難養(yǎng)的。在培養(yǎng)基平板上生長較緩慢常需培養(yǎng)約48h才能形成直徑1-2mm圓形光滑邊緣整齊稍隆起的無色小菌落；二是盡管愛德華氏菌的 生化特性都是以37 C培養(yǎng)為明顯，但鲇魚愛德華氏菌則更喜歡較低的溫度其最適一般為25-30 C,在37 C時生長緩慢或完全不能生長，尤其是運動力只有在約 28 C時才能表現(xiàn)出來且是微弱的?；【鷮偬卣鳎汉恿骰【鷮儆诨【鷮伲?/p>

5、體大小為（0.5-0.8）m X（ 1.8-2.5 ）m ，為革蘭氏陰性、直或弧狀短桿菌，無芽孢，無莢膜，以極生單鞭毛（有鞘膜）運動，單個或成雙 相連（有時34個排列成短鏈），亦可呈多形性，細菌運動呈活潑的穿梭狀。該菌在弧菌選擇性培養(yǎng)基上生長良好，菌落呈黃色、黏稠、光滑、圓形、邊緣整齊，直徑1-1.5mm。在血瓊脂平板上菌落特點基本同上，但菌落周圍呈現(xiàn)溶血 河流弧菌是淡水養(yǎng)殖魚類（鰱、鳙等）細菌性敗血癥的一種致病菌分離培養(yǎng)：取被檢牙鲆病變組織材料無菌操作接種于含7%兔血的普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板，置28C培養(yǎng)24-48h做細菌分離，對所分離的細菌進行菌落數(shù)量、分布及同一性等方 面的檢查后，從每尾

6、魚的分離菌落各擇一定數(shù)量分別移接于普通營養(yǎng)瓊脂斜面（28C培養(yǎng)24h）做純培養(yǎng)后，置 4C冰箱保存供鑒定用。菌落在普通營養(yǎng)瓊脂上的形狀為圓形光滑、邊緣整齊、稍隆起、透明至半透明、呈淺灰色的菌落，培養(yǎng)24h后檢查，直徑多在0.3mm左右；培養(yǎng)48h后檢查直徑多在1.2mm左右， 生長中度。菌落在血液營養(yǎng)瓊脂上的形狀為圓形光滑、邊緣整齊、稍隆起、呈乳白色，不溶 于血、濕潤閃光的菌落，培養(yǎng)24h后檢查，直徑多在 0.5mm左右；培養(yǎng)48h后檢查直徑多在1.5mm左右，生長中度。（這株菌在許多培養(yǎng)基上均可生長，不過形態(tài)不一樣）。在37C下不生長，在 28C下生長。氣單胞菌屬1. 嗜水氣單胞菌嗜水氣單胞

7、菌屬于氣單胞菌屬，革蘭氏染色陰性；兼性厭氧，具有呼吸和發(fā)酵代謝類型；能利用葡萄糖和其它糖類產(chǎn)酸，常產(chǎn)氣無芽孢，不產(chǎn)生莢膜，散在或成雙排列，端生單鞭毛（有運動性）的短桿菌，兩端鈍圓，大小多在（0.6-0.7 ）m X 1.4 m 。菌落特征為圓形光滑、邊緣整齊、較隆起、不透明的淺灰黃白色。嗜水氣單胞菌寄主廣泛，可引起大宗淡水魚等發(fā)生相應的細菌性敗血癥，危害魚的種類最多、 地區(qū)最廣、損失最大。2. 溫和氣單胞菌溫和氣單胞菌屬氣單胞菌科、氣單胞菌屬，革蘭氏陰性，桿菌(個別菌體稍彎曲)，散在或成雙排列、兩端鈍圓、無芽孢，大小多在(0.5-1.0 )m X( 1.0-2.0 )m危害的對象主要是鯽、鰱、

8、鳙、鯉、草魚、青魚等。從夏花魚種到成魚均可感染，以2齡成魚為主，引起 細菌性敗血癥。流行時間為311月份，高峰期常為 59月，10月份后病情 有所緩和。該病是淡水養(yǎng)殖中危害最大，流行范圍最大的一種急性傳染病， 我國20多個省、 市、自治區(qū)均有發(fā)生。 發(fā)病嚴重的養(yǎng)魚場發(fā)病率高達 100% ,重病魚池死亡率高達 95%以上。3. 斑點氣單胞菌斑點氣單胞菌屬于氣單胞菌屬，為兩端鈍圓，多成對、少數(shù)單個排列，有動力，極端單鞭毛，無芽孢，大小為(0.4-0.5)m X( 1.0-1.3 )m 的革蘭氏陰性菌。4. 腸型點狀氣單胞菌腸型點狀氣單胞菌屬氣單胞菌屬，為嗜溫的、有運動性的氣單胞菌群，為革蘭氏陰性短

9、小桿菌，單端鞭毛，具有運動性，為條件性致病菌?？梢鸩蒴~、青魚 出血性敗血癥。5. 熒光假單胞菌熒光假單胞菌是假單胞菌屬中的常見致病種，為直或輕微彎曲的桿菌，但不是螺旋狀的， 大小在(0.5-1.0)m X( 1.5-5.0)m ，菌體一般較短且細，無菌柄也無鞘，革蘭氏染色 陰性，靠幾根極生鞭毛運動?？梢鸪嗥げ　€鰓病、白云病。6. 水型點狀假單胞菌水型點狀假單胞菌屬于假單胞菌屬，短桿狀，近圓形，單個排列，有動力，無芽孢，革蘭氏 陰性。瓊脂菌落呈圓形， 24h培養(yǎng)后中等大小，略黃而稍灰白，迎光透視略呈培養(yǎng)基色。該菌可引起豎鱗病，為水中常在菌，是條件致病菌，當水質(zhì)污濁、魚體受傷時經(jīng)皮膚感染。

10、主要危害鯉、鯽、草魚、鰱等，從較大的魚種至親魚均可受害。主要流行于靜水養(yǎng)魚池和高 密度養(yǎng)殖條件下，流水養(yǎng)魚池中較少發(fā)生。本病主要發(fā)生在春季，發(fā)生時魚體鱗片豎起。分離培養(yǎng)：病原菌分離無菌采取發(fā)病細鱗魚體表潰爛處、背鰭基部、肝臟、脾臟、腎臟等組織分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂和TSA (胰蛋白胨大豆瓊脂)平板上，28C培養(yǎng)24h,挑取單個優(yōu)勢菌落再次劃線，將獲得的純培養(yǎng)菌株 4 C保存?zhèn)溆?。鑒定方法：氣單胞菌的鑒定方法有免疫學鑒定法、生化鑒定法和分子鑒定法。細菌的分離培養(yǎng)28 C培養(yǎng)24h后，在普通營養(yǎng)瓊脂上長出圓形光滑、邊緣整齊、隆起、不透明、灰 白色中等大小的菌落。在麥康凱瓊脂上僅劃線

11、起始部見微弱生長、薄層的菌苔及無色小菌落。在TSA上菌落圓形光滑、邊緣整齊、淺灰白色，未見水溶性褐色色素產(chǎn)生。革蘭氏染色可 見大量的革蘭氏陰性菌，細菌形態(tài)呈球桿菌，成雙、短鏈或成叢排列，無鞭毛，無莢膜。柱狀噬纖維細菌特征：柱狀噬纖維菌為噬纖維菌屬細菌中常見的致病種，為中等大小但偏長的桿菌， 菌體長為2-12um，寬為0.4um左右，兩端不尖，無莢膜及芽孢，適宜生存溫度 為25-30C。 在噬纖維菌培養(yǎng)基中能良好生長可形成黃色菌落，在液體培養(yǎng)基中靜止培養(yǎng)時可形成黃色菌膜、若震蕩培養(yǎng)則呈均勻混濁生長，菌體一般培養(yǎng)到第4天后開始老化，最高耐 NaCI濃度為5g/L，在海水培養(yǎng)基中不能生長。在pH6.

12、5-7.5生長良好，危害：該菌引起的爛鰓病在草魚、青魚、鳙、鯉等均可發(fā)生，但主要是危害草魚。全國各地均有該病發(fā)生在水溫15 C以下一般少見，約20 C時開始流行，流行的最適水溫為28-35 C。柱狀噬纖維菌為我國 草魚爛鰓病、白皮病、白頭白嘴病等的病原菌。水中病原菌的濃度越大，魚的密度越高，魚的抵抗力越小，水質(zhì)越差，則越易暴發(fā)流行。 本病常和傳染性腸炎、出血病、赤皮病并發(fā)。一般流行于410月，尤以夏季流行為多。白皮病為鰱、鳙的主要病害之一。此病主要發(fā)生在飼養(yǎng)2030天的鰱、鳙魚苗及夏花階段。?？尚纬杉毙粤餍胁。?齡及2齡以上的成魚偶然可以發(fā)病。病程較短，病勢兇猛，死亡率很高，發(fā)病后 23天就會造成大批死亡。分離培養(yǎng)：平板劃線分離。取病魚鰓絲小塊，置于滴有無菌水的載玻片的邊緣約I0 min ,用接種環(huán)蘸水，在胰胨瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線。采用平板劃線方法，不重復的劃線，盡量產(chǎn) 生單個分散的菌落，在恒溫培養(yǎng)箱中