小鼠神經(jīng)功能評分講解

1、小鼠神經(jīng)功能評分1神經(jīng)行為評分在梗死后24h,按照MasaoShmiizu-Sasamata的方法3對所有大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為評分,評分標(biāo)準(zhǔn)包括:自主活動的程度,左前肢偏癱,提尾時左前肢伸不直,抗側(cè)推能力,向左傾斜度,向左環(huán)行度,對觸須的反應(yīng)。以上指標(biāo)無異常為0分,中等異常為1分,嚴(yán)重異常為2分,將各項評分相加,總分為014分。2動物行為學(xué)評定0分:無神經(jīng)損傷癥狀;1分:不能完全伸展對側(cè)前爪;2分:向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分:向?qū)?cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識喪失。3大鼠神經(jīng)損傷嚴(yán)重缺損評分（NeurologicalSeverityScores,NSS）：0分:神經(jīng)功能正常;1分:輕度神經(jīng)功能缺損(提尾

2、時左前肢屈曲);2分:中度神經(jīng)功能缺損(行走時向左側(cè)轉(zhuǎn)圈);3分:中度神經(jīng)功能缺損(向左側(cè)傾斜);4分:無自發(fā)行走，意識減退;5分:與缺血有關(guān)的死亡。4.平衡木試驗(BeamBalanceTest,BBT):把大鼠置于一寬1.5cm的木條上。木條一端懸空，另一端固定于一塊40x40cm的平板中心，以防止大鼠從木條上爬到桌面上使實驗失敗。木條下備有軟墊以防大鼠掉下時跌傷。根據(jù)2分鐘內(nèi)大鼠的平衡能力行神經(jīng)學(xué)評分。正常大鼠的平衡能力在1-2分鐘。平衡試驗評分標(biāo)準(zhǔn)：1在木條上站穩(wěn)，無搖晃，持續(xù)2分鐘2在木條上站穩(wěn)，左右搖晃，未滑下，持續(xù)2分鐘3在木條上站立，下滑至一側(cè)，未掉下，持續(xù)2分鐘4在木條上站立

3、不到2分鐘即從木條上掉下5試圖在木條上站穩(wěn)、但在數(shù)秒鐘即掉下6無任何站立能力5.抬高身體搖擺試驗（ElevatedBodySwingTest,EBST）：用于測量運(yùn)動不對稱，EBST測量時首先用手提起大鼠的尾根部，大鼠頭部懸垂距平面5cm左右，這時大鼠頭部會向左側(cè)或右側(cè)旋轉(zhuǎn)，向單測旋轉(zhuǎn)的角度大于100時為計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)，記錄旋轉(zhuǎn)的方向和角度，一次試驗后讓大鼠休息1min，再進(jìn)行下一次實驗，重復(fù)試驗20次，記錄總的次數(shù)和方向。6.一次性被動回避平臺試驗(Step-downPassiveAvoidanceTest,SDPAT)是一種用于研究記憶的簡單行為模型，主要適用于研究記憶的鞏固(memoryco

4、nsolidation)和記憶的保持(memoryretention)。該模型含有一定的空間記憶成份，試驗箱是一個長方形的封閉空間，高為60cm，箱內(nèi)有一較小的平臺9cmX9cm,高出底面約2cm，動物只能不十分舒服地堅持在平臺上，如跑下平臺(銅棒，通電，30V)即遭到電擊。訓(xùn)練過程是這樣的:首先把動物放在平臺上，大鼠一般在平臺上只能停留幾分鐘，就會跑下來，但由于底面的金屬條是通電的，大鼠在尋找一段時間后，能夠找回平臺。這時第一次試驗結(jié)束，24h后，再次把大鼠放在平臺上，這時底面的金屬條并不通電，記錄大鼠在平臺上滯留的時間，根據(jù)測試間隔時間的長短和在平臺上滯留時間的多少來判定大鼠對上次電擊的記

5、憶保持能力。7.水迷宮試驗(WaterMazeTest,WMT)：用于測量大鼠空間學(xué)習(xí)能力。每組于移植后的第7周進(jìn)行。在相同室溫（252）0C和象限條件下，將3組動物連續(xù)訓(xùn)練4d，2次/d，每次限定時間為120s，超過120s仍找不到平臺者記為未找到平臺，2次間隔為10min，第5天測試。Bederson評分四個功能等級：0分：無神經(jīng)損傷癥狀1分：懸尾實驗不能完全伸展對側(cè)前爪2分：前肢抵抗對側(cè)推力能力下降？3分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈小鼠腦缺血神經(jīng)功能障礙行為學(xué)評價的研究進(jìn)展 缺血性腦卒中是一種高發(fā)病率、高致殘率及高 致死率的疾病。 在腦缺血及腦缺血再灌注損傷的 研究中，最常使用大鼠或者小鼠的可逆性大腦中

6、動 脈阻塞（ ，） ，因此小鼠 模型在研究腦缺血及再灌注損傷病理生理變 化及基因表達(dá)方面有著更大的優(yōu)勢 腦梗死體積與神經(jīng)功能缺損的行為學(xué)評價是判定腦缺血嚴(yán) 重程度的重要指標(biāo)，許多研究報告對大鼠的行為學(xué) 評價進(jìn)行了闡述 ，而對小鼠的研究較少，其評價指標(biāo)大多移植于大鼠的評價體系，至今為止，還沒 有對這一系列的綜合性評價達(dá)成共識，不僅有許多 不同的測試在使用，而且所應(yīng)用測試的數(shù)量和頻率 也沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。 本文對小鼠腦缺血神經(jīng)功能 損傷評價方法包括感覺功能、運(yùn)動功能、學(xué)習(xí)能力 以及綜合性評價做一綜述。1.感覺功能評價 小鼠 模型中，感覺功能的缺失是對其神 經(jīng)功能判定的一個可靠的指標(biāo) 目前最常用的是

7、墻角試驗（ ），最先由 改良，具體操作是將兩個尺寸為 的紙板呈夾角放置，將 小鼠置于夾角之間，進(jìn)入夾角深部，雙側(cè)的觸須受到刺激后會站立并轉(zhuǎn)身面向夾角的開口端。 正常 小鼠從右面或左面轉(zhuǎn)身的概率基本相等，而一側(cè)腦 損傷小鼠會優(yōu)先向腦損傷側(cè)轉(zhuǎn)身。 墻角試驗可以 準(zhǔn)側(cè)檢測出感覺功能障礙，甚至 后的輕度局灶性腦缺血，特別是在紋狀體發(fā)生缺血時。 此實驗簡 單易行，應(yīng)用廣泛，但 認(rèn)為墻角試驗對感覺功能恢復(fù)程度的檢測不敏感，可能是因為這項試驗 是對感覺和運(yùn)動功能的綜合評價，需要兩種功能都 較好的恢復(fù)后才能檢測出來，而且不能準(zhǔn)確反映單 側(cè)肢體的運(yùn)動功能變化。 粘簽試驗（ 又稱感覺不對稱試驗，用來確定皮膚敏感性

8、和感覺功能的整合性。 缺血發(fā)生在大腦皮層的感覺區(qū)、皮質(zhì)脊髓束和紋狀體時，感覺功能發(fā)生明顯缺失。 具體方法是將直徑 的圓形背膠標(biāo)簽貼附在小鼠相對無毛的手腕 處，當(dāng)回到飼養(yǎng)籠時，一個正常的小鼠會用牙齒迅 速除掉每個圓形標(biāo)簽，而發(fā)生腦缺血的小鼠首先除 掉附著在正常前肢的標(biāo)簽，然后是病變的一側(cè)，并 需要花費(fèi)更多的時間，缺血性病變導(dǎo)致了感覺功能 的不對稱性 此外，時間的延遲還表明運(yùn)動功能的缺失，嘴和前肢運(yùn)動障礙導(dǎo)致去除粘性標(biāo)簽相對 困難。 后續(xù)的測試可以通過逐步增加患側(cè)所粘標(biāo) 簽的大小并減小健側(cè)的標(biāo)簽大小，直到患側(cè)肢體所 受的的刺激變得比健側(cè)的更突出，小鼠就開始首先 從患側(cè)的肢體消除刺激 該方法主要用于

9、對多種病因?qū)е碌那爸杏X、皮質(zhì)運(yùn)動區(qū)損傷后的功能 評價，與人類頂葉受損后對側(cè)肢體的忽視癥狀類似。 圓筒試驗（ 又稱肢體不對稱使用試驗，最早應(yīng)用于大鼠的行為學(xué)評價 通過改良用來評估小鼠前肢使用和旋轉(zhuǎn)的對 稱性，當(dāng)小鼠一側(cè)的感覺皮層、皮質(zhì)脊髓束、紋狀體 受到缺血損害時前肢的使用發(fā)生不對稱性，進(jìn)一步 觀察會發(fā)現(xiàn)離散運(yùn)動障礙和協(xié)調(diào)運(yùn)動也相繼發(fā) 具體操作是將小鼠放置在一個直徑，高 度 的透明圓桶內(nèi)。 當(dāng)小鼠后腿站立時，分別 記錄最初左前肢、右前肢及兩側(cè)前肢同時碰觸筒壁 的次數(shù)。 當(dāng)一側(cè)前肢（如右側(cè)）碰觸筒壁后，另一側(cè) 前肢（左側(cè)）在右側(cè)未移開時也碰觸到了筒壁，記錄 一次右側(cè)和一次同時碰觸。 當(dāng)兩側(cè)前肢交

10、替碰觸 筒壁時，記錄為同時碰觸，共進(jìn)行 次重復(fù)試驗。 最終得分（右前肢的運(yùn)動 左前肢運(yùn)動） （右前 肢運(yùn)動左前肢運(yùn)動） 。 得分越高說明兩側(cè) 肢體的不對稱程度越明顯。 這種評分方法即使對 于沒有經(jīng)驗的評價者也有較高的可信度。 運(yùn)動功能評價 運(yùn)動功能的不協(xié)調(diào)性和伴隨出現(xiàn)的的代償反 應(yīng)是人類中風(fēng)的突出特點。 大部分腦缺血的動物 模型都會在行走、轉(zhuǎn)彎和游泳等運(yùn)動中出現(xiàn)相應(yīng)的 功能障礙。 在 年建立了一種大 鼠以前肢通過窄縫抓取食物的評價方法，稱為伸爪 試驗（ 該方法可評價單側(cè)肢體的運(yùn)動功能， 區(qū)分肢體損傷與修復(fù)的細(xì)小差 ，還可以用來評估感覺運(yùn)動皮層和皮質(zhì)脊髓束 的功能缺失 ， ，對小鼠同樣適用。 伸

11、爪實驗盒用 透明玻璃制成，長寬高分別為 ， 和 ， 在盒的前壁正中央開一條寬度為暢 狹長的縫 隙，縫隙底部前壁的外側(cè)有放置食物片的凹槽，迫 使小鼠從縫隙處伸出患側(cè)前肢抓取食物。 正常小 鼠可從縫隙處伸出前肢，抓取并吃到凹槽內(nèi)的食 物；而腦缺血后的動物不能完成。 定的反映腦缺血慢性損傷變化，對動物伸爪、抓食及吃食過程可作細(xì)致的軌跡分析，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)更多的 變化特征 煙囪試驗（ 最早由 改良，具體發(fā)方法是在一根 長 ，直徑 的透明玻璃管的 一個記號，水平放置，將小鼠放置于入口處，當(dāng)其爬至管底時，將玻璃管垂直放置，使其頭朝下，正常狀 態(tài)下小鼠會通過快速反應(yīng)學(xué)會倒著走路，到達(dá)標(biāo)記 處所需的時間最長不會超過

12、 ，而發(fā)生腦缺血后 所用時間會明顯延長，此實驗常用來測試小鼠的運(yùn) 動協(xié)調(diào)性。 立柱試驗（ ）主要對前肢 的力量，抓握能力和平衡性進(jìn)行評估 提出并改進(jìn)了評分方法，將一根長 英寸、直 徑暢 英寸的木棍用膠帶纏繞，以增加摩擦力，水 平放置后將小鼠放在木棍中央，將木棍慢慢抬起直 至與地面垂直，記錄小鼠在木棍上的時間，評分標(biāo) 之間；， 時間 ， 提出的前肢踩 空試驗（ ）也可用于前肢運(yùn)動功能的評 價，將小鼠放置在不同尺寸的 邊行的鐵絲網(wǎng)上，小 鼠在鐵絲上行走，在此過程中會出現(xiàn)踩空或踩滑現(xiàn) 象，記錄前肢總共行走的次數(shù)以及踩空的次數(shù)，踩 空的次數(shù)越多表明小鼠腦損傷越大。 爬板試驗 是將小鼠置于一塊包有銅 絲

13、網(wǎng)的有機(jī)玻璃平板上，先保持平板在水平位置， 后逐漸將平板豎起，至小鼠不能攀爬而從平板上落 下，記錄此時平板軸線與水平面之間的角度，即爬 板角度，重復(fù)三次取平均值。 爬板試驗用于評價整 體協(xié)調(diào)功能，也是一種簡便且可定量的指標(biāo)，但是， 該指標(biāo)變化的恢復(fù)較快，僅能用于 內(nèi)的急性功能損傷。 為了提高神經(jīng)功能行為評價的準(zhǔn)確性及可信 度，近年來各種發(fā)明及改良的裝置、軟件層出不窮。 旋轉(zhuǎn)加速試驗（ 首先用于研究神經(jīng)系統(tǒng)功能的運(yùn)作，后來才在腦損傷如腦缺血 的研究中廣泛應(yīng)用 ，主要用來評估腦缺血動物運(yùn) 動的平衡和協(xié)調(diào)能力。 在研究中將其 稱為“旋轉(zhuǎn)跑步機(jī)測試”，動物放置在直徑 形轉(zhuǎn)盤的中央，轉(zhuǎn)盤與一個可調(diào)節(jié)速度

14、的轉(zhuǎn)軸連接，實驗開始后轉(zhuǎn)軸在 分鐘內(nèi)從 加速到 記錄小鼠在圓盤上的時間，最大分值為，腦缺血的嚴(yán)重程度與得分成反比。 為了排除試驗中可能 出現(xiàn)的偶然情況，每只動物可做 次測試，取平均值 作為最終得分。 此法操作簡單，可行性大，且靈敏 度較高。 曠場試驗（ ）需要一曠場實驗敞 箱的裝置 ，木質(zhì)，周壁及底面涂黑，底面由面積相 等（ ）的方格組成，將小鼠放入曠場正中 格，用攝像系統(tǒng)記錄動物 的行為變化，包括水 平運(yùn)動、垂直運(yùn)動及糞便粒數(shù)，數(shù)據(jù)用相應(yīng)的統(tǒng)計 軟件分析。 該試驗不僅可以用來評價小鼠的運(yùn)動 功能，也可用糞便粒數(shù)反應(yīng)動物的焦慮狀態(tài) 掛試驗（ 最早開始于大鼠的行為學(xué)評價，后經(jīng) 的改進(jìn)成功應(yīng)用于小

15、鼠， 該試驗 是將小鼠尾部 處用膠帶粘貼懸掛于 墻上，用攝像設(shè)備記錄小鼠 內(nèi)在墻上運(yùn)動情 況，輸入計算機(jī)保存圖像。 用計算機(jī)軟件處理平均 角、優(yōu)勢角和轉(zhuǎn)動次數(shù)等參數(shù)，并計算出相對轉(zhuǎn)動 懸掛試驗可以反映小鼠的偏癱癥狀、運(yùn)動和平衡能力，與梗死面積有較好的相關(guān)性，可客觀的反 應(yīng)腦缺血損傷及神經(jīng)癥狀 學(xué)習(xí)與記憶能力評價人類腦卒中的發(fā)生經(jīng)常伴隨著認(rèn)知與記憶功 能障礙，因此在腦缺血的動物模型中也需要對認(rèn) 知、記憶功能進(jìn)行檢查。 常用的評估方法包括水迷 宮和跳臺試驗。 水迷宮最初由 提出，最 先應(yīng)用于大鼠的認(rèn)知功能評價，后來發(fā)現(xiàn)它對小 和人類 同樣適用。 將測試小鼠放置于直徑 的游泳池中，通過其視覺記憶找到

16、隱藏于水下 的平臺，如果找不到，表明其記憶受損，其損傷程 度可用找到平臺所需的時間進(jìn)行量化，平臺的位置 也可每天變化。 當(dāng)小鼠的前額葉皮層、紋狀體、小 腦受損傷時測試結(jié)果明顯，對海馬損傷尤其敏感。 水迷宮操作簡單，可信度高，在國內(nèi)外使用較多。 旋臂迷宮試驗（ ）可用于評估腦缺血 動物的學(xué)習(xí)和記憶功能障礙，同樣對海馬的損傷尤 為敏感 其實驗裝置包括一個中央平臺及由平臺向四周突出的八個或十二個徑向臂 試驗開始之前，將食物放置在某一徑向臂的末端，動物需 禁食一段時間，以保持一定的覓食動力。 試驗將小 鼠放置在平臺上，依靠其空間感來尋找食物，完成 任務(wù)后將其放回平臺中央，依靠記憶功能重新尋找 食物，為

17、了增加困難，可將食物放在其他徑向臂的 末端，記錄犯錯誤的次數(shù)。 實驗結(jié)果表明腦缺血小 鼠的學(xué)習(xí)與記憶障礙明顯。 跳臺測試（ 需要用到小鼠跳 臺儀，此裝置用黑色有機(jī)玻璃分割成 間，箱底放置 銅柵，每間右后角置一高 ，直徑 的橡皮墊 作為動物逃避電擊的安全區(qū)，實驗時小鼠放置在橡 皮墊上，通 交流電，小鼠跳至銅柵上時會受到電擊，正常反應(yīng)是跳回安全區(qū)以躲避電刺激。 時間 持續(xù) ，記錄每只小鼠受到電擊的次數(shù)作為記憶 成績。 此實驗受人的主觀意識影響較小，能夠客觀 的評價小鼠記憶能力。 此外，測試小鼠學(xué)習(xí)記憶能 力的方法還有避暗試驗、 形迷宮試驗、穿梭箱試驗 和高架十字迷宮試驗等。 綜合性評價 國際腦卒中

18、治療臨床前研究指南（） 出，在腦缺血治療藥物研究中，多重指標(biāo)綜合評價很重要，各種行為學(xué)的結(jié)果都應(yīng)該評價 目前，國內(nèi)外 主要采用 五分法 對小鼠進(jìn)行綜合 性評分（以右側(cè)腦缺血為例），即 分，無明顯神經(jīng) 功能損害癥狀； 分，左肢體不能完全伸展； 分，行走時向右側(cè)傾倒；，不能自發(fā)行走； 分，死亡。 另外 提出的 級評分方法和以后改良的 分法 的癥狀 評分法也被大多國內(nèi)外研究者采用，上述兩種評分 方法操作簡單，節(jié)約時間，但都存在主觀性較大，結(jié)果不夠客觀的缺點，并且評價不夠全面，評分不夠 細(xì)致。 評分 分別從局灶性功能損傷和一般 功能損傷兩個角度對小鼠的感覺運(yùn)動功能進(jìn)行了 綜合性評價，總分為 分，它通過對毛發(fā)、耳朵、眼 睛、體態(tài)等細(xì)微的觀察，以及步態(tài)、攀爬、身體對稱 性、自主運(yùn)動和癲癇發(fā)作的測試進(jìn)行了評價，并且 與腦梗死體積的比例具有良好的的相關(guān)性。 評分 與 評分相似，最早應(yīng)用于大鼠，是 對大鼠的運(yùn)動功能和感覺功能的綜合性評價，經(jīng)過 改良，也可