肉毒梭菌致病機理

1、4.2.7 肉毒梭菌,本節(jié)主要內(nèi)容：,肉毒梭菌的主要特征,肉毒梭菌致病機理,肉毒梭菌的檢驗,一、生物學特性：,1.形態(tài)及染色,肉毒梭菌屬于厭氧性梭狀芽胞桿菌屬，革蘭氏染色陽性(老齡菌是陰性），約為41m的大桿菌， 多單在，偶見成雙或短鏈，兩側(cè)平行，兩端鈍園，直桿狀或稍彎曲，芽胞為卵圓形，大于菌體寬度，位于次極端，使菌體呈匙形或網(wǎng)球拍狀，偶有位于中央，常見很多游離芽胞。 有48根周生鞭毛，運動遲緩，無莢膜。,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,1.最嚴格的厭氧菌 2.

2、生長最適溫度：28 37 ：pH為6.87.6，產(chǎn)毒的最適pH為7.8 8.2。 3.產(chǎn)毒培養(yǎng)溫度：不同菌型產(chǎn)毒的最適培養(yǎng)溫度不完全相同。C、D型溫度高些為宜，35 培養(yǎng)3d即可，而E型菌低溫度長時間培養(yǎng)效果較好。 4.對營養(yǎng)要求不高 ：在普通培養(yǎng)基上都能生長。,welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience,5.在含有肉渣的液體或者半流動培養(yǎng)基中，肉毒梭菌生長旺盛且產(chǎn)生大量氣體，A、B、F三型表面渾濁，底部有粉狀和顆粒狀沉淀，并能消化肉塊，變黑有臭味；而C、D、E三型表明清亮

3、，絮片狀生長，粘貼于管壁。 6.在葡萄糖鮮血瓊脂平板上，菌落較小，扁平，顆粒狀。中央低落，邊緣不規(guī)則，有的菌落還有大的溶血環(huán)。 7.在卵黃瓊脂平板上生長，菌落及其培養(yǎng)基周圍表面覆蓋著特有的彩虹樣薄層，但G型沒有,葡萄糖鮮血瓊脂（A型）,（C型）,3生化特性,肉毒梭菌能分解葡萄糖，麥芽糖及果糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，能液化明膠，緩慢液化凝固血清，使牛乳消化，產(chǎn)生H2S，但不能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。肉毒梭菌的生化性狀很不規(guī)律，即使同型，也常見到株間的差異。,4.抵抗力,分類：,肉毒梭菌能產(chǎn)生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根據(jù)毒素的抗原特異性將其分為A、B、C （1、2） 、D、E、F、G七個型別。,抵抗力

4、：,A型毒素經(jīng)602分鐘加熱，差不多能被完全破壞，而B、E二型毒素要經(jīng)702分鐘才能被破壞；C、D二型毒素對熱的抵抗更大些；C型毒素要經(jīng)過902分鐘加熱才能完全破壞，不論如何，只要煮沸1分鐘或75加熱510分鐘，毒素都能被完全破壞。肉毒毒素對酸性反應比較穩(wěn)定，對堿性反應比較敏感。某些型的肉毒毒素在適宜條件下，毒性能被胰酶激活和加強。,二 致病機理,肉毒毒素是一種神經(jīng)麻痹毒素，主要抑制神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，引起肌肉松弛麻痹，特別是呼吸肌麻痹導致死亡。,肉毒毒素的毒性極強，是目前已知在天然毒素和合成毒劑中毒性最強的生物毒素，據(jù)稱，精制毒素1克能殺死400萬噸小白鼠，一個人的致死量大概1微克左右。,

5、三、檢驗方法,培養(yǎng)基：庖肉培養(yǎng)基、卵黃瓊脂培養(yǎng)基、明膠磷酸鹽緩沖液。,試劑：肉毒分型抗毒診斷血清、胰酶（活力1:250）、革蘭氏染色液。,實驗動物：小白鼠,檢驗程序,檢 樣,毒素檢測,增菌、產(chǎn)毒培養(yǎng) 30，5 d,報告 （一）,毒素檢測,報告（二）,分離培養(yǎng),培養(yǎng)檢查,毒素檢測,報告（三）,增菌產(chǎn)毒培養(yǎng) 30，5 d,觀察生長性狀， 染色鏡檢,觀察菌落性狀 染色鏡檢,報告(一)：檢樣中有無肉毒毒素以及有何型肉毒毒素。(如僅為了肉毒中毒診斷，即可結(jié)束檢驗) 報告(二)：對增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)物，一方面做生長特性觀察，同時檢測肉毒毒素。報告檢樣中有無肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌。（有些樣品如土壤、泥沙等基本

6、上不可能含有毒素，則應從培養(yǎng)著手） 報告(三)：欲獲純菌株，可用增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)物進行分離培養(yǎng)，對所得純菌株進行形態(tài)、培養(yǎng)特性等觀察及毒素檢測，其結(jié)果可證明所得純菌為何型肉毒梭菌。（一般情況下，沒有必要從檢樣中分離純的菌株，但研究或特殊需要例外）,肉毒毒素檢測,注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24 h內(nèi)發(fā)病、死亡。,液態(tài)或固體（明膠磷酸鹽緩沖液）樣品經(jīng)過適當處理后離心，取上清液實驗,上清液及其胰酶激活處理液,分別進行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5 mL，觀察4 d,確證試驗,毒力測定,定型試驗,選取證實含有肉毒毒素的增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)物（必要時可重復一次適宜的加熱處理）接種卵黃瓊脂平板

7、，35厭氧培養(yǎng)48 h。肉毒梭菌在卵黃瓊脂平板上生長時，菌落及周圍培養(yǎng)基表面覆蓋著特有的虹彩樣(或珍珠層樣)薄層，但G型菌無此現(xiàn)象。 根據(jù)菌落形態(tài)及菌體形態(tài)挑取可疑菌落，接種庖肉培養(yǎng)基，于30培養(yǎng)5d，進行毒素檢測及培養(yǎng)特性檢查確證試驗。,分離培養(yǎng),（1）毒素檢測：試驗方法同上。（2）培養(yǎng)特性檢查：接種卵黃瓊脂平板，分成兩份，分別在35的需氧和厭氧條件下培養(yǎng)48 h，觀察生長情況及菌落形態(tài)。肉毒梭菌只在厭氧條件下生長而在需氧條件下不生長。,肉毒梭菌的檢出（增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)試驗）,取庖肉培養(yǎng)基三支，煮沸10min15min，做如下處理：,第一支：急速冷卻，接種檢樣均質(zhì)液1 mL2 mL；,第二支：冷卻至60，接種檢樣，繼續(xù)于60 保溫10 min，急速冷卻；,第三支：接種檢樣，繼