基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)生化測(cè)量系統(tǒng)校準(zhǔn)南京

1、生化測(cè)量系統(tǒng)的校準(zhǔn) 南通大學(xué)附屬醫(yī)院 王惠民 一、與校準(zhǔn)相關(guān)的一些基本問題 ? 校準(zhǔn)（Calibration ）重要嗎？ ? 實(shí)驗(yàn)室中測(cè)量不合格約15%由校準(zhǔn)誤差所致 ? 臨床醫(yī)生往往認(rèn)為檢驗(yàn)結(jié)果的“不準(zhǔn)”是由不正確的 校準(zhǔn)造成的 ? 陳文祥主任認(rèn)為，檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的前提是： 測(cè)量結(jié)果是否具有可比性（溯源，方法性能評(píng)價(jià)： 校準(zhǔn)） 可比性的標(biāo)準(zhǔn) 參考測(cè)量區(qū)間（一致化問題） ? 校準(zhǔn)受到重視了嗎？ ? 一般由組長(zhǎng)進(jìn)行校準(zhǔn) ? 一般無SOP，或SOP不夠詳細(xì) ? CLSI或去其他的國(guó)際組織尚未有相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)或指 南 ? 一般的實(shí)驗(yàn)室無校準(zhǔn)的記錄 ? 科主任一般不過問校準(zhǔn)的正確與否 ? 校準(zhǔn)什么？ ? 測(cè)

2、量?jī)x器？測(cè)量系統(tǒng)（“調(diào)標(biāo)”或“定標(biāo)”）？ ? 測(cè)量?jī)x器：?jiǎn)为?dú)或與輔助設(shè)備組合，用于測(cè)量的裝置。 ? 測(cè)量系統(tǒng)：由一臺(tái)或多臺(tái)測(cè)量?jī)x器所組成的用于特定 測(cè)量的成套系統(tǒng)，包括試劑和電源等。 ? 校準(zhǔn)實(shí)際上就是將測(cè)量系統(tǒng)與“參考系統(tǒng)”進(jìn)行比較， 并將測(cè)量系統(tǒng)調(diào)整至參考系統(tǒng)相一致水平的過程。 F t A LV VVV t A C S SRR ? ? ? ? ? ? ? ? ? 6 21 10 11 ? ? 實(shí)際上，有些情況下不需要對(duì)測(cè)量系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn) ? 臨床化學(xué)測(cè)量常根據(jù)系數(shù)進(jìn)行計(jì)算 例：酶催化活性濃度的測(cè)量 F值又稱為K值 項(xiàng)目 理論 K值 校準(zhǔn)K值校準(zhǔn)K值與理論K值之間的誤差 RANDOX 試劑 國(guó)

3、產(chǎn)試劑 RANDOX 試劑 國(guó)產(chǎn)試劑 ALT-3633-4201-5079-15.63%-39.80% AST-3633-4211-5020-15.91%-38.18% ALP326239664090-21.58%-25.38% GGT496450595286-1.91%-6.49% CK71066236573412.24%19.31% LDH71061025413785-44.30%-93.99% 校準(zhǔn)K值與理論K值的比較 DiaSys Randox ? 為什么用校準(zhǔn)品后得到的K值與理論K值不 一致？ ? 校準(zhǔn)品是如何定值的？ 方法不一樣（參考方法） 儀器不一樣（最好的儀器，每次定值前都必須

4、對(duì)儀 器進(jìn)行校準(zhǔn)） 試劑不一樣（最好的試劑） 參考方法與常規(guī)方法測(cè)量?jī)x器的差異 參考方法 （Agilent Cary 4000 ） 常規(guī)方法 （JJG464-2005 要求） 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度 0.1nm5nm 波長(zhǎng)精密度 0.025nm2.5nm 吸光度準(zhǔn)確度0.00025A0.07A 溫度準(zhǔn)確度370.137.00.1 半波寬0.05nm15nm 二、校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備 1.生化分析儀的準(zhǔn)備 ? 生化分析儀的校準(zhǔn)或檢定 ? 生化分析儀的性能驗(yàn)證 2.試劑的準(zhǔn)備 ? 試劑是否獲準(zhǔn)入 ? 試劑的性能驗(yàn)證 3.水的準(zhǔn)備 1.生化分析儀的準(zhǔn)備 ? 生化分析儀的校準(zhǔn)或檢定 由廠家根據(jù)其標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生化分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)

5、由有關(guān)計(jì)量部門根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（ JJG494-2005 ） 對(duì)儀器進(jìn)行檢定 生化分析儀的性能驗(yàn)證（根據(jù)中華人民共和國(guó)生化分析 儀檢定規(guī)程JJG 494-2005進(jìn)行） ? 零點(diǎn)漂移 ? 波長(zhǎng)準(zhǔn)正確度及重復(fù)性 ? 雜散光 ? 吸光度正確度 ? 吸光度重復(fù)性 ? 吸光度線性誤差 ? 交叉污染率 ? 溫度正確度 ? 比色杯間差距 生化分析儀檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ? 用于吸光度正確度與重復(fù)性檢定的標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì) ? 雜散光檢定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ? 吸光度線性檢定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ? 交叉污染檢定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，北京市北三環(huán)東路18號(hào)， 電話，64278838 零點(diǎn)漂移 開機(jī)30mi

6、n, 用蒸餾水調(diào)吸光度至0.000 處，10min 內(nèi)吸光度的最大變化值應(yīng)符合下 表規(guī)定： 類級(jí)飄移值 一 （棱鏡式或 光柵式） A0.002 B0.004 C0.006 二 （干涉濾光片或 吸收濾光片） A0.002 B0.004 C0.006 單波長(zhǎng)(nm) 飄移（A）雙波長(zhǎng)(nm) 飄移（A） 3400.0148340/4050.0015 4050.0093405/5700.0009 450-0.0060450/6000.0004 5050.0088505/6600.0006 6600.0036660/750-0.0004 復(fù)興儀器的零點(diǎn)飄移 復(fù)興儀器340nm零點(diǎn)漂移 復(fù)興儀器340n

7、m零點(diǎn)漂移 復(fù)興儀器405nm零點(diǎn)漂移 復(fù)興儀器405nm零點(diǎn)漂移 復(fù)興儀器340/405nm零點(diǎn)漂移 復(fù)興儀器340/405nm零點(diǎn)漂移 復(fù)興儀器405/505nm零點(diǎn)漂移 出現(xiàn)零點(diǎn)飄移可能原因 ? 電壓不穩(wěn) ? 光電倍增管或光接收元件老化 ? 儀器靈敏度過高 ? 儀器設(shè)計(jì)與制造的缺陷 波長(zhǎng)的正確度 波長(zhǎng)正確度的測(cè)定方法根據(jù)分光原理不同而異 ? 分光式儀器（光柵由于不需傳動(dòng)調(diào)節(jié)波長(zhǎng)，一般不 需校準(zhǔn)） 低壓汞燈、氘燈、干涉濾光片 鐠釹濾光片、氧化鈥濾光片 ? 濾光式儀器 將濾光片拆下在已校準(zhǔn)的分光光度計(jì) 上進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，測(cè)定波長(zhǎng)和半波寬 一般儀器不容易拆卸 特征譜線 ? 低壓汞燈: 253.7

8、nm ? 氘燈: 486nm 、656.1nm ? 鐠釹濾光片: 529nm 、808nm（400nm900nm 內(nèi)至少有10個(gè)吸收峰） ? 氧化鈥濾光片: 200700nm共12條譜線 ? 干涉濾光片: 長(zhǎng)波通濾光片: 2001100nm ，光學(xué)分辨率為 1nm 短波通濾光片: 400700nm，光學(xué)分辨率為1nm 波長(zhǎng)的重復(fù)性 指多次波長(zhǎng)測(cè)試數(shù)據(jù)的離散性，或者多次 波長(zhǎng)測(cè)試數(shù)據(jù)的符合程度。 一般取波長(zhǎng)正確度的3次測(cè)試結(jié)果中最 大值與最小值之差作為波長(zhǎng)重復(fù)性。 波長(zhǎng)正確度及重復(fù)性的要求 （nm） 類級(jí)波長(zhǎng)范圍正確度重復(fù)性 一（分光 類儀器） A 340700 10.5 B 340700 31

9、.5 C 340700 52.5 類級(jí)波長(zhǎng)范圍正確度半波寬 二（濾光 類儀器） A 340700 210 B 340700 412 C 340700 615 雜散光 雜散光與波長(zhǎng)的半波寬有關(guān)，半波寬越大，雜散光越多。 測(cè)定50g/L 亞硝酸鈉（NaNO 2）標(biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)于蒸餾 水在340nm 處的吸光度，了解雜散光的多少。 ? 亞硝酸鈉溶液的配制方法 將分析純亞硝酸鈉固體試劑放入稱量瓶置于烘箱中，在箱溫為 1055下烘2h，取出置于干燥器中冷卻至室溫，在分析天平上 （精度為0.1mg）精確稱取10g，置于200mL燒杯中，用小半杯蒸餾 水溶解后移入200mL容量瓶中，以少量蒸餾水沖洗燒杯三次，

10、均倒 入容量瓶中，然后用蒸餾水稀釋至刻度線反復(fù)搖勻，置于陰涼干燥處 備用。 340nm340nm340nm 345nm345nm 雜散光 1）在波長(zhǎng)340nm ，第一個(gè)試劑位放入蒸餾水，以 蒸餾水為樣本，重復(fù)測(cè)定 5次吸光度值；第二個(gè)試 劑位放入 NaNO 2溶液，以 NaNO2溶液為樣本， 重復(fù)測(cè)定 5次吸光度值；或?qū)⒄麴s水和 NaNO 2溶 液分別加入同一比色杯讀取吸光度（可消除比色 杯誤差），重復(fù)測(cè)定 5次，共得 5個(gè)蒸餾水和 5個(gè) NaNO 2溶液的吸光度。 2）最小 NaNO 2 溶液吸光度 -最大蒸餾水吸光度 2.3。 復(fù)興儀器的雜散光測(cè)定 復(fù)興儀器的雜散光測(cè)定 復(fù)興儀器的雜散光測(cè)

11、定（空白） 吸光度正確度 指吸光度實(shí)際測(cè)定值與理論值之差，該偏差 越小吸光度正確度越高，間接說明波長(zhǎng)的正確 度與雜散光的多少。 1）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)法 2）己糖激酶法 吸光度正確度 1）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)法： 使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液， 其吸光度分別為0.5和1.0。 在340nm 波長(zhǎng)、比色杯光徑 1cm 時(shí)，以標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)標(biāo)示的參比液作參比，測(cè)吸光度值，重復(fù)測(cè)量 3 次。 計(jì)算3次測(cè)量值的算術(shù)平均值與標(biāo)準(zhǔn)值之差， 0.5 的標(biāo)準(zhǔn)液允許誤差為 0.025 ， 1.0 的標(biāo)準(zhǔn)液，允 許誤差為0.07。 測(cè)定結(jié)果 ? 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸光度：A1-1=0.489 A 1-2=0.980 （不 確

12、定度：0.005） ? 檢測(cè)結(jié)果： A1-1=0.4916 ；0.4836；0.4812，均值為0.4855 A1-2=0.9703 ；0.9714；0.9722，均值為0.9713 ? 結(jié)果判定：A1-1誤差0.025；A1-2誤差0.07。即 0.464A 1-1 0.514；0.910A 1-2 1.050 吸光度正確度 2）己糖激酶法 用己糖激酶（HK ）法測(cè)定葡萄糖濃度時(shí)，反應(yīng)產(chǎn)生 NADH，在340nm 測(cè)定吸光度，間接測(cè)NADH的（理 論值為6220），以此為標(biāo)準(zhǔn)校正。 以HK測(cè)葡萄糖為例，試劑反應(yīng)過程如下： HK 葡萄糖+ ATP-6-P- 葡萄糖+ ADP, G6PDH 6-

13、P-葡萄糖+ NAD +-葡萄糖酸+NADH, 影響吸光度準(zhǔn)確度的主要因素 ? 雜散光多 ? 波長(zhǎng)不正確 ? 標(biāo)準(zhǔn)液不正確 ? 儀器的靈敏度或其他原因 吸光度重復(fù)性 1）以重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣本，在波長(zhǎng) 340nm，吸光 度為0.30.5,以蒸餾水為空白 ,試劑量為全自動(dòng)生 化分析儀標(biāo)稱的最小試劑量、測(cè)定時(shí)間為 10min； 每30秒讀取吸光度,連續(xù)20次，得到20個(gè)吸光度值。 計(jì)算CV，應(yīng)1.0% 2）采用吸光度約為0.5生化分析儀用吸光度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)， 在340nm 處連續(xù)測(cè)定5次，然后計(jì)算其中最大值與 最小值之差。吸光度的重復(fù)性均應(yīng)不大于0.005 ? 檢測(cè)結(jié)果： ? A1-1=0.4828

14、；0.4831；0.4836； 0.4812；0.482 ? 0.4836-0.4812=0.00240.005 吸光度線性誤差 分 別 用 濃 度 為 2.0 、 4.0 、 6.0 、 8.0 、 10.0g/L 的氯化鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液，以蒸餾水為對(duì)照， 在510nm （500-520nm ）測(cè)定各溶液吸光 度，連續(xù)測(cè)量 3次，然后將所得數(shù)據(jù)求相關(guān)系 數(shù)，r0.995 ?；虬聪铝泄接?jì)算，線性誤差 符合規(guī)定要求。 1 1 n i Ai K nCi ? ? ?100% KiK i K ? ? ? 1 1 1 0.1691 0.08455 2.0 A K C ? 1 1 100%0.1% KK K

15、? ? ? 2 2 2 0.3333 0.08342 4.0 A K C ?2 2 100%1.2% KK K ? ? ? 3 3 3 0.5106 0.08510 6.0 A K C ? 3 3 100%0.7% KK K ? ? ? 4 4 4 0.6680 0.08600 8.0 A K C ? 4 4 100%1.8% KK K ? ? ? 5 5 5 0.8329 0.08329 10.0 A K C ? 5 5 100%1.4% KK K ? ? ? ? 12345 0.08447 5 KKKKK K ? ? 分光裝置吸光度范圍線性誤差（%） 棱鏡或光柵 0.1-0.35 0.3-

16、0.64 0.6-0.95 ? 結(jié)論：符合吸光度線性要求 3.36783.3678 0.999 3.36828400.283633492 Sxy r SxxSyy ? ? 交叉污染率 概念：由測(cè)量系統(tǒng)將一個(gè)檢測(cè)樣品反應(yīng)攜帶到另一個(gè)檢 測(cè)樣品反應(yīng)的分析物不連續(xù)量，由此錯(cuò)誤地影響了另 一個(gè)檢測(cè)樣品的表現(xiàn)量。 1、氯化鈷方法 2、桔紅G方法 3、臨床標(biāo)本的檢測(cè)：50U/L與250U/L的AST或 ALT測(cè)定 測(cè)定方法： 將氯化鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液按儀器規(guī)定的最小樣品量，先用質(zhì) 量濃度為2.0g/L 的氯化鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液將比色杯沖洗三次，接 著對(duì)該溶液連續(xù)測(cè)量四次。按上述方法依次循環(huán)對(duì) 2.0和 10.0g/L 氯

17、化鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)測(cè)得七組在 510nm 處的測(cè) 量值（四組低濃度值和三組高濃度值），然后按以下公式 將每相鄰兩組值進(jìn)行計(jì)算，得到三個(gè)低濃度到高濃度的計(jì) 算值和三個(gè)高濃度到低濃度的計(jì)算值，即為交叉污染率， 均應(yīng)1.5%。 ? L1=0.1634 ；L2=0.1691；L3=0.1639 ；L4=0.1668 ? H1=0.8316 ；H2=0.8331 ；H3=0.8305 ? CoLH=(0.8317-0.8316)/(0.8317- 0.1666) 100%=0% ? CoHL=(0.1634-0.1666)/(0.8317-0.1666)100%=- 0.4% ? 結(jié)論：交叉污染率符合要求

18、 123()/30.8317HHH? 234()/30.1666LLL? 溫度正確度 ? 用分度值小于0.1專用測(cè)溫裝置，測(cè)定比色杯 的設(shè)定溫度，當(dāng)儀器升到設(shè)定溫度范圍內(nèi)，每 隔30s記錄一次溫度，連續(xù)測(cè) 10次，計(jì)算平均 值。Fluke 1521 點(diǎn)溫度計(jì)（0.001C）。 類級(jí)溫度準(zhǔn)確度 一、二 A 0.1 B0.3 C0.5 137.182 0.182 937.079 0.079 2137.069 0.069 2937.112 0.112 4137.069 0.069 4937.035 0.035 6136.993 -0.007 6937.028 0.028 8137.020 0.020

19、 8937.069 0.069 10137.088 0.088 11937.053 0.053 12137.095 0.095 12937.125 0.125 14136.977 -0.023 14937.062 0.062 15136.811 -0.089 15937.045 0.045 杯號(hào)溫度溫度差杯號(hào) 溫度溫度差 極差0.205 比色杯間差距 以重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣本，在波長(zhǎng) 340nm ，吸光度為 0.30.5, 以蒸餾水 為空白,每比色杯重復(fù)測(cè)定 3次，平均吸 光度值應(yīng)小于0.05（Olympus) 。 杯號(hào)杯號(hào)A A 杯號(hào)A A杯號(hào)杯號(hào)A A杯號(hào)杯號(hào)A A 1 10.403 11

20、0.401121210.401631310.4043 20.4018 120.404722220.409332320.4031 3 30.4033 130.410523230.404333330.4112 4 40.4047 140.40524240.407634340.4043 5 50.4088 150.405425250.411135350.4154 6 60.4089 160.404926260.396436360.407 7 70.4126 170.405827270.404137370.4093 8 80.4023 180.402328280.405338380.4081 90.4

21、052 190.411229290.407339390.408 10100.4023 200.409130300.40240400.4146 杯號(hào)杯號(hào)A A 杯號(hào)A杯號(hào)A杯號(hào)A 410.4173 510.4184610.4003710.4052 420.4142 520.4201620.4037720.4053 430.4147 530.4188630.4062730.3989 440.4134 540.4092640.4038740.4043 450.4213 550.4034650.4045750.3989 460.4066 560.4025660.403760.4011 470.4025

22、 570.4136670.3981770.4042 480.4115 580.4083680.4019780.4052 490.4192 590.4116690.4037790.4031 500.4132 600.4031700.4046800.3979 杯號(hào)杯號(hào)A A 杯號(hào)A A杯號(hào)杯號(hào)A A杯號(hào)A A 81810.4014 910.40430.40431010.40271110.40770.4077 82820.4078 920.40270.40271020.40491120.40290.4029 83830.4022 930.40380.40381030.40141130.403 848

23、40.4077 940.40250.40251040.40411140.39960.3996 85850.4041 950.40430.40431050.39921150.40230.4023 86860.4014 960.40330.40331060.40231160.40260.4026 870.4093 970.39980.39981070.40621170.40250.4025 88880.4049 980.40230.40231080.40391180.40080.4008 89890.4016 990.40410.40411090.4051190.40270.4027 90900.

24、4072 1000.4021100.4051200.3958 杯號(hào)杯號(hào)A A 杯號(hào)A A杯號(hào)A A杯號(hào)杯號(hào)A A 1211210.4097 1310.40031410.40230.40231511510.403 1221220.4012 1320.40431420.40580.40581521520.4035 1231230.4033 1330.40641430.40540.40541531530.4045 1240.4064 1340.4031440.40310.40311541540.4047 1251250.403 1350.40181450.40120.40121551550.4101

25、 1261260.4039 1360.40391460.39790.39791561560.403 1270.3995 1370.40031470.39940.39941571570.4031 1281280.4166 1380.40061480.41540.41541581580.4014 1291290.402 1390.40261490.41240.41241591590.4049 1301300.4004 1400.40411500.40120.40121601600.4116 極差=0.4213-0.3958=0.0255 2.試劑的準(zhǔn)備 ? 試劑是否獲準(zhǔn)入 是否有SFDA證書 ?

26、試劑的性能驗(yàn)證 精密度 線性 延遲時(shí)間（如果有） 空白對(duì)照 3. 水的準(zhǔn)備：用一級(jí)水 三、校準(zhǔn)過程中需注意的問題 ?校準(zhǔn)品：是否可溯源？配套？互換性？ ?處理：低溫冷凍、凍干品？（復(fù)溶條件？瓶間差問 題？） ?測(cè)幾個(gè)水平校準(zhǔn)品：不同水平校準(zhǔn)品K值是否一致？ ?校準(zhǔn)品測(cè)量次數(shù)：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？取平均K值？ ?空白測(cè)量：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)周期：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)的核查：是否有核查程序？ 英國(guó)RANDOX公司公司“人基質(zhì)復(fù)合校準(zhǔn)血清人基質(zhì)復(fù)合校準(zhǔn)血清” ? 以人血清為基質(zhì) ? 根據(jù)德國(guó)臨床化學(xué)協(xié)會(huì)的規(guī)定賦值 ? 由全球3000多家參考實(shí)驗(yàn)室賦值，每種儀器至少 由10家實(shí)驗(yàn)室賦值 ?

27、 復(fù)溶條件:2025,30分鐘 ? 對(duì)CO2、ACP與ALP有特殊要求 ? 未提供不確定度 ? 所有測(cè)量系統(tǒng)的值均一樣 德國(guó)DiaSys公司“人基質(zhì)復(fù)合校準(zhǔn)血清” TruLab N 、 TruLab P 和TruCal U ? 以人血清為基質(zhì) ? 根據(jù)德國(guó)臨床化學(xué)協(xié)會(huì)的規(guī)定賦值 ? 復(fù)溶條件: 25,30分鐘（ALP 2小時(shí)） 美國(guó)Roche公司 C.f.a.s (Calibrator for automated systems ) ? 適用于Roche 系統(tǒng)的Roche 方法 ? 在人基質(zhì)血清中加入了人及各種動(dòng)物來源的組份 ? 加入穩(wěn)定劑 ? 在Roche 規(guī)定的嚴(yán)格的條件下，由 Roche

28、 的主校 準(zhǔn)品賦值 ? 復(fù)溶條件:2025,30分鐘 美國(guó)Beckman公司(Synchon Multi Calibrator ) ? 適用于Synchon試劑 ? 加入穩(wěn)定劑 ? 溯源至NIST ? 液態(tài)，不需復(fù)溶 美國(guó)Bio-Rad公司控制品 ? 以人血清基質(zhì) ? 可任選液體/干粉、定值/不定值產(chǎn)品 ? 液體不含甘油和乙二醇 ? 提供任何儀器/試劑的定值 ? 多個(gè)品種、包裝、濃度可供選擇 ? 美國(guó)FDA認(rèn)證 某國(guó)產(chǎn)檢測(cè)系統(tǒng)（X）分別與羅氏C.fas 校準(zhǔn)品(Y1)、與朗 道Level2校準(zhǔn)品(Y2)、與朗道Level3校準(zhǔn)品(Y3)比較 三、校準(zhǔn)過程中需注意的問題 ?校準(zhǔn)品：是否可溯源？配

29、套？互換性？ ?處理：低溫冷凍、凍干品？（復(fù)溶條件？瓶間差問題？ 加溶劑的準(zhǔn)確性） ?測(cè)幾個(gè)水平校準(zhǔn)品：不同水平校準(zhǔn)品K值是否一致？ ?校準(zhǔn)品測(cè)量次數(shù)：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？取平均K值？ ?空白測(cè)量：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)周期：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)的核查：是否有核查程序？ x %CV CK 校準(zhǔn)測(cè)定 天數(shù)s1ABsKK * 1356858571325750657282 2358163596945964359387 3353774540575391653632 4454157551785460854371 56367 s2354 4.2% 室溫復(fù)溶條件下校準(zhǔn)CK x %CV CK 校準(zhǔn)測(cè)定

30、 天數(shù)s1ABsKK * 1455474557175596156107 2455474557425525555255 3355746567975657756015 4355474555965518255060 55772 s550 1.0% 標(biāo)準(zhǔn)化復(fù)溶條件下校準(zhǔn)CK （置于1820水溫下復(fù)溶305min） 校準(zhǔn)品處理的注意點(diǎn) ?必須將復(fù)溶條件標(biāo)準(zhǔn)化。雖不會(huì)對(duì)所有被測(cè)物 產(chǎn)生影響，但對(duì)CK、脂蛋白會(huì)產(chǎn)生較大影響。 應(yīng)有嚴(yán)格SOP。 ?加樣的重復(fù)性（0.4%） ?是否有瓶間差，值得研究（0.5%） ?注意排除離群值。 ?嚴(yán)格控制校準(zhǔn)條件，將 K值CV控制在1%內(nèi)。 （制定校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)） x %CV

31、LDH 校準(zhǔn)測(cè)定 天數(shù)s1AbsKK* 1289035900889074690482 2188646888648899589126 3289035903079008889956 4288646881668633188078 89536 s930 1.0% 標(biāo)準(zhǔn)化復(fù)溶條件下校準(zhǔn)LDH 差.6% 三、校準(zhǔn)過程中需注意的問題 ?校準(zhǔn)品：是否可溯源？配套？互換性？ ?處理：低溫冷凍、凍干品？（復(fù)溶條件？瓶間差問 題？） ?測(cè)幾個(gè)水平校準(zhǔn)品：不同水平校準(zhǔn)品 K值是否一致？ ?校準(zhǔn)品測(cè)量次數(shù)：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？取平均K值？ ?空白測(cè)量：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)周期：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)的核查：是否

32、有核查程序？ ? 在ISO 11095:1996 基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn) （GB/T 22554-2010 ）中確定，對(duì)于基本校準(zhǔn) 方法的最少校準(zhǔn)點(diǎn)/水平是3個(gè)。 ? EURACHEM “ 分析方法的目標(biāo)適用性 ”指南規(guī)指南規(guī) 定：對(duì)于校準(zhǔn)，包括空白至少 6個(gè)濃度水平。 ? Commission Decision 2002/657/EC規(guī)定：建 立一個(gè)校準(zhǔn)曲線，包括零濃度至少需要 5個(gè)濃度水 平。 ? ISO 11095:1996 認(rèn)為校準(zhǔn)系統(tǒng)的有效性檢查， 至少有2個(gè)、最好是3個(gè)校準(zhǔn)水平通過控制圖監(jiān)控 校準(zhǔn)的有效性。 三、校準(zhǔn)過程中需注意的問題 ?校準(zhǔn)品：是否可溯源？配套？互換性？ ?處理：低溫冷凍、凍干品？（復(fù)溶條件？瓶間差問 題？） ?測(cè)幾個(gè)水平校準(zhǔn)品：不同水平校準(zhǔn)品K值是否一致？ ?校準(zhǔn)品測(cè)量次數(shù)：對(duì)校準(zhǔn) K值的影響？取平均 K值？ ?空白測(cè)量：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)周期：對(duì)校準(zhǔn)K值的影響？ ?校準(zhǔn)的核查：是否有核查程序？ x %CV LDH 校準(zhǔn)測(cè)定 天數(shù)s1AbsKK* 12890359