奶粉中三聚氰胺的測(cè)定方法

1、奶粉中三聚氰胺的測(cè)定方法發(fā)布時(shí)間：2008年9月22日GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺Spectra-Quad實(shí)現(xiàn)三聚氰胺含量在線檢測(cè)超高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中殘留的三聚氰胺反相高效液相色譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺的含量高效液相色譜-二極管陣列法測(cè)定高蛋白食品中的三聚氰胺 高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定飼料中三聚氰胺的含量 高效液相色譜-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定飼料中三聚氰胺含量 固相萃取與高效液相色譜聯(lián)用測(cè)定寵物食品中三聚氰胺 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MSMS）分析寵物食品中三聚氰胺 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺殘留GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺測(cè)定方法本實(shí)驗(yàn)中綜合

2、各方法穩(wěn)定性進(jìn)行比較，主要介紹以下三種： 固相萃取（SPE）方法* HPLC-UV檢測(cè)方法 LC-MS檢測(cè)方法（僅供參考）檢測(cè)中所需的儀器與條件Agile ntllOO高效液相色譜儀(美國(guó)，Agile nt公司)；二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，檢 測(cè)波長(zhǎng)240nm,柱溫：40C。(1) AgelaVenusilTMASBC18(4.6 x 250mm);緩沖液：10mM 檸檬酸,10mM 庚烷磺酸鈉；流 動(dòng)相：緩沖溶液：乙腈 =85: 15;流速：1.0mL/min。(2) AgelaVenusilTMASBC8(4.6 x 250mm);流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85 : 15;緩沖液：10mM

3、檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào) pH為3.0;流速：1.0mL/min ;*離子交換固相萃取柱 AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰爾科技有限公司 )混合型的陽離子交換柱 (Cleanert PCX 60mg/3mL)50支*臺(tái)式高速(微量)離心機(jī) TG16-WS/TG16-W (湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)(1) 角轉(zhuǎn)子：12* 1.5ml; 12* 10ml 轉(zhuǎn)速8000rpm/min，微機(jī)控制可定時(shí)；常溫(2) 離心管：10ml.或 1.5ml (一套)*三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品 1瓶(250mg, 99.5%)*三聚氰胺分析方法手冊(cè)1份其他試劑飼料/奶粉樣品；甲醇、乙腈；氨水、乙酸鉛

4、、三氯乙酸、檸檬酸、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉(Sigma公司)；甲醇為色譜純，其他均為化學(xué)純。理化性質(zhì)三聚氰胺：英文名melamine,簡(jiǎn)稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3:分子量:126.12物理性能：白色結(jié)晶粉末，無毒,無味；相對(duì)密度:1570kg/m3;熔點(diǎn)：在常壓下,354 C分解；升華溫度：300C ;溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳、苯和四氯化碳，水溶液呈弱堿性化學(xué)性能：三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，顯弱堿性，能夠與各種酸反應(yīng)生成三聚酸二酰胺鹽； 在強(qiáng)酸

5、或強(qiáng)堿液中， 三聚氰胺發(fā)生水解， 胺基逐步被羥基取代， 處成三聚氰 酸二酰胺、三聚握酸一酰胺和三聚氰酸；三聚握胺與醛類反應(yīng)生成加成化合物；三聚氰胺與甲醛反應(yīng)制成樹脂，三聚氰胺樹脂，三聚氰樹脂是一種多種用途的材料，防水耐熱且有很高的穩(wěn)定性，用于生產(chǎn)塑料、地板磚，廚房用具，防炎纖維，商業(yè)濾膜，膠水和阻燃劑。固相萃取（SPE）方法1固相萃?。⊿PE）柱的選擇：三聚氰胺呈弱堿性（弱陽離子化合物），凈化過程一般選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱（PCX）通過將磺酸基因（-SO3H ）鍵何在極性高聚物聚苯乙烯 /二乙烯苯（PEP）吸附劑 上，具有陽離子和反相兩種吸附機(jī)理，并具有以下優(yōu)點(diǎn)：1）可通過兩種

6、不同溶液的洗滌（水 /一定pH值的緩沖溶液和有機(jī)溶劑），使樣品更干 凈，提高檢測(cè)的靈敏度。2）批次重復(fù)性好。3）回收率高，重現(xiàn)性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。圖PCX結(jié)構(gòu)式2 樣品前處理步驟：2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品配制：取 50mg 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，以 20% 甲醇溶解定容至 50ml 得到 1000ppm 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用 時(shí)，以提取液（ 1% 三氯乙酸）稀釋至所要的濃度。2.2 提取稱取飼料 /奶粉樣品 5g （或牛奶 10ml ），加入 50ml 1% 三氯乙酸提取液，充分混勻，加入 2ml 2%乙酸溶液，超聲20min。然后取部分溶液轉(zhuǎn)移至10ml離心管中，并將其放置于離心機(jī)中，啟動(dòng)

7、離心機(jī)使轉(zhuǎn)速達(dá)到 8000rpm/min 離心 10min 后，取上清液 3mL 過混合型陽離子交換小柱 （PCX ）。2.3 凈化（ PCX 小柱， 60ml/3ml ）：1 ） 活化及平衡： 3ml 甲醇 ， 3ml 水2）上樣：加入提取液 3ml3）淋洗： 3ml 水； 3ml 甲醇：棄去淋洗液并將小柱抽干。4）洗脫：5ml 5%氨化甲醇（v/v）洗脫。（5%氨化甲醇的配制：5ml氨水+95ml甲醇）。5）濃縮：50 C,氧氣吹干，20%甲醇/水定容至2ml。HPLC分析或衍生后 GC/MS分析。HPLC-UV 檢測(cè)方法三聚氰胺 在傳統(tǒng)的 C18 柱上保留很差，需要用離子對(duì)試劑色譜方法才

8、能有良好的保留與分離，按照美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA ）的三聚氰胺檢測(cè)方法和中國(guó)農(nóng)業(yè)部頒部的三聚氰胺檢測(cè)方法，采用 Venusi ASB 系列親水色譜柱，均能得到良好的結(jié)果，分析色譜圖如下：1、 三聚氰胺的 FDA 檢測(cè)方法色譜柱：Venusil ASB C8 4.6 x 250mm緩沖液：10mM辛烷磺酸鈉，調(diào) Ph為3.0流動(dòng)相：緩沖液：乙腈 =85: 15進(jìn)樣量：樣品用緩沖液溶解成約 0.1mg/mL,進(jìn)10uL流速：1.0Ml/min柱溫：40 C波長(zhǎng)：240nm7$OSJ41SCIwlo2、三聚氰胺的中國(guó)農(nóng)業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法色譜柱：Venusil ASB-C8 4.6 x 250

9、mm緩沖液：10mM檸檬酸，10mM庚烷磺酸鈉流動(dòng)相：緩沖溶液：乙腈 =85: 15進(jìn)樣量：樣品用緩沖液溶解成約0.1mg/mL,進(jìn)10uL流速：1.0MI/min柱溫：40 C波長(zhǎng)：240nmDAD1 A. Sig=240,4 Re360,100 (AG E 107052312.mAIJ1715Eoo104表1 PCX柱回收率添加水平（mg/L）回收率空白0.01116%0.1108%0.592%296%由上表1可以看出：用PCX柱凈化樣品，可以得到滿意的回收率， 此方法處理樣品，比FDA 公布的前處理方法更加準(zhǔn)確、可靠。LC-MS 參考方法 LC-MS 方法檢測(cè)三聚氰胺的譜圖由于 FDA

10、公布的 HPLC-UV 方法中，流動(dòng)相添加了離子對(duì)試劑，限制了液質(zhì)聯(lián)用方法的 使用；但不用離子對(duì)試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統(tǒng)的C18 柱上保留很差，沒有良好的保留與分離。 源于此問題采用 Venusil ASB 系列親水色譜柱，不用離子對(duì)試劑也能得到有效的保留與 分離，參考方法如下：緩沖液： 10mM NH4AC流動(dòng)相：緩沖液： ACN=95 ： 5進(jìn)樣量：先用 70%ACN溶解成約1mg/mL,用CAN稀釋成1.0mg/mL,進(jìn)10uL柱 溫： 40C波 長(zhǎng)： 240nm與 FDA2007 年 4 月公布的 UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitatio

11、n(HPLC-UV) 相 比較，該方法大大降低了最低檢測(cè)限(MSD : 0.5ppm； UV : 2ppm)，提高了檢測(cè)靈敏度。以該方法分別在 ASB-C84.6 X 250mmASB-C184.6 X 250mm得到的譜圖如下:m/ItDAD1 A, Sig=240.4 Ro仁360,100 (AGELA107052606.D)U6 e8co2(1(5Hr-uni?DAD1 A, Sig=240,4 Ref=360.100 (AGELA)07052535.D)mA25)in9CO2031510結(jié)果與討論 陽離子交換柱 （PCX）三聚氰胺 呈弱堿性 （弱陽離子化合物 ），凈化過程一般應(yīng)選擇陽離子交換柱?；旌闲偷年栯x子交換柱（PCX）通過將磺酸基團(tuán)（-S03H）鍵合在極性高聚物聚苯乙烯 /二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有 陽離子交換和反相吸附兩種機(jī)理，并具有以下優(yōu)點(diǎn)：a）可通過兩種不同溶液的洗滌（水/一定pH值的緩沖溶液和有機(jī)溶劑 ），使樣品更干凈