免疫組化在腫瘤病理診斷中的應用

1、免疫組化在腫瘤病理 診斷中的應用 牛牛文庫文檔分享 免疫組織（或細胞）化學技術是免疫學與組織化學兩種技術的結合，它的基本 原理是應用抗原與抗體的特異性結合，再用顯色劑顯色達到標記細胞的某種抗原 物質(zhì)的定性與定位檢測技術，是一種方法簡單，且有效的腫瘤標記技術。 當前在免疫組化技術圍繞著提高敏感性與特異性不斷改進和發(fā)展，但它仍有 其局限性應用于蛋白水平，敏感性與特異性不足，故應與其他組織化學、電 鏡及分子生物學技術相結合。 牛牛文庫文檔分享 一、免疫組化在診斷中的應用原則 1防止假陽性與假陰性，防止操作中的污染，規(guī)范操作，設陽性與陰性對照。 2選用2種以上同類抗體：目前腫瘤均為相關抗原，特異性不足

2、，多種同類抗體 可提高陽性率。 3正確評價免疫組化的結果：其結果受抗體、特異性與質(zhì)量、操作、標本固定 等多種因素影響。 牛牛文庫文檔分享 4合理的選擇抗體：既要符合設計的要求，價廉物美，分1、2、3線抗體。 5待檢標本抗原保存要好：要求快速、新鮮、充份的固定，合適固定劑，福爾馬 林液固定標本要修復抗原。 牛牛文庫文檔分享 二、免疫組化在腫瘤診斷中的應用 （一）上皮性腫瘤標記 1角蛋白（Keratin）：一種中間絲蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermal keratin，EK）鱗狀上皮或高分化鱗癌標記；（2）細胞角蛋白（cytokeratin， CK）低分子角蛋白，對腺癌、移行細胞部及低分化

3、鱗癌標記。一般用廣譜型 角蛋白抗體為好，常用。 牛牛文庫文檔分享 2上皮膜抗原（Epithelial membrane antigen，EMA）：這亦是常用的上皮細 胞標記抗體，細胞膜陽性，用Zankers、Bouin或B5固定液中固定為好。其在低 分化和未分化上皮中表達好，但亦可在間變性大細胞淋巴瘤、惡性橫紋肌樣瘤中 表達。 3橋粒蛋白（Desmoplakin）：主要標記上皮橋粒，Desmo僅表達于復層上 皮。 牛牛文庫文檔分享 4癌胚抗原（Carcinoembrgonic antigen，CEA）：是從結腸癌中分離而得一種 球蛋白，定位于細胞膜上，對腸、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌標記陽性，

4、但個 別非上皮腫瘤也可陽性。 5甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）：由胎肝細胞提取的一種酸性糖蛋白， 細胞漿和膜上表達，它對肝細胞癌、卵黃囊癌的特異性標記。睪丸 牛牛文庫文檔分享 （二）間葉源性腫瘤免疫組化標記 間葉組織包括纖維結締組織、脂肪、肌肉、血管、骨、軟骨及外周神經(jīng)等，間葉 組織腫瘤往往由多向分化的原始間葉細胞產(chǎn)生，存在共性，標記抗體特異性不足， 有交叉反應。 1波紋蛋白（Vimentin，Vim）：是一種細胞中間絲蛋白抗體，在多數(shù)軟組織 腫瘤均可表達，但纖維細胞較明顯，在一些上皮性腫瘤也有陽性反應。常用作間 葉源與上皮源腫瘤的第一線鑒別抗體 牛牛文庫文檔分享 2結

5、蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽性。 3肌動蛋白（Actin）：平滑肌、血管內(nèi)皮、肌上皮細胞標記，HHF35特異。 4肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對橫紋肌標記較好。 5第因子，CD34：對血管內(nèi)皮細胞腫瘤標記較特異。 牛牛文庫文檔分享 6S-100蛋白：是一種周圍神經(jīng)雪旺氏細胞特異標記抗體，后發(fā)現(xiàn)對脂細胞、 朗格罕氏細胞、肌上皮細胞、黑色素細胞及其腫瘤均可陽性。 7酸性或堿性磷酸酶：對骨與軟骨腫瘤標記好。 牛牛文庫文檔分享 （三）雙向分化腫瘤標記 即有上皮與間葉兩種細胞分化的腫瘤的標記，如滑膜肉瘤、間皮肉瘤、腦 膜瘤、癌肉瘤、上皮樣肉瘤等，一般采

6、用CK、EMA標記上皮，Vim等標記間葉 細胞。另外有一種惡性纖維組織細胞瘤，由纖維細胞、肌纖維母細胞和組織細胞 混合組成的惡性腫瘤，故應用Vim和組織細胞標記來診斷。 牛牛文庫文檔分享 （四）神經(jīng)細胞、膠質(zhì)細胞及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標記 1神經(jīng)原特異性烯醇化酶（Neuron Specific Enolase，NSE）：神經(jīng)原腫瘤標 記。 2膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial Fibrillaly Acidic protein，GFAP）：腦膠質(zhì)細胞特 異性標記抗體。CD34+F8血管 牛牛文庫文檔分享 3神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標記：包括類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚 Merkel細胞癌、原始神經(jīng)外胚層瘤

7、（PNET）等，目前應用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A （CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時或兩種一起用，因NSE不夠特異。 牛牛文庫文檔分享 （五）淋巴網(wǎng)狀組織腫瘤（淋巴瘤）標記 1B細胞標記抗體：CD20（L26），Ig重鏈（IgG、M、A、E）、輕鏈（、）、 CD79a。 2T細胞標記抗體：CD45RO（UCHL-1），CD3較好。CD56 3組織細胞標記抗體：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶 （-1 Antichymotrypsin）等。 牛牛文庫文檔分享 4霍奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma，HL）R-S細胞（Reed-Sternberg c

8、ell） 標記抗體：CD15、CD30 5白細胞共同抗原（leucocyte common Antigen，LCA）：它對淋巴網(wǎng)狀細胞均 為膜陽性，作第一線抗體為好。 注：（1）國際上將百余種標記抗體統(tǒng)稱為CD（Cluster Designation）系列。 （2）淋巴細胞標記與R-S細胞多數(shù)為膜陽性，而Ig與組織細胞標記為胞漿 陽性。 牛牛文庫文檔分享 （六）腫瘤細胞增殖活性與細胞凋亡標記抗體 瘤細胞增殖指數(shù)反應細胞增殖活性，是瘤細胞新生（惡性）狀況的客觀指標， 與凋亡指數(shù)呈反比關系。常用抗體有： 1增殖細胞核抗原（proliferative neuclear Antigen，PCNA），核

9、陽性。 2Ki-67，Brdu抗體：原要求新鮮組織，新近有Ki-67石蠟切片標記抗體問世。 牛牛文庫文檔分享 3細胞凋亡（Apoptosis）標記抗體：開始發(fā)現(xiàn)細胞凋亡發(fā)生于正常細胞受基 因調(diào)控性自然性死亡。后發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞亦可發(fā)生，而且某些藥物放、化療亦可 誘發(fā)細胞凋亡，故成了研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療的熱點。其標記抗體有： （1）凋亡抑制基因蛋白抗體：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。 （2）促凋亡基因蛋白抗體：Fas/FasL系統(tǒng)，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。 Tunel標記。 牛牛文庫文檔分享 （七）癌基因與抗癌基因，促轉移與轉移抑制基因蛋白抗體標記。 目前應用很多，因

10、方法比分子生物學技術簡單，但是這種結果不能直接反應腫 瘤基因的活性，只能間接反應腫瘤基因代謝活性，要注意正確評價它的價值。 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 牛牛文庫文檔分享 二、免疫組化在腫瘤診斷中的應用 （一）上皮性腫瘤標記 1角蛋白（Keratin）

11、：一種中間絲蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermal keratin，EK）鱗狀上皮或高分化鱗癌標記；（2）細胞角蛋白（cytokeratin， CK）低分子角蛋白，對腺癌、移行細胞部及低分化鱗癌標記。一般用廣譜型 角蛋白抗體為好，常用。 牛牛文庫文檔分享 （二）間葉源性腫瘤免疫組化標記 間葉組織包括纖維結締組織、脂肪、肌肉、血管、骨、軟骨及外周神經(jīng)等，間葉 組織腫瘤往往由多向分化的原始間葉細胞產(chǎn)生，存在共性，標記抗體特異性不足， 有交叉反應。 1波紋蛋白（Vimentin，Vim）：是一種細胞中間絲蛋白抗體，在多數(shù)軟組織 腫瘤均可表達，但纖維細胞較明顯，在一些上皮性腫瘤也有陽性反應。常用作間 葉源與上皮源腫瘤的第一線鑒別抗體 牛牛文庫文檔分享 2結蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽性。 3肌動蛋白（Actin）：平滑肌、血管內(nèi)皮、肌上皮細胞標記，HHF35特異。 4肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對橫紋肌標記較好。 5第因子，CD34：對血管內(nèi)皮細胞腫瘤標記較特異。