細胞實驗室簡介

1、,細胞實驗室簡介,作者 Vincent,細胞實驗室組成 細胞實驗室的設(shè)置 細胞實驗室的基本設(shè)備配置 常用器皿、器械 實驗室操作注意事項,大綱,細胞培養(yǎng)實驗室的設(shè)計是由工作的目的和規(guī)模決定的， 其基本要求是：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。 細胞培養(yǎng)實驗室的設(shè)置必須滿足三個基本的需要，即：實驗準備（培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等）、無菌操作、控制培養(yǎng)。,一.細胞實驗室組成,基本組成：,基本實驗室 消毒準備室 制備室 無菌操作室 輔助實驗室 細胞學實驗室 生化分析室 攝影室及暗室,消毒準備室 制備室 無菌操作室,1.基本實驗室：,消毒準備室 功能 一切與實驗有關(guān)的準備工作 要求 設(shè)備的安裝和排列

2、要合理 房間要寬敞明亮，通風條件好 地面要便于清潔、防滑 配備 實驗臺，高壓滅菌鍋、排風滅火設(shè)備、 超聲波清洗器、洗瓶機等。,制備室 功能 進行培養(yǎng)液及相關(guān)試劑的配制 要求 在無菌操作臺內(nèi)過濾、除菌。 配備 冰箱、天平、真空泵、PH計等。,無菌操作室 地面、天花板及四壁盡可能光潔，無死角，易于清潔。 大小適度，層高不高于2.5米。 干爽、安靜、清潔、明亮。 紫外燈12盞，保持室內(nèi)無菌狀態(tài)。,無菌操作室 設(shè)置空氣過濾和恒溫恒濕裝置，恒溫溫度26度左右。相對濕度控制在30-65%。 保持正壓，盡量減少與外界的空氣對流，減少塵埃與微生物侵入。 通常由內(nèi)外間組成，外間為緩沖間，用于準備工作。 研究人員

3、進入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。,無菌操作,（1）無菌操作室：無菌操作區(qū)只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。 理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分： a) 更衣室供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b) 緩沖間位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境。 c) 無菌操作間專用于無菌操作、細胞培養(yǎng)。其大小要適當，且其頂部不宜過高（不超過2.5m）以保證紫外線的有效滅菌效果；墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺安置不應(yīng)靠墻壁，臺面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚紅,顯示pH的觀察。 無菌操作間的空氣消毒： 紫外線燈產(chǎn)生臭氧，并且室內(nèi)溫度及

4、濕度均較高，不利于工作人員健康。 空氣過濾的恒溫恒濕裝置最好 無臭氧紫外線消毒器 電子消毒滅菌器在高壓電場作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應(yīng)，從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需3040min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。,細胞培養(yǎng)實驗室應(yīng)能進行五方面的工作： 無菌操作 制備 清洗 消毒滅菌處理 儲藏,二.細胞實驗室的設(shè)置,三.細胞實驗室的基本設(shè)備配置,基本設(shè)備 滅菌設(shè)備 無菌操作設(shè)備 細胞培養(yǎng)設(shè)備 細胞學鑒定設(shè)備,冰

5、箱 天平 酸度計 恒溫水浴鍋 磁力攪拌器 液氮罐 純水設(shè)備,1.基本設(shè)備,PH 7.07.4去離子水無菌,高溫電子滅菌爐 蒸汽式壓力滅菌鍋 過濾滅菌裝置 噴霧消毒器 紫外燈,2.滅菌設(shè)備,0.45 m0.22 m,生物安全柜,3.無菌操作設(shè)備,生物安全柜 根據(jù)主要幾項生物安全柜國際標準的規(guī)定，安全柜可分為一級、二級和三級三大類以滿足不同生物研究和防疫的要求。安全柜的分類級別與生物安全登記無關(guān)。,一級生物安全柜 保護工作人員和環(huán)境，而不保護樣品。 排氣口安裝有HEPA過濾器。 無自帶風機，依賴外接通風管中的風機帶 動氣流。,二級生物安全柜 可提供對樣品，環(huán)境，工作人員的保護。 排氣口安裝有HEP

6、A過濾器，獨有特征是具有垂直層狀薄片（無定向的）HEPA過濾器。 內(nèi)置風機，形成下沉氣流 無自帶風機，依賴外接通風管中的風機帶 動氣流。,三級生物安全柜 為34級實驗室生物安全等級而設(shè)計，柜體完全氣閉。 通過手套進行操作，俗稱“手套箱”。 實驗品通過雙門的傳遞箱進出。 適用于高風險的生物實驗。,CO2培養(yǎng)箱 離心機,4.細胞培養(yǎng)設(shè)備,溫度：370.5CO2濃度：5%相對濕度：100%定期清洗、消毒,罐內(nèi)壓力指示,接培養(yǎng)箱的管子,輸出壓力指示,壓力調(diào)節(jié)旋鈕,流量控制閥門,5.細胞學鑒定設(shè)備,倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 酶標檢測儀 流式細胞儀,四.常用器皿、器械,培養(yǎng)器皿 移液器 特殊用具,移液器 電動移液器 微量移液器 多通道微量移液器,特殊用具 細胞篩網(wǎng)、細胞刮刀、細胞計數(shù)板,五.實驗室操作注意事項,做好實驗前準備，避免反復進出而增加污染機會 進入細胞培養(yǎng)室前需更換工作服,換鞋并洗凈、消毒雙手。 注意無菌室內(nèi)的紫外燈 室內(nèi)常規(guī)用品不準隨意拿出室外，所有物品不得挪作它用,冰箱內(nèi)的培養(yǎng)液要注明姓名、配制日期，不隨便使用他人的培養(yǎng)液，以免交叉污