免疫SOP：Anti-Tg作業(yè)指導(dǎo)書

1、XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01COBAS E 601/E 411抗甲狀腺球蛋白抗體(Anti-Tg )331. 分析原理采用競(jìng)爭(zhēng)法原理，整個(gè)過程18分鐘完成。 第1步：10l標(biāo)本、生物素化的TG和抗TG抗體混勻，一起進(jìn)行孵育。 第2步：加入釕（Ru）標(biāo)記的抗TG抗體和鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié) 合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光， 用光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。通

2、過檢測(cè)儀的定標(biāo)曲線得到最后檢測(cè)結(jié)果（定標(biāo)曲線通過2 定標(biāo)點(diǎn)和試劑條形碼提供的主曲線生成）。2. 標(biāo)本要求血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。血漿：肝素鈉、EDTA-K3或EDTA-K2抗凝，不要使用肝素鋰抗凝血漿。標(biāo)本在28度可穩(wěn)定3天，-20oC可穩(wěn)定1個(gè)月，標(biāo)本可凍融1次。有沉淀的標(biāo)本使用前需離心，加熱滅活的標(biāo)本不可使用，標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前應(yīng)預(yù)溫到室溫。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M： 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，12ml。粒子濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力： 470ng生物素/mg粒子。含 防腐劑。R

3、1：生物素化的抗TG抗體（灰蓋），1瓶，10ml，濃度高于0.2mg/l，磷酸緩沖液0.1mol/l，pH7.0,含防腐劑。R2：Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗TG抗體（黑蓋），1瓶，10ml。濃度高于0.52mg/l，磷酸緩沖液0.1mol/l，pH 7.0含防腐劑。校準(zhǔn)品： Cal 1 抗-Tg 定標(biāo)液1（白蓋），2瓶，1.5ml/瓶，以人血清為基質(zhì)；經(jīng)過防腐處理。Cal 2 抗-Tg 定標(biāo)液2（黑蓋），2瓶，1.5ml/瓶，以人血清為基質(zhì)；經(jīng)過防腐處理。質(zhì)控品：PC A-TG1 抗-Tg 質(zhì)控液1（淺褐色瓶蓋）:1 瓶1.5ml；抗-Tg 抗體，約80IU/mL，以人血清為基質(zhì)；經(jīng)過防腐處

4、理。PC A-TG2 抗-Tg 質(zhì)控液2（褐色瓶蓋），1 瓶1.5ml；抗-Tg 抗體，約200IU/mL，以人血清為基質(zhì)；經(jīng)過防腐處理。其他所需材料：常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備Cobas E 601/E 411Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）,貨號(hào)11298500 Cobas E 601 分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液 （ProCell M）,貨號(hào)12135019Elecsys 檢測(cè)池洗液（CleanCell M）,貨號(hào)12135027Elecsys PC/CC杯,貨號(hào)03023141Elecsys 清洗液（ProbeWash M），貨號(hào)03005712Elecsys 反應(yīng)杯/加

5、針頭/廢物袋（CUP/TIP），貨號(hào)12102137Elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（SysClean Adapter M），貨號(hào)03027651 Elecsys E 411分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell），貨號(hào)11662988 Elecsys 測(cè)量池清洗液（CleanCell），貨號(hào)11662970 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysWash），貨號(hào)11930346 Elecsys 適配器 （Adapter for SysClean），貨號(hào)11933159, Elecsys 反應(yīng)杯（CUP），貨號(hào)11706829 Elecsys 加樣頭（TIP），貨號(hào)1170680

6、24. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn) Cobas E 601/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批Anti-Tg試劑盒必須用新鮮試劑和Anti-Tg Cal 1,Cal 2定標(biāo)一次。另外，以下情況需要再次定標(biāo)： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)；根據(jù)規(guī)定進(jìn)行多次標(biāo)定。5. 操作步驟（以Cobas E 601為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟： 在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單Calibr

7、ation中進(jìn)行即可。進(jìn)入CalibrationStatus菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（BLANK鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（TWO POINT鍵）、跨距定標(biāo)（SPAN鍵）、多點(diǎn)定標(biāo)（FULL鍵），再選擇其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)SAVE，將定標(biāo)物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點(diǎn)Start，再點(diǎn)Start，儀器開始定標(biāo)。 在CalibrationStatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Reaction Monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇Workp

8、lace- Testslection，在Sequence No欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)SAVE鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)REPEAT，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)OK即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)START鍵，儀器自動(dòng)開始推架檢測(cè)標(biāo)本。6. 質(zhì)量控制用Elecsys Anti-Tg質(zhì)

9、控品1和2 。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計(jì)算方法 分析儀自動(dòng)計(jì)算每份標(biāo)本的測(cè)定濃度，單位為IU/ml 或kIU/L。8. 參考范圍 5 個(gè)臨床中心對(duì)392 例健康個(gè)體進(jìn)行了Elecsys Anti-Tg 研究（MCE Elecsys Anti-Tg，2001 年10 月），確認(rèn)目前界限值為115IU/ml，此值對(duì)應(yīng)94 百分位數(shù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時(shí)根據(jù)具體情況制訂自己的參考范圍。9. 分析性能10. 干擾因素 測(cè)定結(jié)果

10、不受黃疸 (膽紅素1129umol/L 或66 mg/dl), 溶血 (血紅蛋白1.05mmol/L 或 1.69 g/dl), 高脂血癥 (脂肪乳劑 2000mg/dl) 和生物素（ 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集標(biāo)本。類風(fēng)濕病患者（類風(fēng)濕因子高達(dá)300 IU/ml）的血液標(biāo)本可正常測(cè)定。 對(duì)24種常用藥物進(jìn)行體外檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)干擾?？捎煤线m的附加劑將檢測(cè)成份和特異血清之間的免疫交互作用的干擾危險(xiǎn)降到最低程度。11. 結(jié)果解釋12. 臨床意義 甲狀腺免疫球蛋白（Tg）由甲狀腺腺體生成，是甲狀腺濾泡腔內(nèi)的主要成分。在抗甲狀腺過氧化物酶（TPO）聯(lián)合作用下，Tg 在L-酪氨酸碘化過程和甲狀腺激素四碘甲腺原氨酸（T4）和三碘甲腺原氨酸（T3）合成過程中起關(guān)鍵作用。Tg 和TPO 都是潛在的自身抗原。 在自身免疫性甲狀腺炎個(gè)體中可發(fā)現(xiàn)血清Tg自身抗體濃度升高（Tg-自身抗體）。高濃度的抗Tg 和抗-TPO 是慢性淋巴性甲狀腺炎（橋本?。┑闹刚?。自身免疫甲狀腺炎（包括橋本病）個(gè)體中甲狀腺免疫球蛋白抗體出現(xiàn)頻率大約是70-80%，而甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)（葛瑞夫茲氏病）個(gè)體約為30%1?？?Tg 測(cè)定在橋本甲狀腺炎監(jiān)測(cè)2 和鑒別診斷中非常重要（不明原因的抗-TPO 測(cè)定陰性的疑似自身免疫甲狀腺炎個(gè)體3，非淋巴浸潤(rùn)性葛瑞夫茲氏病2，以及Tg 檢測(cè)中用Tg-自身抗