尿酮體尿膽紅素尿膽原尿血紅蛋白尿肌紅蛋白乳糜尿定性檢查

1、邱群鳳邱群鳳 2016 Mar. 龍巖市第一醫(yī)院龍巖市第一醫(yī)院 當機體能量代謝發(fā)生障礙，脂 肪分解代謝增加，血中酮體升高，過 多的酮體從尿中排出，稱為酮尿。 實驗一實驗一 尿酮體改良尿酮體改良rotherarothera法定性檢查法定性檢查 (羅瑟拉) 實驗一實驗一 尿酮體改良尿酮體改良rotherarothera法定性檢查法定性檢查 【原理】【原理】 本法對本法對 乙酰乙酸乙酰乙酸 靈敏度為靈敏度為80mg/L80mg/L 丙酮丙酮 靈敏度為靈敏度為 1000mg/L1000mg/L + +亞硝基鐵氰化鈉亞硝基鐵氰化鈉 紫色化合物紫色化合物 丙酮丙酮 乙酰乙酸乙酰乙酸 堿性條件 堿性條件 亞

2、硝基鐵氰化鈉法亞硝基鐵氰化鈉法( (改良改良rotherarothera法法) ) 【操作】（詳見實驗課本【操作】（詳見實驗課本 P96 P96 ） 1加酮體粉 : 1小勺 2滴加尿液 : 23滴,沒過酮體粉為宜 3觀察結果 : 如下規(guī)則 立即出現深紫色立即出現深紫色強陽性強陽性 + 立即呈現淡紫色后漸轉深紫色立即呈現淡紫色后漸轉深紫色陽性陽性 + 逐漸呈現淡紫色逐漸呈現淡紫色 弱陽性弱陽性 + + 5min5min內無紫色出現內無紫色出現 陰性陰性- - 【干擾因素干擾因素】 假陽性假陽性 較多肌酐、肌酸，高色素尿， 酞、苯丙酮、左旋多巴代謝物 假陰性假陰性 標本收集和保存不當； 亞硝基鐵氰

3、化鈉對溫度、熱度或光線很 靈敏； 試帶受潮失活。 【注意事項】【注意事項】 1.試劑配制要準確,易受潮,應密閉、干燥保存； 2.乙酰乙酸不穩(wěn)定,丙酮易揮發(fā),使用新鮮尿液； 3.控制反應溫度,實驗室溫度過低時在30水浴箱中 完成； 4.存在大量非結晶尿酸鹽時，可能出現橙色反應影 響結果判斷，離心除去。 實驗二實驗二 尿膽紅素尿膽紅素HarrisonHarrison法定性檢查法定性檢查 膽紅素膽紅素+ +氯化鋇氯化鋇沉淀沉淀+ +三價鐵三價鐵膽青素膽青素/ /膽綠素膽綠素/ /膽黃素膽黃素 ( (藍綠色藍綠色/ /綠色或黃綠色或黃綠色綠色) ) 酸性條件酸性條件 【原理】【原理】 (哈里森) 【操

4、作】（詳見實驗課本【操作】（詳見實驗課本 P97 P97 ） 1.加尿液: 加尿液5ml 2.吸附膽紅素: 加2.5ml氯化鋇溶液于尿中 混勻離心35min棄上清液 3.加試劑: 向沉淀表面加Fouchet試劑2滴放 置片刻,觀察沉淀表面顏色變化 4.判斷結果 沉淀即刻變?yōu)樗{綠色沉淀即刻變?yōu)樗{綠色強陽性強陽性+ 沉淀變?yōu)榫G色沉淀變?yōu)榫G色 陽性陽性+ 沉淀逐漸變?yōu)榈G色沉淀逐漸變?yōu)榈G色 弱陽性弱陽性 + + 長時間不變色長時間不變色 陰性陰性- - 【結果判斷】【結果判斷】 【干擾因素干擾因素】 假陽性假陽性水楊酸、阿司匹林、牛黃水楊酸、阿司匹林、牛黃紫紅色紫紅色 干擾干擾HarrisonHa

5、rrison法法. . 假陰性假陰性標本標本保存不當（未避光）保存不當（未避光） FouchetFouchet試劑加入的量不準確試劑加入的量不準確 【注意事項】【注意事項】 1. 使用新鮮尿液,避光收集,堿性尿液先酸化; 2. 保證硫酸根離子充足,確保能產生沉淀; 3. 嚴格控制加入Fouchet試劑量; 4. 注意可能影響結果藥物的因素; 5. 改實驗法優(yōu)點:靈敏度較高,0.9umpl/L 實驗三實驗三 尿膽原改良尿膽原改良EhrlichEhrlich法定性檢查法定性檢查 【原理】【原理】 尿膽原尿膽原+ +對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛櫻紅色櫻紅色化合物化合物 簡單快速，分析儀，定性或定

6、量；簡單快速，分析儀，定性或定量； 不同試帶靈敏度不同（不同試帶靈敏度不同（1-4mg/L1-4mg/L）。）。 偶氮反應試帶不受膽紅素影響，對尿膽原特異偶氮反應試帶不受膽紅素影響，對尿膽原特異。 方法學評價方法學評價 (埃利希) 酸性條件酸性條件 【操作】（詳見實驗課本【操作】（詳見實驗課本 P99 P99 ） 1.加入氯化鋇除去膽紅素: 尿液與Bacl2比例為 4:1 2.加尿液:加尿液shang qing ye 2ml 3.加試劑:加EhrlichEhrlich試劑0.2ml,室溫下靜置10min 4.觀察結果:在白色襯紙下,從管口向管底觀察顏色變化 5.稀釋陽性標本并重復操作 ( P9

7、9 ) 不變色不變色,加溫后無反應加溫后無反應陰性陰性- 10min后呈微紅色后呈微紅色 弱陽性弱陽性 + + 10min后呈櫻紅色后呈櫻紅色 陽性陽性+ 立即呈深紅色立即呈深紅色 強陽性強陽性+ 【結果判斷】【結果判斷】 干擾因素評 價 標本因素標本久置，尿膽原氧化為尿膽素-假陰性 尿膽原含量 與飲水量、排尿時間、尿液PH有關 藥物因素 假陽性：吩噻嗪類、氯丙嗪類、磺胺類、普魯 卡因 假陰性：大量VitC、長期服用廣譜抗生素。 內源性物 質 假陽性：卟膽原、吲哚、膽紅素紅色。 【干擾因素干擾因素】 EhrlichEhrlich醛反應醛反應 【注意事項】【注意事項】 1尿液標本避光收集 2.

8、尿膽原與飲水量,排尿時間,pH的關系 3. 控制試劑與標本比例 4. 注意實驗溫度 5. 尿液標本中含有影響結果的物質 6. 稀釋陽性標本時不高于1:160 7. Ehrlich試劑與尿液的比例應控制在10:1 實驗四實驗四 尿血紅蛋白鄰聯(lián)甲苯胺法定性檢查尿血紅蛋白鄰聯(lián)甲苯胺法定性檢查 尿液中尿液中HbHb來源：來源： 血管內溶血血管內溶血 尿路出血尿路出血 正常人血漿中游離正常人血漿中游離HbHb微量微量(50mg/L),(50mg/L),與結合珠與結合珠 蛋白形成蛋白形成Hb-HpHb-Hp復合物，在單核復合物，在單核- -巨噬細胞系統(tǒng)巨噬細胞系統(tǒng) 代謝，故尿中代謝，故尿中HbHb極微。定

9、性：陰性極微。定性：陰性 驗證尿液潛在出血的試驗驗證尿液潛在出血的試驗: : 隱血試驗隱血試驗(occult blood test) 【原理】【原理】 H H2 2O O2 2 亞鐵血紅素亞鐵血紅素 O(氧化) （色素原）（色素原） 【操作】（詳見實驗課本【操作】（詳見實驗課本 P101 P101 ） 1.滴加尿液：先滴1滴在濾紙上 2.烘干濾紙：烘干后痕跡處繼續(xù)滴1滴尿液,反復34次 3.加試劑:鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液23滴,再滴3%過氧化氫 23滴 4.觀察結果:立即觀察顏色變化 加入試劑后立即出現黑褐色加入試劑后立即出現黑褐色+ 加入試劑后立即出現藍褐色加入試劑后立即出現藍褐色 + 加入試

10、劑后由淺藍褐色逐漸變?yōu)槊黠@的藍褐色加入試劑后由淺藍褐色逐漸變?yōu)槊黠@的藍褐色 + 加入試劑后加入試劑后10s10s由淺藍色逐漸變?yōu)樗{色由淺藍色逐漸變?yōu)樗{色 + + 加入試劑加入試劑2min2min后仍不顯色后仍不顯色- - 【結果判斷】【結果判斷】 【注意事項】【注意事項】 1.器材合格: 濾紙質量優(yōu)良,試驗用具無血跡或膿液 2.標本新鮮: 可先煮沸,以破壞白細胞中的過氧化氫酶及其他 易熱性觸酶 3. 烘干濾紙: 應少量多次并保證標本量足夠 4.保證試劑有效 5.控制試劑劑量 實驗五實驗五 尿肌紅蛋白鄰聯(lián)甲苯胺法定性檢查尿肌紅蛋白鄰聯(lián)甲苯胺法定性檢查 【原理】【原理】 肌紅蛋白和血紅蛋白一樣，分

11、子中含肌紅蛋白和血紅蛋白一樣，分子中含血紅素基因血紅素基因， 具有具有類過氧化物酶類過氧化物酶活性能用聯(lián)苯胺和鄰聯(lián)甲苯胺與活性能用聯(lián)苯胺和鄰聯(lián)甲苯胺與 過氧化氫反應檢出過氧化氫反應檢出 肌紅蛋白能肌紅蛋白能溶于溶于80%80%飽和度的硫酸銨溶液中而血紅飽和度的硫酸銨溶液中而血紅 蛋白則不能，因而可鑒別蛋白則不能，因而可鑒別 【操作】（詳見實驗課本【操作】（詳見實驗課本 P102 P102 ） 1. 以磺基水楊酸定性尿蛋白 2. 以鄰聯(lián)甲苯胺法定性血紅蛋白 3. 加尿液,加入硫酸銨沉淀血紅蛋白 4. 再次定性血紅蛋白 5. 判斷結果 血紅蛋白血紅蛋白沉淀為藍色沉淀為藍色, , 上清液正常上清液正

12、常 肌紅蛋白肌紅蛋白 上清液為藍色上清液為藍色, , 無藍色沉淀無藍色沉淀 血紅蛋白血紅蛋白+ +肌紅蛋白肌紅蛋白上清液出現藍色上清液出現藍色, , 沉淀亦出現藍色沉淀亦出現藍色 【注意事項】【注意事項】 1. 標本新鮮 2. 加入硫酸銨應緩慢,防局部溫度過高,將肌紅蛋白 一并沉淀 3. 可用NaOH調節(jié)pH至7.07.5 實驗六實驗六 乳糜尿定性檢查乳糜尿定性檢查 【原理】【原理】 乳糜由乳糜由脂肪微粒脂肪微粒組成組成, ,可溶于可溶于乙醚乙醚, ,較大脂?？赏ㄟ^較大脂粒可通過 脂溶性染料脂溶性染料蘇丹蘇丹3 3著色識別著色識別, ,而脂肪被而脂肪被萃取萃取而使尿液而使尿液 由乳濁變澄清由乳濁變澄清. .為乳