高考生物一輪復(fù)習(xí)生物技術(shù)實踐課時分層集訓(xùn)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

1、課時分層集訓(xùn)(三十七)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用A組基礎(chǔ)達標(biāo)1(2018銀川一中高三模擬)金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性，在血平板(培養(yǎng)基中添加適量血液)上生長時，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色。下面是某研究小組測定自來水中金黃色葡萄球菌濃度的實驗操作。請回答下列問題：(1)金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基為7.5% NaCl牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，根據(jù)實驗?zāi)康膽?yīng)選擇_(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中加入7.5% NaCl的作用是_。(2)在制作血平板時需等平板冷卻后，方可加入血液，以防止_。血平板在使用前，需置于恒溫培養(yǎng)箱中適宜溫度下培養(yǎng)一段時間的目的是_。(3)取10 mL自來水樣，加入_稀釋成101的

2、自來水樣，依次操作，制作稀釋102、103、104的自來水樣。(4)將0.1 mL 101104的四個稀釋樣液，分別接種到4組(每組3個)血平板上的方法是_。在血平板上，金黃色葡萄球菌菌落的周圍會出現(xiàn)_。若在103組的3個血平板上，金黃色葡萄球菌菌落數(shù)分別為42、38和37，則每升自來水中的活菌數(shù)約為_個。解析(1)金黃色葡萄球菌在血平板(培養(yǎng)基中添加適量血液)上生長時，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色，據(jù)此原理可對金黃色葡萄球菌進行篩選，因此應(yīng)選擇固體培養(yǎng)基。金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性，用7.5% NaCl牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)金黃色葡萄球菌時，培養(yǎng)基中加入的7.5% NaCl，不影響金黃

3、色葡萄球菌的生長，但同時可抑制其他菌的生長，因此利于金黃色葡萄球菌的篩選。(2)高溫會破壞血細(xì)胞，因此為了防止高溫破壞血細(xì)胞，在制作血平板時需等平板冷卻后，方可加入血液。血平板在使用前，需置于恒溫培養(yǎng)箱中適宜溫度下培養(yǎng)一段時間的目的是：檢測血平板是否符合無菌要求。(3)取10 mL自來水樣，加入90 mL無菌水稀釋成101的自來水樣，依次操作，制作稀釋102、103、104的自來水樣。(4)將稀釋的樣液接種到血平板上進行微生物的純化培養(yǎng)，所采用的接種方法是涂布(平板)法。金黃色葡萄球菌可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色，因此在血平板上，金黃色葡萄球菌菌落的周圍會出現(xiàn)透明圈(溶血圈)。依題意：血平

4、板上生長的平均菌落數(shù)(423837)339個，則1 mL自來水中的活菌數(shù)約為(CV)M(390.1)10003.9105個，每升自來水中的活菌數(shù)為3.9105103個3.9108個。答案(1)固體利于金黃色葡萄球菌的篩選(2)高溫破壞血細(xì)胞檢測血平板是否符合無菌要求(3)90 mL無菌水(4)涂布(平板)法透明圈(溶血圈)3.91082苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題： 【導(dǎo)學(xué)號：67110091】(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源

5、的有_。(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_，以達到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步_，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_。(3)如圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_(填圖中序號)區(qū)域更易獲得單菌落。(4)采用比色測定法(使用苯酚顯色劑)檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進行顯色反應(yīng)，下表中15號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_。管號123456苯酚濃度(mg/L)1如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_(填序號：51020)倍后，再進行比色。解析(1)酚降解

6、菌富集培養(yǎng)基中的蛋白胨和苯酚為酚降解菌生長提供碳源。(2)轉(zhuǎn)接的目的之一是富集降解苯酚能力強的酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增多，培養(yǎng)基中的苯酚含量應(yīng)逐漸增加。若平板中菌落過于密集，則需進一步稀釋，降低菌體密度后再涂布培養(yǎng)，以便于菌落分離與計數(shù)。制備平板培養(yǎng)基時，需添加瓊脂等凝固劑。(3)連續(xù)劃線時，在劃線的末端菌體密度最低，即在劃線的末端最易獲得單菌落。(4)1號比色管應(yīng)為空白對照組，由6號比色管中苯酚濃度知，15號比色管苯酚濃度應(yīng)為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后殘留的苯酚濃度約為5021%10.5(mg/L)

7、，則需對殘留液進行20倍稀釋后10.5200.525(mg/L)，才可以進行比色。答案(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.83(2018湖南郴州第四次質(zhì)檢)分解尿素的微生物廣泛存在于農(nóng)田等土壤中，某生物實驗小組嘗試對分解尿素的微生物進行分離與計數(shù)。請回答下列問題：(1)分解尿素的微生物含有的酶是_；配制培養(yǎng)基時應(yīng)以_作為唯一氮源。(2)培養(yǎng)基中添加_作為指示劑，培養(yǎng)后，培養(yǎng)基pH會_(填“升高”或“降低”)，可使指示劑變紅色。(3)對尿素溶液進行滅菌的最適方法是_。(4)該小組在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是_

8、；然后將1 mL樣液稀釋10 000倍，在3個平板上用涂布法分別涂布0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板的菌落數(shù)分別為39、42和45。據(jù)此可得出每毫升樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)為_個。解析(1)分解尿素的微生物含有的酶是脲酶；配制培養(yǎng)基時應(yīng)以尿素作為唯一氮源。(2)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶分解尿素可產(chǎn)生氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，進而使酚紅指示劑變紅。(3)對尿素溶液進行滅菌的最適方法是過濾法。(4)在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時間，其目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。每毫升樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)(CV)M(394245)30.110 000

9、4.2106(個)。答案(1)脲酶尿素(2)酚紅升高(3)過濾法(4)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格4.2106B組能力提升4(2017湖北省高三調(diào)研)欲從腐乳中分離篩選出產(chǎn)蛋白酶活力高的毛霉菌株，設(shè)計了如下實驗流程：回答下列問題：(1)毛霉屬于_核生物。在腐乳制作中，主要利用毛霉等微生物產(chǎn)生的_酶將豆腐中的蛋白質(zhì)和脂肪分解為小分子物質(zhì)。(2)步驟進行涂布前，需將孢子懸浮液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋的目的是_。若進行10倍稀釋，一般吸取1 mL懸浮液注入_中，混勻。(3)孟加拉紅培養(yǎng)基常用于分離霉菌及酵母菌，在孟加拉紅培養(yǎng)基中加入氯霉素可以抑制細(xì)菌的生長。從功能上看，孟加拉紅培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(

10、4)毛霉產(chǎn)生的酶能將酪蛋白分解而產(chǎn)生透明圈，在酪蛋白培養(yǎng)基中篩選到三個單菌落甲、乙、丙，其菌落直徑分別為3.2 cm、2.8 cm、2.9 cm，其菌落與透明圈一起的直徑分別為3.7 cm、3.5 cm、3.3 cm。應(yīng)選擇菌落_作為產(chǎn)蛋白酶活力高的毛霉候選菌。解析(1)毛霉屬于真核生物。在腐乳制作中，主要利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶將豆腐中的蛋白質(zhì)和脂肪分解為小分子物質(zhì)。(2)將孢子懸浮液進行梯度稀釋的目的是增加懸浮液的稀釋度，涂布培養(yǎng)能分離到單菌落。若進行10倍稀釋，一般吸取1 mL懸浮液注入9 mL無菌水中，混勻。(3)孟加拉紅培養(yǎng)基常用于分離霉菌及酵母菌，據(jù)此可知：從功能上看，

11、孟加拉紅培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(4)毛霉產(chǎn)生的酶能將酪蛋白分解而產(chǎn)生透明圈，透明圈與菌落直徑的比值反映了毛霉菌株產(chǎn)蛋白酶活力的能力，因此應(yīng)挑選透明圈與菌落直徑比值最大的菌體。依題意可知：篩選到的三個單菌落甲、乙、丙的透明圈與菌落直徑的比值最大的為乙，所以應(yīng)選擇菌落乙作為產(chǎn)蛋白酶活力高的毛霉候選菌。答案(1)真蛋白酶和脂肪(2)增加懸浮液的稀釋度，涂布培養(yǎng)能分離到單菌落9 mL無菌水(3)選擇(4)乙5毒死蜱(C9H11C13NO3PS)是一種有機磷殺蟲劑，長期使用將導(dǎo)致土壤中農(nóng)藥殘留嚴(yán)重。某研究小組從長期施藥的韭菜溫室土壤(偏酸性)里分離出能降解毒死蜱的木霉，并對其降解特性進行初步研究。請回答

12、：(1)用于分離木霉菌種的培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。配制此培養(yǎng)基時，應(yīng)加入_作為唯一碳源。接種前，將培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適當(dāng)?shù)臅r間，觀察培養(yǎng)基_，以確定培養(yǎng)基是否被污染。(2)純化木霉時，統(tǒng)計出0.2 mL的稀釋液在稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為40個，則每mL樣液中的菌落數(shù)為_個。用此法測定木霉數(shù)量，實際活菌數(shù)量要比統(tǒng)計的菌落數(shù)量_，原因是_。(3)探究pH對木霉降解毒死蜱活性的影響研究小組向不同pH的培養(yǎng)基中分別加入100 mg/L毒死蜱，5天后檢測毒死蜱的殘留量(圖1)。由圖可推知：在偏酸性的土壤中，_。研究小組向不同pH的培養(yǎng)基中分別加入100 mg/L毒死蜱，再分別接種1 mL木霉懸液，混合均勻，5天后檢測毒死蜱的殘留量(圖2)。在此韭菜溫室土壤中，若要提高木霉對毒死蜱的降解活性，可對土壤作何處理？_。解析(1)要分離出能降解毒死蜱的木霉，需要以毒死蜱作為唯一碳源的培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基上只有能降解毒死蜱的木霉能生存，其他微生物都不能生存，因此該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。接種前，將培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適當(dāng)?shù)臅r間，觀察培養(yǎng)基是否產(chǎn)生菌落，以確定培養(yǎng)基是否被污染。(2)純化木霉時，統(tǒng)計出0.2 mL的稀釋液在稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為40個，則每mL樣液中的菌落數(shù)為400.21052107個。用此法測定木霉