實(shí)驗(yàn)二.藥物中特殊雜質(zhì)的檢查.ppt

1、實(shí)驗(yàn)二：實(shí)驗(yàn)二： 藥物中特殊雜質(zhì)的檢查藥物中特殊雜質(zhì)的檢查 一般雜質(zhì)：一般雜質(zhì)： 自然界中分布較廣，在多種藥物的生成和貯存過(guò)程中容自然界中分布較廣，在多種藥物的生成和貯存過(guò)程中容 易引人的雜質(zhì)，如氯化物，硫酸鹽，鐵鹽，重金屬，砷鹽等。易引人的雜質(zhì)，如氯化物，硫酸鹽，鐵鹽，重金屬，砷鹽等。 特殊雜質(zhì)：特殊雜質(zhì)： 指某一個(gè)或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì)，指某一個(gè)或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì)， 如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素 中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方法收載在中國(guó)藥典正文各藥中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方

2、法收載在中國(guó)藥典正文各藥 品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。 藥品中的雜質(zhì)藥品中的雜質(zhì) 本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查 1 氫化可的松中有關(guān)物質(zhì)的檢查氫化可的松中有關(guān)物質(zhì)的檢查 2 鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查 3 一、阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查一、阿司匹林腸溶片中游離水楊酸的檢查 ona co2 加壓， ona coona oh cooh h+ 生產(chǎn)工藝：生產(chǎn)工藝： cooh oc o ch3 (ch3co)2o h2so4,7075 c 。 (ch3co)2o ococh3 貯藏水解：貯藏水

3、解： cooh oc o ch3 (ch3co)2o h2so4,7075 c 。 ococh3ona co2 加壓， ona coona oh cooh h+ ona co2 加壓， ona coona oh cooh h+ o o cooh oh h2ooo 1、雜質(zhì)來(lái)源、雜質(zhì)來(lái)源 阿司匹林無(wú)游離酚羥基，不與阿司匹林無(wú)游離酚羥基，不與fe3+ 作用，而水楊酸則可與之反應(yīng)生成紫堇作用，而水楊酸則可與之反應(yīng)生成紫堇 色，可檢出色，可檢出1g的游離水楊酸。的游離水楊酸。 水楊酸對(duì)照液水楊酸對(duì)照液阿司匹林阿司匹林 硫酸鐵銨硫酸鐵銨 對(duì)照液顏色對(duì)照液顏色 供試液顏色供試液顏色 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 比色

4、法：比色法： 合格合格 +fe3+h2o fe oh 紫堇色紫堇色 2010版用版用hplc法法 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 1、樣品前處理、樣品前處理 取本品取本品30片（片（0.025g/片），研細(xì)，用乙醇片），研細(xì)，用乙醇15ml分次研磨，并分次研磨，并 移入移入50ml量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾 過(guò)，取續(xù)濾液。過(guò)，取續(xù)濾液。 2.00ml續(xù)濾液續(xù)濾液 水稀釋至水稀釋至50ml 3ml硫酸鐵銨硫酸鐵銨 4.50ml0.01%水楊酸標(biāo)液水楊酸標(biāo)液 3ml 乙醇乙醇 1.00ml酒石酸酒石酸溶液溶液 水稀釋至水稀釋至50ml 3ml硫酸

5、鐵銨硫酸鐵銨 50ml 納氏納氏 比色比色 管管 比較顏色，不得更深（比較顏色，不得更深（1.5%） 樣品管樣品管對(duì)照管對(duì)照管 1. 在阿司匹林中游離水楊酸的檢查中，制備供試品溶液在阿司匹林中游離水楊酸的檢查中，制備供試品溶液 所用的比色管須經(jīng)干燥后使用，且供試品須用乙醇溶解所用的比色管須經(jīng)干燥后使用，且供試品須用乙醇溶解 后才可加水稀釋至刻度，否則供試品難以溶解。后才可加水稀釋至刻度，否則供試品難以溶解。 2. 游離水楊酸檢查時(shí)，供試品溶液要臨用現(xiàn)配，避免阿游離水楊酸檢查時(shí)，供試品溶液要臨用現(xiàn)配，避免阿 司匹林水解造成的誤差。司匹林水解造成的誤差。 3. 進(jìn)行水楊酸檢查時(shí)，應(yīng)在中性或弱酸性溶

6、液（進(jìn)行水楊酸檢查時(shí)，應(yīng)在中性或弱酸性溶液（ph46） 中進(jìn)行。若在強(qiáng)酸性溶液中，生成的紫蘭色配合物會(huì)分中進(jìn)行。若在強(qiáng)酸性溶液中，生成的紫蘭色配合物會(huì)分 解褪色。解褪色。 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 二、氫化可的松中有關(guān)物質(zhì)的檢查二、氫化可的松中有關(guān)物質(zhì)的檢查 o ho oh och2oh h hh 氫化可的松氫化可的松 天然皮質(zhì)激素天然皮質(zhì)激素 甾體激素中的甾體激素中的有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)： 1、雜質(zhì)來(lái)源、雜質(zhì)來(lái)源 原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物 2、特點(diǎn)、特點(diǎn) （1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì) （2）結(jié)構(gòu)類似）結(jié)構(gòu)類似 本實(shí)驗(yàn)中，氫化可的松中本實(shí)驗(yàn)中，氫

7、化可的松中“其他其他 甾體甾體” 的檢查采用的檢查采用tlc法（法（自身稀釋自身稀釋 對(duì)照法對(duì)照法）。）。 2010版用版用hplc法法 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 s 溶劑溶解 一定比例稀釋 供試品溶液 一定量供試品溶液對(duì)照溶液 供試品溶液所顯供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色不顏色不 得深于對(duì)照溶液的得深于對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)主斑點(diǎn) 方法：方法： 供供 試試 品品 溶溶 液液 對(duì)對(duì) 照照 溶溶 液液 雜質(zhì)雜質(zhì) 主藥主藥 不合格不合格 雜質(zhì)雜質(zhì) 四氮唑比色法：四氮唑比色法： 腎上腺腎上腺 皮質(zhì)激皮質(zhì)激 素藥物素藥物 四氮唑鹽四氮唑鹽 oh 紫色斑點(diǎn)紫色斑點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 1. 供試品溶液和對(duì)照品溶液的

8、制備供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備 取本品，加氯仿取本品，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每1ml中含中含3.0mg的溶液，的溶液， 作為供試品溶液。精密量取適量，加氯仿作為供試品溶液。精密量取適量，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每 1ml中含中含60mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。的溶液，作為對(duì)照品溶液。 2. 檢查檢查 吸取上述兩種溶液各吸取上述兩種溶液各5l （毛細(xì)管高度約（毛細(xì)管高度約1.5cm），）， 分別分別 點(diǎn)于同一點(diǎn)于同一硅膠硅膠g薄層板上，以二氯甲烷薄層板上，以二氯甲烷-乙醚乙醚-甲醇甲醇-水（水（385： 60：30：2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，在）為展開(kāi)劑，展

9、開(kāi)后，晾干，在105干燥干燥10min， 放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯 雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較， 不得更深。不得更深。 三、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查三、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查 1、雜質(zhì)來(lái)源：、雜質(zhì)來(lái)源： 水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸，進(jìn)一步脫羧、氧化成有色雜質(zhì)，水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸，進(jìn)一步脫羧、氧化成有色雜質(zhì)， 使注射劑顏色變黃、療效下降、毒性增加。使注射劑顏色變黃、療效下降、毒性增加。 nh2 cooh nh2 nh2 coo

10、ch2ch2n(c2h5)2 h2o - co2 o o o 檢查方法檢查方法 ： tlc法法（雜質(zhì)對(duì)照法）（雜質(zhì)對(duì)照法） 1、雜質(zhì)對(duì)照法、雜質(zhì)對(duì)照法： 對(duì)照品：對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品：對(duì)氨基苯甲酸 供試品：供試品：鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 薄層板：硅膠薄層板：硅膠h板板 展開(kāi)劑：苯展開(kāi)劑：苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14：1：1：4） 顯色劑：對(duì)二甲氨基苯甲醛顯色劑：對(duì)二甲氨基苯甲醛 雜質(zhì)斑點(diǎn)與對(duì)照品主斑點(diǎn)比較，不得更深。雜質(zhì)斑點(diǎn)與對(duì)照品主斑點(diǎn)比較，不得更深。 供供 試試 品品 雜雜 質(zhì)質(zhì) 對(duì)對(duì) 照照 品品 雜質(zhì)雜質(zhì) 主藥主藥 合格合格 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 2010版用版用hplc法法

11、 雜質(zhì)已知且有雜質(zhì)對(duì)照品雜質(zhì)已知且有雜質(zhì)對(duì)照品 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 吸取鹽酸普魯卡因供試液和對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照液各吸取鹽酸普魯卡因供試液和對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照液各10l （毛細(xì)管高度約（毛細(xì)管高度約2.0cm），分別點(diǎn)于同一含有羧甲基纖維素），分別點(diǎn)于同一含有羧甲基纖維素 鈉為粘合劑的鈉為粘合劑的硅膠硅膠h薄層板上。以苯薄層板上。以苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14： 1：1：4）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，用對(duì)二甲氨基苯甲醛）為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，用對(duì)二甲氨基苯甲醛 溶液（溶液（2%對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸，加入冰醋酸 5ml制成）噴霧顯色，供試

12、品溶液如顯與對(duì)照品相應(yīng)的雜質(zhì)制成）噴霧顯色，供試品溶液如顯與對(duì)照品相應(yīng)的雜質(zhì) 斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。 薄層色譜操作要點(diǎn)薄層色譜操作要點(diǎn) 薄層板的制備薄層板的制備點(diǎn)樣點(diǎn)樣展開(kāi)展開(kāi)斑點(diǎn)確定斑點(diǎn)確定 g板和板和h板的制備板的制備 玻璃板洗凈，吹干，待用。玻璃板洗凈，吹干，待用。 g板板：玻璃背面先貼上標(biāo)簽（：玻璃背面先貼上標(biāo)簽（g板），取硅膠板），取硅膠g粉粉5g，加，加18毫毫 升水，向同一個(gè)方向研磨混合，去除表面氣泡，從中心倒入潔升水，向同一個(gè)方向研磨混合，去除表面氣泡，從中心倒入潔 凈玻璃板，研缽棒助涂布均勻凈玻璃板，研缽棒

13、助涂布均勻(快速快速)，拍板，轉(zhuǎn)向，再拍板，拍板，轉(zhuǎn)向，再拍板， 平推，勿動(dòng)！，晾干，用前烘干活化。平推，勿動(dòng)！，晾干，用前烘干活化。 h板板：玻璃背面先貼上標(biāo)簽（：玻璃背面先貼上標(biāo)簽（h板），取硅膠板），取硅膠h粉粉5g，加，加18毫毫 升升cmc-na，同上法制板，平推，勿動(dòng)！，同上法制板，平推，勿動(dòng)！ 制板完讓老師看板，認(rèn)可后方能離開(kāi)。每人一個(gè)制板完讓老師看板，認(rèn)可后方能離開(kāi)。每人一個(gè)g板一個(gè)板一個(gè)h板板 薄層板的制備薄層板的制備點(diǎn)樣點(diǎn)樣展開(kāi)展開(kāi)斑點(diǎn)確定斑點(diǎn)確定 1、點(diǎn)樣工具為、點(diǎn)樣工具為點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣毛細(xì)管 2、點(diǎn)樣時(shí)，宜分次點(diǎn)加，每次、點(diǎn)樣時(shí)，宜分次點(diǎn)加，每次 點(diǎn)加后，待其自然干燥。

14、點(diǎn)加后，待其自然干燥。 3、點(diǎn)樣基線距底邊、點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm，樣點(diǎn)，樣點(diǎn) 一般為圓點(diǎn)，直徑一般為圓點(diǎn)，直徑2mm4mm， 點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不 影響檢出為宜，一般約為影響檢出為宜，一般約為 1.5cm2.0cm。 薄層色譜操作要薄層色譜操作要 點(diǎn)點(diǎn) 2cm 不要?jiǎng)澗€，不要?jiǎng)澗€， 以免破壞硅以免破壞硅 膠表面，毛膠表面，毛 細(xì)管輕觸表細(xì)管輕觸表 面，不要捅面，不要捅 破硅膠。破硅膠。 薄層板的制備薄層板的制備點(diǎn)樣點(diǎn)樣展開(kāi)展開(kāi)斑點(diǎn)確定斑點(diǎn)確定 預(yù)飽和預(yù)飽和展開(kāi)中展開(kāi)中 1、先放入板，再加展開(kāi)劑、先放入板，再加展開(kāi)劑15ml，浸沒(méi)，浸沒(méi)0.5-1cm，樣品點(diǎn)不得浸，樣品點(diǎn)不得浸 入展開(kāi)劑。入展開(kāi)劑。 2、薄層板先置于盛有展