CountstarRigel全自動(dòng)細(xì)胞熒光分析儀對(duì)PBMC細(xì)胞精確計(jì)數(shù)及活力分析

1、Countstar Rigel全自動(dòng)細(xì)胞熒光分析儀對(duì)PBMC細(xì)胞精確計(jì)數(shù)及活力分析一. PBMC細(xì)胞濃度與活力分析的重要性 外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)即外周血中具有單個(gè)核 的細(xì)胞，主要包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和其他少量細(xì)胞類(lèi)型，是 機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重耍細(xì)胞組成。PBMC是免疫學(xué)、抗體藥物研發(fā).傳染病、惡性血液 腫瘤疾病、干細(xì)胞移植、疫苗開(kāi)發(fā)以及移植免疫等領(lǐng)域?qū)W者經(jīng)常需要的研究原材料。PBMC 的濃度、活力、免疫細(xì)胞亞型分布及細(xì)胞因子等都是監(jiān)測(cè)機(jī)體免疫狀態(tài)及其他領(lǐng)域研究的 重要指標(biāo)。所以如何精確計(jì)數(shù)PB

2、MC細(xì)胞在科研和臨床上都有重耍的意義。二、目前PBMC細(xì)胞分離.計(jì)數(shù)的方法與痛點(diǎn)K根據(jù)外周血各種血細(xì)胞的密度不相同，PBMC細(xì)胞分離方法主耍密度梯度離心法，然后 根據(jù)實(shí)際情況添加紅細(xì)胞裂解液除去部分殘留紅細(xì)胞。2、由于個(gè)體及分離效果差異，導(dǎo)致分離后的PBMC樣本中紅細(xì)胞和血小板的殘留程度不 同。用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)是最簾見(jiàn)的一種計(jì)數(shù)方法，由于顯微鏡下觀察紅細(xì)胞與 PBMC細(xì)胞大小差異不大，肉眼很難辨別，經(jīng)驗(yàn)豐富的操作者需通過(guò)不停調(diào)節(jié)焦距觀察紅細(xì) 胞的雙凹狀的形態(tài)來(lái)區(qū)分。這個(gè)過(guò)程無(wú)疑造成了非常大的匸作量及誤差。3、目前常用的計(jì)數(shù)方法包括血球計(jì)數(shù)板臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法、庫(kù)爾特法及熒光細(xì)胞計(jì)數(shù) 法

3、。其中臺(tái)盼藍(lán)染色法與庫(kù)爾特法均無(wú)法很好的區(qū)分紅細(xì)胞與白細(xì)胞。三、Countstar Rigel細(xì)胞熒光分析儀對(duì)PBMC細(xì)胞精確計(jì)數(shù)及活力分析原理：利用AO/PI雙熒光染色法進(jìn)行PBMC死活細(xì)胞精確計(jì)數(shù)。U丫唏橙(Acridine orange, AO)和碘化丙唳(propidiumiodide, PI)都可以對(duì)死、活細(xì)胞核中的DNA進(jìn)行染 色。所以該方法可以排除無(wú)核的細(xì)胞碎片、成熟的血小板及紅細(xì)胞干擾，從而更準(zhǔn)確計(jì)數(shù) PBMC細(xì)胞。(1) Countstar Rigel 對(duì) PBIC 的計(jì)數(shù)結(jié)果AOPIFigure 1分離后PBitC細(xì)胞汁數(shù)圖片S.00E4OG7-00E4O66.00E406

4、5.00E4064-OOE40S3.00640$2.00EP61.00E-W6O.0OE-H3O0,20406081.2Li Z 65細(xì)胞濃度）總細(xì)胞濃度活細(xì)胞濃鷹Lined總細(xì)胞濃度）Figure 2分離后PBMC細(xì)胞梯度稀釋后線性結(jié)果(2) Countstar Rigel對(duì)全血樣本中PBMC細(xì)胞濃度及活率進(jìn)行分析PIFigure 3全幗PbHC細(xì)胞汁數(shù)圖片Table 1全血樣木濃度及活率重復(fù)性檢測(cè)結(jié)來(lái)全血A樣本活率總PBMC細(xì)胞濃度活PBMC細(xì)胞濃度1+06+062+06+063+06+064+06+065+06t+06CV%Bright fieldMerge四. 總結(jié)Countstar Rigel：1.快速.精確計(jì)數(shù)和活率檢測(cè):2、高重復(fù)性;3. CCD的相機(jī)，可以有效排除背景雜信號(hào)干擾;4、同時(shí)拍攝明場(chǎng)和熒光場(chǎng)的圖片，相結(jié)合起來(lái)驗(yàn)證熒光結(jié)果;5、軟件系統(tǒng)的數(shù)據(jù)管理和控制性能完全符合GMP和FDA 21 CFR Part 11法規(guī)Countstar Rigel數(shù)據(jù)記錄符合FDA CFR21 Partll數(shù)據(jù)可進(jìn)行審