巴比妥類藥物的分析課件

1、第 五 章巴比妥類藥物的分析,基本內(nèi)容,概述 理化性質(zhì) 鑒別試驗 特殊雜質(zhì)檢查 含量測定,巴比妥類藥物是一類臨床常用的催眠鎮(zhèn)靜藥。由于這類藥物應(yīng)用廣泛，容易因不合理使用而引起中毒。 本章重點介紹巴比妥類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法間的關(guān)系，介紹鑒別、檢查和含量測定的原理與方法,一、巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)通式,丙二?；?脲基,5,5-取代的巴比妥類藥物,5,二、理化性質(zhì),一）物理性質(zhì),1. 白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉未，具有固定的熔點,2. 游離巴比妥類藥物微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機(jī)溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而不溶于有機(jī)溶劑,二）化學(xué)性質(zhì),巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中都有1,3-二酰亞胺基團(tuán)，能發(fā)生酮式和烯

2、醇式的互變異構(gòu)，在水溶液中可以發(fā)生二級電離。因此，本類藥物的水溶液顯弱酸性（pKa為7.3-8.4），可與強(qiáng)堿形成水溶性的鹽類,1. 弱酸性,與強(qiáng)堿的成鹽反應(yīng),2. 水解反應(yīng),1） 與銀鹽的反應(yīng),3、與重金屬離子的反應(yīng),2）與銅鹽的反應(yīng),有色配位化合物,3）與鈷鹽的反應(yīng),無水; 所用試劑均應(yīng)不含水分,反應(yīng)條件,堿性：異丙胺,4）與汞鹽的反應(yīng),4、 與香草醛（vanillin）的反應(yīng),5、 紫外吸收光譜特征,H2SO4溶液(0.05mol/L) pH9.9緩沖溶液 NaOH溶液(0.1mol/L) (pH 13,巴比妥類藥物的紫外吸收光譜,A,nm,硫噴妥的紫外吸收光譜 HCl 溶液 (0.1m

3、ol/L) NaOH 溶液 (0.1mol/L,巴比妥類藥物 紫外吸收光譜特征和其電離的程度有關(guān) 5,5-取代的巴比妥類藥物 在pH=2的酸性溶液中，因不電離，幾乎無明顯的紫外吸收。 在pH=10的堿性溶液中，發(fā)生一級電離于240 nm處有最大吸收。 在pH=13的強(qiáng)堿性溶液中，發(fā)生二級電離，最大吸收紅移至255 nm處,硫代巴比妥類藥物 在酸性或堿性溶液中，均有較明顯的紫外吸收,7、顯微結(jié)晶特征,藥物本身的晶形 巴比妥：長方形； 苯巴比妥：球形花瓣狀 反應(yīng)產(chǎn)物的晶形 巴比妥 銅吡啶試液 十字形紫色結(jié)晶 苯巴比妥 銅吡啶試液 細(xì)小不規(guī)則或似菱形的淺紫色結(jié)晶,6、薄層色譜行為特征 對照品對照鑒別

4、,概述 理化性質(zhì) 鑒別試驗 特殊雜質(zhì)檢查 含量測定,1） 與銀鹽的反應(yīng)、（二）銅鹽反應(yīng),二、鑒別試驗,一）、丙二酰脲類反應(yīng),二）熔點測定,巴比妥類的鈉鹽酸 游離巴比妥類藥物 過濾 洗滌 干燥 測熔點,苯巴比妥鈉的鑒別,取本品約0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍過量稀鹽酸，即析出白色結(jié)晶性沉淀，濾過；沉淀用水洗凈，在105干燥后，依法測定，熔點為174-178,司可巴比妥可使溴試液或碘試液褪色,不飽和烴取代基的反應(yīng),與溴試液或碘試液的反應(yīng),與KMnO4的反應(yīng),可還原紫色的KMnO4為棕色的MnO2,三） 特殊取代基及元素的反應(yīng),與NaNO2H2SO4反應(yīng),與甲醛H2SO4反應(yīng),硝化反應(yīng),芳香取

5、代基的反應(yīng),硫元素的反應(yīng),四）鈉鹽的鑒別反應(yīng) 1. 焰色反應(yīng) 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色,2. 與醋酸氧鈾鋅反應(yīng) 取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色,五）紅外分光光度法,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,一、苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查 酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或堿性物質(zhì) 二、司可巴比妥鈉的特殊雜質(zhì)檢查 溶液的澄清度 中性或堿性物質(zhì),概述 理化性質(zhì) 鑒別試驗 特殊雜質(zhì)檢查 含量測定,終點指示：電位法指示（Ag電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極） 自身指示,一 銀量法,1.原理：反應(yīng)摩爾比（11,溶劑系統(tǒng)：甲醇+3%無水碳酸鈉,第四節(jié) 含量測定,苯巴比

6、妥： 取本品約0.2 g，精密稱定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的3無水碳酸鈉溶液15 m1，照電位滴定法，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。每1 ml 硝酸銀滴定液（0.1 mo1/L）相當(dāng)于23.22 mg的C12H12N2O3,2. 測定方法與計算,原料藥：直接滴定法,3. 注意事項,1）無水碳酸鈉應(yīng)新鮮配制 （2）AgNO3滴定液應(yīng)新鮮配制 （3）銀電極使用前應(yīng)進(jìn)行處理,凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法進(jìn)行測定。如司可巴比妥鈉及其膠囊的測定,二 溴量法,1. 原理,I22Na2S2O32NaINa2S4O6,KBrO35K

7、Br6HCl3Br26KCl3H2O,Br22KI2KBrI2,司可巴比妥鈉： 取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3,2. 測定方法與計算,原料藥：剩余滴定法,3. 注意事項,1）操作中要防止溴和

8、碘的逸失 （2）平行條件進(jìn)行空白試驗可減少溴和碘逸失帶來的誤差,1. 在水醇混合溶劑中的滴定法 弱酸性 pKa7.3-8.4,異戊巴比妥,水醇,溶解,麝香草酚酞,NaOH,淡藍(lán)色,三 酸堿滴定法,此法終點判斷較困難,取本品約0.5 g，精密稱定，加乙醇20 m1溶解后，加麝香草酚酞指示液6滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1 mo1/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正，即得。每l ml氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于22.63 mg的C11H18N2O3,異戊巴比妥的含量測定,溶 劑：二甲基甲酰胺 滴定劑：甲醇鈉（鉀） 指示劑：麝香草酚藍(lán),3. 非水溶液滴定法,2. 在膠束水溶液中進(jìn)行的滴

9、定法,溶 劑：表面活性劑-溴化十六烷基三甲基芐胺水溶液 滴定劑：氫氧化鈉滴定液 指示劑：麝香草酚肽,四 紫外分光光度法,一）直接紫外分光光度法,本法是將樣品溶解后，根據(jù)溶液的pH值選用其相應(yīng)的max處進(jìn)行直接測定,1. 吸收系數(shù)法,2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法,單組分定量方法,3. 對照法,取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波長處分

10、別測定A，根據(jù)每支的平均裝量計算。每1mg硫噴妥相當(dāng)于1.091mg的C11H17N2NaO2S,如注射用硫噴妥鈉的含量測定,三）多組分混合物不經(jīng)分離的定量方法 計算分光光度法,雙波長分光光度法； 差示分光光度法； 導(dǎo)數(shù)光譜法,二）經(jīng)提取分離后的紫外分光光度法,干擾物質(zhì)去除,取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變?nèi)芤旱膒H，或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當(dāng)波長處，測其吸收度的差值（A值,差示分光光度法（A法,1. 測定方法,2. 必要條件,1）供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中

11、以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異。 （2）干擾物的吸收不受測定時化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變,供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以x、y 表示，干擾物用 z 表示,3. 定量依據(jù),即，吸收度差值（A）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，即干擾組分的干擾被消除,可用對照法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點，又無需事先分離，并能消除干擾,4. 特點,5. 應(yīng)用,1）于波長240 nm處，測定pH10和pH2兩種溶液的吸收度之差,2）于波長260 nm處，測定pH10和強(qiáng)堿溶液的吸收度之差,HPLC法同時測定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的濃度,

12、色譜條件：色譜柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 4.6mm , 5m) , 流動相為甲醇水乙腈(454510 ） 流速1.0m l/m in, 柱溫30, 檢測波長254nm。 血樣處理：取內(nèi)標(biāo)溶液100L，60水浴氮氣吹干，加200L待測血清, 加提取液（氯仿：乙酸乙醋=50：50）2ml, 旋渦混合5min, 以4000轉(zhuǎn)/分離心10min, 用吸管吸取上層水層, 棄去。用移液管移取有機(jī)相置帶蓋尖底塑料離心管中, 于60水浴中氮氣吹干, 用流動相200L溶解, 取20L進(jìn)樣測定,五 高效液相色譜,方法驗證：標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性、精密度（RSD 3%) 、方法回收率、提取回收率（大于87%）、穩(wěn)定性等均符合中國藥典的要求,六 電泳法 七 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用,我們都知道氣相色譜由于它具有高靈敏度、高檢測性能所以在石油、化工、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、生物和環(huán)保等方面得到廣泛應(yīng)用。氣相色譜的核心部分就是色譜柱，因此在選擇色譜柱時就要根據(jù)我們的實際檢測要求而定。一個好的色譜柱它具有如下的特性：1.要有高的分離度2.具有足夠的塔板理論數(shù)影響這兩方面就的因數(shù)有：1.色譜柱長度、孔徑大小2.載體顆粒的大小3.固定相中固定液