靈芝三萜的提取分離及總?cè)频暮繙y定(精)

1、70 現(xiàn)代中藥研究與實踐2010年第24卷第5期Chin Med J Res Prac,2010Sept.,Vol.24 No.5靈芝是一種名貴的藥用真菌，屬于擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌赤芝和紫芝的 總稱，始載于？神農(nóng)本草經(jīng)？，具有補(bǔ)中益氣、滋陰強(qiáng)壯、扶正固本、延年益壽等功 效。靈芝主要成分為多糖類和三萜類。三萜類成分復(fù)雜，曾祥麗等 1報道靈芝含 有122種三萜類成分，其中最主要是靈芝酸 37種。林志彬等研究認(rèn)為靈芝三萜具 有抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、保肝、抗腫瘤和抗艾滋病毒等藥理活性 2-5。 本文對靈芝三萜的提取分離及總?cè)频暮繙y定作以下報道。1儀器、試劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本生產(chǎn)，

2、EYELA ROTORYEVAPOPATOR N-1000）； GB204電子天平（瑞典）；751型紫外-可見分光 光度計（上海分析儀器靈芝三萜的提取分離及總?cè)频暮繙y定侯敏娜1，劉劍2（1.陜西國際商貿(mào)學(xué)院，陜西咸陽712046； 2.陜西香菊藥業(yè)集團(tuán)責(zé)任公司，陜西商洛726000）摘要：目的 研究靈芝三萜的最佳提取方法，并測定其總?cè)频暮?。方法采用正交實驗方法，用硅膠柱進(jìn)行總?cè)品蛛x，通過紫外-可見分光光度法測定總?cè)坪?。結(jié)果 最佳提取方法為用5倍量95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h ;用30倍量硅膠裝 柱，以石油醚-乙酸乙酯（9: 1和7: 3）進(jìn)行洗脫；經(jīng)分離得到針狀晶體I和

3、U,測定該品種中靈芝總?cè)坪繛?9.07%。結(jié)論本提取方法穩(wěn)定可行，可作為靈芝 三萜工業(yè)化生產(chǎn)的參考。關(guān)鍵詞：靈芝三萜；提取分離；含量測定中圖分類號：S567.3+1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-6427（201005-0070-02 Gan oderma Triterpe no ids Extractio n and Determ in ati on of the Total Triterpe noidHOU Min- na1 , LIU Jan2（1.Shan anxi Institute of International Trade & Commerce, Xianyang 7

4、12046, Chi na ;2. Shan anxi Xiangju Pharmaceutical Group Co., Shangluo 726000,ChinaAbstract: Objective To desig n the best out of Gano derma triterpe no ids extract programs and separati on methods, and measured the total content of triterpe no id. Methods Filter through the orthogonal extraction me

5、thod, using silica gel column for the total separati on of triterpe no ids by ultraviolet - visible spectrophotometry triterpe noid content. Results The optimum extract ion method is to use ? ve times the amount of 95% ethanol was extracted three times for 1.5 hours each time; loaded with 30 times t

6、he amount of silica gel column with petroleum ether - ethyl acetate （9:1 and 7:3 for elution; by ultraviolet - visible spectrophotometry in order to ursolic acid as a refere nee substa nee, the total triterpe ne content of Gano derma lucidum were determ in ed. Con clusi on The extract ion method is

7、stable and feasible, and Gano derma triterpe ne content was to 9.07%.Key words: Gano derma lucidum Triterpe nes; extracti on and separati on; content determ in ation廠）；硅膠G （青島高能達(dá)化工有限公司）；薄層層析硅膠板 HSGF254 （煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等試 劑均為分析純，熊果酸對照品（中國藥品生物制品檢定所）。2方法2.1靈芝三萜的提取方法靈芝三萜屬于脂溶性成分，通常用有機(jī)溶劑進(jìn)行提 取

8、。本實驗對提取溶劑、提取次數(shù)、時間及其用量4個試驗因素，每個因素設(shè)3個水平，以熊果酸為對照品測得的總?cè)坪孔鳛榭疾熘笜?biāo)，選用L 9（ 34）正交試驗表安排試驗。因素與水平見表1,實驗方案見表2。收稿日期：2009-10-20作者簡介：侯敏娜（1981-），女，碩士研究生，主要從事藥物制劑教學(xué)和研究工作。表 1 因素水平表 Tab.1 Factors and level水平123提取溶劑A氯仿95%乙醇甲醇提取時間（h） B 11.52.0提取次數(shù)（次）C 123溶劑用量（倍）D 35771 現(xiàn)代中藥研究與實踐2010年第24卷第5期Chin Med J Res Prac,2010Sept.,

9、Vol.24 No.500 o0 o00O0o0 00各因素對靈芝總?cè)铺崛」に囉绊懘笮椋篊B AD，經(jīng)各方面綜合考慮 后，最終選出最佳提取工藝為：5倍量95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h0 2.2靈 芝干浸膏制備方法 稱取干燥靈芝粗粉4 000 g,加入5倍量的95%乙醇回流提取3 次，每次2 h,過濾，濾液水浴（5060 C）蒸干得浸膏345.26 g,加水使充分溶 解，用等量的氯仿萃取3次，合并氯仿層，減壓回收至適量，水?。?060 C）蒸 干得浸膏82.86 g。2.3靈芝三萜的分離方法將上面所得浸膏用適量乙酸乙酯充分溶解，揮至少量 用2倍量硅膠拌樣，30倍量硅膠裝柱，先用石油醚

10、-乙酸乙酯（9: 1）洗脫，洗脫 液每100 mL收集一次，至洗脫液近無色（在硅膠 HSGF 254板上點(diǎn)樣無斑點(diǎn)顯 示）時，再用石油醚-乙酸乙酯（7: 3）洗脫，合并第49至73流份，減壓回收至 少量，自然揮干，得粗晶4.139 3 g,用少量乙酸乙酯溶解，2倍量硅膠拌樣，100 倍量硅膠裝柱，用石油醚-乙酸乙酯（7: 3）洗脫，洗脫液每30 mL收集一次，合 并第933和3444流份，分別減壓回收至適量，用甲醇反復(fù)重結(jié)晶，可得白色針 狀晶體I （1.862 4 g和白色針狀晶體U （0.546 8 g。3靈芝總?cè)频暮繙y定3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取熊果酸對照品1.15 mg,溶于10.00

11、 mL乙酸乙酯中，混 合均勻得對照品溶液。分別吸取 0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.20 mL對照品溶液，在100C水浴上蒸干后加入0.40 mL 5%香草醛一冰乙酸溶液和1.00 mL高氯酸，于60 C水浴中加熱15 min后移入冰水浴中，再加入5.00 mL冰 乙酸，搖勻后置于室溫。15 min后，用紫外-可見分光光度計在548.1 nm波長下測 定其吸光度。根據(jù)測定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對照品重量在00.14mg范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為丫 =0.140 8X+0.002 6,相關(guān)系數(shù) r =0.999 1。3.2直接光度法測

12、定取靈芝樣品5.0010.00 mg,溶于10.00 mL乙酸乙酯中。分別吸取定體積的該溶液，在100 C水浴上蒸干后加入0.40 mL 5%香草醛一冰乙酸溶液和1.00 mL高氯酸，于60 C水浴加熱15 min后移入冰水浴中，再加入5.00 mL冰乙酸，搖勻后置于室溫。15 min后用紫外- 可見分光光度計在548.1 nm波長下測定樣品溶液的吸光度。結(jié)果表明，該品種靈 芝中總?cè)坪繛?.07%。4結(jié)論靈芝的藥用成分，主要是其中含有的多糖和三萜成分，而三萜化合物分子功能 團(tuán)較多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣且不穩(wěn)定，容易隨溫度的變化而改變，所以在提取時溫度的 控制是關(guān)鍵。靈芝三萜具有廣泛的藥理活性6，它

13、的提取分離已基本上完成，但是，對于具體靈芝三萜的結(jié)構(gòu)確定及其藥理 作用的研究有待下一步完成。參考文獻(xiàn)1 曾祥麗,包海鷹.靈芝三萜類成分與藥理學(xué)研究進(jìn)展J.菌物研究,2004,2(1:68-77.2 羅俊,林志彬.靈芝三萜化合物藥理作用研究發(fā)展J.藥學(xué)學(xué)報,2002,37(7:42-46.3 El-Mekkawy S,Meselhy,Nakamura N,et a1.Anti-HIV-1 and anti-HIV-1-protease from Gan Oder maluciduma J, Phytochemistry.1998,49 (6:1651-1657.4 王斌,胡岳山,李杰芬.靈芝三萜

14、對小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞增殖的影響J.中藥材,2005,28(7:21-25.5 周昌艷,唐慶九,楊焱,等.靈芝中有效成分靈芝酸的抑制腫瘤作用研究J.茵物學(xué)報,2004,23（2: 275-279.馬林,吳豐,陳若蕓.靈芝三萜成分分析J.藥學(xué)學(xué)報,2003,38（1:61-68.表 2 L9 （34）正交試驗表 Tab.2 Results of the orthogonal test列號123456789IHE RA11122233326.3626.6926.840.48B 12312312326.3727.2826.360.92C 12323131225.5326.5127.872.34D 12331223126.5726