Sourthernblot和Northernblot原理(最新整理)

1、sourthern blot 和 northern blot 原理（一）southern blot原理：將待檢測(cè)的 dna 分子用/不用限制性內(nèi)切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定 后再與同位素或其它標(biāo)記物標(biāo)記的 dna 或 rna 探針進(jìn)行反應(yīng)。如果待檢物中含有與探針互補(bǔ)的序列，則二者通過堿基互補(bǔ)的原理進(jìn)行結(jié)合，游離探針洗滌后用自 顯影或其它合適的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，從而顯示出待檢的片段及其相對(duì)大小。用途：檢測(cè)樣品中的 dna 及其含量，了解基因的狀態(tài), 如是否有點(diǎn)突變、擴(kuò)增重排等。dna = 瓊脂糖電泳 = 印跡轉(zhuǎn)移 = 預(yù)

2、雜交 = 雜交（變性探針） = 洗膜 =放射自顯影或顯色（二）northern blot原理：在變性條件下將待檢的 rna 樣品進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同southern blot 相同的原理進(jìn)行轉(zhuǎn)膜和用探針進(jìn)行雜交檢測(cè)。用途：檢測(cè)樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mrna）及其含量。mrna 提取 = 甲醛變性電泳 = 印跡轉(zhuǎn)移 = 預(yù)雜交 = 雜交（變性探針） =洗膜 = 放射自顯影或化學(xué)發(fā)光（三）二者異同southern blot 是分析 dna 的雜交技術(shù)，northern blot 是分析 rna 的，而western blot 是分析蛋白質(zhì)的southern 和 northerin

3、 原理基本相同，都是利用 dna 或 rna 的復(fù)性過程，但過程上也有區(qū)別，主要是southern 是先電泳后變性，而 northern 是先變性后電泳；southern 是堿變性，而 northern 采用甲醛、乙二醛、二甲基亞砜等變性，因?yàn)椴捎脡A變性會(huì)導(dǎo)致 rna 水解（四）探針標(biāo)記技術(shù)1 標(biāo)記物：放射性和非放射性兩種放射性：非放射性：生物素、地高辛素、熒光素2、標(biāo)記方法（1） 切口平移法（2） 隨機(jī)引物法（3） 末端標(biāo)記法（4） 單鏈 dna 探針標(biāo)記（5） 寡核苷酸探針標(biāo)記法“”“”at the end, xiao bian gives you a passage. minand on

4、ce said, people who learn to learn are very happy people. in every wonderful life, learning is an eternal theme. as a professional clerical and teaching position, i understand the importance of continuous learning, life is diligent, nothing can be gained, only continuous learning can achieve better self. only by constantly learning and mastering the latest relevant knowledge, can employees from all walks of life keep up with the pace of enterprise development and innovate to meet the needs of the market. this document is also edited by my studio professionals, there m