孕前遺傳學實驗室流程和臨床意義

1、孕前遺傳學實驗室流程和孕前遺傳學實驗室流程和 臨床意義臨床意義 沛縣人口和家庭公共服務中心沛縣人口和家庭公共服務中心 醫(yī)學遺傳學實驗圍繞人外周血染色體制備、醫(yī)學遺傳學實驗圍繞人外周血染色體制備、 SCE觀察分析、性狀調(diào)查及皮紋分析等方面的觀察分析、性狀調(diào)查及皮紋分析等方面的 工作，在掌握基本的實驗方法及技能同時引導工作，在掌握基本的實驗方法及技能同時引導 學生制定實驗路線。在實驗中有意識地培養(yǎng)同學生制定實驗路線。在實驗中有意識地培養(yǎng)同 學們規(guī)范操作、仔細觀察和收集數(shù)據(jù)、科學的學們規(guī)范操作、仔細觀察和收集數(shù)據(jù)、科學的 歸納分析等嚴謹、實事求是的科學素養(yǎng)。歸納分析等嚴謹、實事求是的科學素養(yǎng)。 人外

2、周血淋巴細胞染色體標人外周血淋巴細胞染色體標 本制備本制備 實驗一實驗一 n實驗目的實驗目的 n實驗原理實驗原理 n實驗試劑與儀器實驗試劑與儀器 n實驗步驟實驗步驟 n注意事項注意事項 n結(jié)果分析結(jié)果分析 n作業(yè)及思考題作業(yè)及思考題 n了解人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)方法。了解人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)方法。 n熟悉人類染色體的基本形態(tài)特點。熟悉人類染色體的基本形態(tài)特點。 n掌握染色體標本的制備方法。掌握染色體標本的制備方法。 一、實驗目的一、實驗目的 二、實驗原理二、實驗原理 n外周血中的淋巴細胞幾乎都是處在外周血中的淋巴細胞幾乎都是處在G0期或期或G1期，期， 一般情況下是不分裂的。一般情況下是

3、不分裂的。 n當 在 培 養(yǎng) 基 中 加 入 植 物 血 凝 素當 在 培 養(yǎng) 基 中 加 入 植 物 血 凝 素 （phytohemagglutinin, PHA）時，這種小淋）時，這種小淋 巴細胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，并開始進巴細胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，并開始進 行有絲分裂。行有絲分裂。 n經(jīng)過短期培養(yǎng)后，用秋水仙素處理、低滲、固定、經(jīng)過短期培養(yǎng)后，用秋水仙素處理、低滲、固定、 滴片和染色，就可獲得大量中期分裂相的細胞，滴片和染色，就可獲得大量中期分裂相的細胞， 制片后可以清楚地對染色體進行觀察。制片后可以清楚地對染色體進行觀察。 n這種培養(yǎng)方法是這種培養(yǎng)方法是Moorhead

4、于于1960年建立的。年建立的。 n在人類遺傳分析中普遍采用外周血培養(yǎng)的方法在人類遺傳分析中普遍采用外周血培養(yǎng)的方法 獲取分裂的細胞，進而開展臨床和基礎(chǔ)遺傳學獲取分裂的細胞，進而開展臨床和基礎(chǔ)遺傳學 的研究。的研究。 n這對于遺傳疾病的檢出以及遺傳咨詢等工作發(fā)這對于遺傳疾病的檢出以及遺傳咨詢等工作發(fā) 揮了重要作用。揮了重要作用。 n抽濾器、恒溫水浴箱、離心機抽濾器、恒溫水浴箱、離心機 n培養(yǎng)瓶、注射器、移液管、量筒培養(yǎng)瓶、注射器、移液管、量筒 nRPMI1640、小牛血清、小牛血清、NaHCO3、生理鹽、生理鹽 水、肝素、水、肝素、1.0g/L秋水仙素溶液、低滲液秋水仙素溶液、低滲液 （0.0

5、25M KCl）、固定液）、固定液 三、實驗試劑及儀器三、實驗試劑及儀器 1. 植物血凝素植物血凝素 (PHA ) 刺激外周血淋巴細胞從刺激外周血淋巴細胞從G0期返回正常細胞周期。期返回正常細胞周期。 2. 秋水仙素秋水仙素 阻止微管組裝。阻止微管組裝。 中期染色體無法排列赤道板。中期染色體無法排列赤道板。 抑制姐妹染色體的分離，將細胞停留在中期。抑制姐妹染色體的分離，將細胞停留在中期。 目的目的 : 獲得大量的中期細胞。獲得大量的中期細胞。 3. 固定劑固定劑 新配置的甲醇新配置的甲醇 本實驗用玻片法。本實驗用玻片法。 三、三、 常規(guī)性狀的調(diào)查常規(guī)性狀的調(diào)查 1.卷舌性狀調(diào)查卷舌性狀調(diào)查 部

6、分人能夠卷舌：部分人能夠卷舌： 舌的兩側(cè)能夠在舌的兩側(cè)能夠在 口腔中向上卷成口腔中向上卷成 槽行，甚至卷成槽行，甚至卷成 筒狀。卷舌著受筒狀。卷舌著受 顯性基因顯性基因T控制?？刂?。 圖圖2 卷卷 舌舌 1、有卷舌、有卷舌 2、無卷舌、無卷舌 2. 眼瞼性狀調(diào)查：人群中的眼瞼性狀調(diào)查：人群中的 眼瞼可以分為單重眼瞼（單眼眼瞼可以分為單重眼瞼（單眼 皮）和雙重眼瞼（雙眼皮）兩皮）和雙重眼瞼（雙眼皮）兩 種性狀；一般認為雙眼皮是受種性狀；一般認為雙眼皮是受 顯性基因控制，位顯性性狀；顯性基因控制，位顯性性狀； 單眼皮為隱性性狀。單眼皮為隱性性狀。 3.耳垂性狀調(diào)查：人群中依個體不耳垂性狀調(diào)查：人群

7、中依個體不 同，耳朵明顯區(qū)分為有耳垂和無耳同，耳朵明顯區(qū)分為有耳垂和無耳 垂，有耳垂為顯性性狀，受一對等垂，有耳垂為顯性性狀，受一對等 位基因控制，無耳垂的為隱性性狀。位基因控制，無耳垂的為隱性性狀。 4.額前發(fā)際調(diào)查：有些人的額前的發(fā)際明顯的在前額正額前發(fā)際調(diào)查：有些人的額前的發(fā)際明顯的在前額正 中發(fā)際向下延伸呈峰形，成中發(fā)際向下延伸呈峰形，成V字型（又稱美人尖），屬字型（又稱美人尖），屬 于顯性；而額前發(fā)際基本屬于平線的屬于隱性。于顯性；而額前發(fā)際基本屬于平線的屬于隱性。 圖圖3前額中央發(fā)際有一三角形突出稱美人尖前額中央發(fā)際有一三角形突出稱美人尖 1、有美人尖、有美人尖 2、無美人尖、無美

8、人尖 5.發(fā)式和發(fā)旋的調(diào)查：人群中發(fā)式有直發(fā)和卷發(fā)之分，發(fā)式和發(fā)旋的調(diào)查：人群中發(fā)式有直發(fā)和卷發(fā)之分， 其中直發(fā)為隱性性狀，東方人多是此性狀；卷發(fā)屬于其中直發(fā)為隱性性狀，東方人多是此性狀；卷發(fā)屬于 顯性性狀。人群中的發(fā)旋螺紋方向受遺傳因素控制，顯性性狀。人群中的發(fā)旋螺紋方向受遺傳因素控制， 順時針方向為顯性性狀，逆時針為隱性性狀。順時針方向為顯性性狀，逆時針為隱性性狀。 6.拇指端關(guān)節(jié)外展的調(diào)查：人群中某些人的拇指的最拇指端關(guān)節(jié)外展的調(diào)查：人群中某些人的拇指的最 后一節(jié)能夠彎向橈側(cè)，與拇指垂直軸線呈后一節(jié)能夠彎向橈側(cè)，與拇指垂直軸線呈60度，該性度，該性 狀為純合隱性性狀。狀為純合隱性性狀。

9、圖圖4 拇指豎起時彎曲情形拇指豎起時彎曲情形 1、挺直、挺直 2、拇指向指背面彎曲、拇指向指背面彎曲 7.達爾文結(jié)節(jié)的調(diào)查：人群中有些人的耳輪邊緣達爾文結(jié)節(jié)的調(diào)查：人群中有些人的耳輪邊緣 上有一個（或上有一個（或2個及其以上）小的突起成為達爾個及其以上）小的突起成為達爾 文結(jié)節(jié)，該性狀為顯性性狀。文結(jié)節(jié)，該性狀為顯性性狀。 1實驗目的實驗目的 （1）了解皮膚紋理的形成與遺傳的關(guān)系）了解皮膚紋理的形成與遺傳的關(guān)系 （2）掌握皮紋的印取和皮紋的類型）掌握皮紋的印取和皮紋的類型 四四 、 人類皮紋的觀察分析人類皮紋的觀察分析 皮膚紋理皮膚紋理(dermatoglyph)簡稱皮紋。是指人體某簡稱皮紋。

10、是指人體某 些特殊部位，如手指、手掌、腳趾和腳掌等處皮膚些特殊部位，如手指、手掌、腳趾和腳掌等處皮膚 上出現(xiàn)的紋理圖形。它是由真皮乳頭向表皮突起，上出現(xiàn)的紋理圖形。它是由真皮乳頭向表皮突起， 形成的一條條凸起的乳頭線，其上有汗腺開口，稱形成的一條條凸起的乳頭線，其上有汗腺開口，稱 嵴紋嵴紋(ridge)；各嵴紋間凹下的部分稱為溝，這些凸；各嵴紋間凹下的部分稱為溝，這些凸 凹的嵴和溝就構(gòu)成特定的指紋和掌紋。凹的嵴和溝就構(gòu)成特定的指紋和掌紋。 2實驗原理實驗原理 一般認為，人的皮紋終生不變；每個人都有其特一般認為，人的皮紋終生不變；每個人都有其特 定的皮紋，故有種族和個體的差異，因此皮紋長期定的皮

11、紋，故有種族和個體的差異，因此皮紋長期 以來作為偵破案件的手段之一。以來作為偵破案件的手段之一。 大量的研究表明，某些遺傳病，特別是一些染色大量的研究表明，某些遺傳病，特別是一些染色 體病、先天性代謝病和先天畸形等常伴有皮膚紋理體病、先天性代謝病和先天畸形等常伴有皮膚紋理 異常，故皮紋檢查可作為某些遺傳病診斷的輔助指異常，故皮紋檢查可作為某些遺傳病診斷的輔助指 標。標。 3實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 (1)(1)器材和試劑器材和試劑 器材：放大鏡、量角器、直尺、鉛筆、紅色印油器材：放大鏡、量角器、直尺、鉛筆、紅色印油(或黑或黑 色油墨色油墨)、人造海綿墊、搪瓷盤、八開白紙。、人造海綿墊、搪瓷盤、八開白紙

12、。 試劑：試劑：2.5亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鉀KFe(CN)6水溶液、水溶液、2三氯三氯 化鐵化鐵(FeCl3)水溶液。水溶液。 將紅色印油適量地倒入瓷盤的海綿墊上，涂抹均將紅色印油適量地倒入瓷盤的海綿墊上，涂抹均 勻，再將白紙平鋪于桌面或玻璃板上，準備取印。勻，再將白紙平鋪于桌面或玻璃板上，準備取印。 受檢者洗凈雙手，擦干后將手掌按在海綿墊上，受檢者洗凈雙手，擦干后將手掌按在海綿墊上， 使掌面獲得均勻的印油使掌面獲得均勻的印油(注意不要來回涂抹，印油不注意不要來回涂抹，印油不 宜粘得過多宜粘得過多)。 (2)(2)操作步驟操作步驟 取印時先將掌腕線放在白紙上，然后從后向前依掌、取印時先將掌腕線放

13、在白紙上，然后從后向前依掌、 指順序逐步放下，手指自然分開，適當用力按壓手背，指順序逐步放下，手指自然分開，適當用力按壓手背， 尤其是腕部、掌心及手指基部，以免漏印。提起手掌尤其是腕部、掌心及手指基部，以免漏印。提起手掌 時，先將指頭翹起，爾后是掌和掌腕面，這樣便可獲時，先將指頭翹起，爾后是掌和掌腕面，這樣便可獲 得滿意的全掌皮紋。注意，取印皮紋時不可加壓過重，得滿意的全掌皮紋。注意，取印皮紋時不可加壓過重， 不可移動手掌和白紙，以免使皮紋重疊或模糊不清。不可移動手掌和白紙，以免使皮紋重疊或模糊不清。 滾動式印取指紋。將印好的左、右手掌紋紙移至桌滾動式印取指紋。將印好的左、右手掌紋紙移至桌 邊

14、或玻板邊緣，然后在對應的掌紋下方，由左至右依邊或玻板邊緣，然后在對應的掌紋下方，由左至右依 次按印次按印10個手指指尖皮紋。印時，取印的指頭伸直，個手指指尖皮紋。印時，取印的指頭伸直， 其余四指彎曲，將手指由一側(cè)向另一側(cè)輕輕滾動其余四指彎曲，將手指由一側(cè)向另一側(cè)輕輕滾動(切勿切勿 來回滾動，以免圖像重疊來回滾動，以免圖像重疊)，以便將指尖兩側(cè)皮紋印上，以便將指尖兩側(cè)皮紋印上， 記下記下10個指尖的順序。個指尖的順序。 (3)皮紋的觀察皮紋的觀察 v指紋類型指紋類型 v嵴紋計數(shù)嵴紋計數(shù) v掌紋觀察掌紋觀察 v指、掌褶線類型指、掌褶線類型 弓形紋弓形紋箕形紋箕形紋 斗形紋斗形紋 v指紋類型指紋類型

15、 弓型紋弓型紋弓形紋、蓬帳式弓形紋、蓬帳式 弓型紋弓型紋 箕形紋箕形紋尺箕、橈箕尺箕、橈箕 斗形紋斗形紋環(huán)形斗、螺形斗、絞形斗環(huán)形斗、螺形斗、絞形斗 v嵴紋計數(shù)嵴紋計數(shù) ， 主要特征：指三叉點；軸三叉（主要特征：指三叉點；軸三叉（t）；）；atd角；角；t距比距比 v手掌紋手掌紋 atd角：正常人的角：正常人的atd平均為平均為41;t的位置移近掌心，則的位置移近掌心，則 atd增大。增大。atd45 為為t;在在4556 間以間以t表示表示; 56 以以t”表示。表示。 t距比：距比： 可能因年齡或者遺傳病的原因使皮膚萎縮，可能因年齡或者遺傳病的原因使皮膚萎縮， 導致導致atd角測量產(chǎn)生差異。故提出用角測