維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測(cè)定

1、 醫(yī)學(xué)院分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)課教案首頁(yè) 授課教師姓名及職稱：一、實(shí)驗(yàn)名稱維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測(cè)定二、授課對(duì)象藥學(xué)授課形式實(shí)驗(yàn)教學(xué)三、教學(xué)目標(biāo)1掌握分光光度計(jì)的使用方法2掌握注射劑含量的測(cè)定和計(jì)算方法3熟悉測(cè)繪吸收曲線的一般方法四、教學(xué)內(nèi)容1吸收曲線的繪制方法2應(yīng)用吸光系數(shù)法測(cè)定注射劑含量及計(jì)算方法3752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用方法五、教學(xué)安排與課時(shí)分配1講解演示 40 min2學(xué)生操作 教師輔導(dǎo) 120min六、授課重點(diǎn)1吸收曲線的繪制方法2752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用方法七、注意事項(xiàng)1752型分光光度計(jì)光源的使用 2每次改變波長(zhǎng)，需重新調(diào)T為“0”3B12應(yīng)避光八、授課方

2、法教師示范講述，學(xué)生操作九、使用教材分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)自編教材十、教研室審查意見(jiàn)主任簽字新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室 年 月 日實(shí)驗(yàn) 維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握分光光度計(jì)的使用方法；2. 掌握注射劑含量的測(cè)定和計(jì)算方法；3. 熟悉測(cè)繪吸收曲線的一般方法。二、實(shí)驗(yàn)原理維生素B12是含Co的有機(jī)化合物，其注射液為粉紅色至紅色的澄明液體。要測(cè)定B12注射液的含量，可以用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，用此法進(jìn)行含量測(cè)定，必須知道B12的max，max可以通過(guò)繪制吸收曲線來(lái)得到。吸收曲線：將不同波長(zhǎng)的單色光依次通過(guò)被分析的物質(zhì)，分別測(cè)得不同波長(zhǎng)下的吸光度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱

3、坐標(biāo)所描繪的曲線。吸光度最大時(shí)對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)為max，在max處測(cè)吸光度。B12在278，361，550nm處有最大吸收，在max處測(cè)得A，根據(jù)吸光系數(shù)法可以求出注射液中B12的含量。吸光系數(shù)法：A=Ecl實(shí)驗(yàn)中要求測(cè)361nm處的A，相應(yīng)的吸光系數(shù)為207。三、儀器與試劑752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1gL-1維生素B12水溶液，維生素B12注射液(市售品)。四、實(shí)驗(yàn)步驟1752型分光光度計(jì)的使用（1）開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘。（2）用波長(zhǎng)選擇旋鈕設(shè)置所需的分析波長(zhǎng)。（3）將裝參比溶液的比色皿置于光路，打開(kāi)樣品室蓋，調(diào)節(jié)T旋鈕，使顯示器指針指在“0.00”

4、。（4）將裝參比溶液的比色皿置于光路，關(guān)閉樣品室蓋，調(diào)節(jié)A旋鈕，使顯示器指針指在“100.00”。（5) 重復(fù)操作(3)和(4)，直至儀器顯示穩(wěn)定。（6）將裝參比溶液的比色皿置于光路，關(guān)閉樣品室蓋，進(jìn)行測(cè)定，在顯示器上讀出A。（7）儀器使用完畢，關(guān)閉電源，拔下電源插頭。取出比色皿，洗凈、晾干。復(fù)原儀器，蓋上防塵罩。2吸收曲線的繪制將0.1gL-1維生素B12溶液置于1cm比色皿中，以蒸餾水為空白溶液，在不同波長(zhǎng)(340nm580nm之間，其中從350nm370nm和540560nm每間隔5nm測(cè)量一次，其余每間隔20nm測(cè)量一次吸光度)下測(cè)量相應(yīng)的吸光度。然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪出

5、吸收曲線。從吸收曲線上得到最大吸收波長(zhǎng)，從而選擇測(cè)定維生素B12的適宜波長(zhǎng)。3注射液含量測(cè)定避光操作。準(zhǔn)確吸取0.50ml維生素B12注射液于10ml容量瓶中，加水定容至刻度線。然后將溶液置于1cm比色皿中，在361nm波長(zhǎng)條件下以蒸餾水作為空白測(cè)定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系數(shù)為207計(jì)算維生素B12標(biāo)示量的百分含量。計(jì)算公式：五、注意事項(xiàng)1在每次測(cè)定前，首先應(yīng)做吸收池配套性試驗(yàn)。即將同樣厚度的4個(gè)比色皿都裝相同溶液，在所選波長(zhǎng)處測(cè)定各比色皿的透光率，其最大誤差T應(yīng)不大于0.5%。2儀器在不測(cè)定時(shí)，應(yīng)隨時(shí)打開(kāi)暗箱蓋，以保護(hù)光電管。3為使比色皿中測(cè)定溶液與原溶液的濃度一致，需用原溶液蕩洗比色皿23次。4比色皿內(nèi)所盛溶液以超過(guò)皿高的2/3為宜。過(guò)滿溶液可能溢出，使儀器受損。使用后應(yīng)立即取出比色皿，并用自來(lái)水及蒸餾水洗凈，倒立晾干。5比色皿一般用水蕩洗，如被有機(jī)物污染，宜用HCl乙醇(1+2)浸泡片刻，再用水沖洗，不能用堿液或強(qiáng)氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免損傷比色皿。6350