2020年沙門氏菌檢測(cè)精編版

1、精選文檔沙門氏菌檢測(cè)1 設(shè)備和材料 除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1.1 冰箱： 2 5。1.2 恒溫培養(yǎng)箱： 361， 421。1.3 均質(zhì)器。1.4 振蕩器。1.5 電子天平：感量 0.1g。1.6 無(wú)菌錐形瓶 :容量500ml， 250ml。1.7 無(wú)菌吸管： 1ml（具0.01ml刻度）、 10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸 頭。1.8 無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑 90mm。1.9 無(wú)菌試管： 3mm 50mm、 10mm 75mm。1.10 無(wú)菌毛細(xì)管。1.11 pH計(jì)或 pH比色管或精密 pH試紙。1.12 全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。2 培養(yǎng)基和試劑2.1

2、 緩沖蛋白胨水（ BPW）：見附錄中 1。2.2 四硫磺酸鈉煌綠（ TTB ）增菌液：見附錄中 2。2.3 亞硒酸鹽胱氨酸（ SC）增菌液：見附錄中 3。2.4 亞硫酸鉍（ BS）瓊脂：見附錄中 4。2.5 HE瓊脂：見附錄中 5。2.6 木糖賴氨酸脫氧膽鹽（ XLD ）瓊脂：見附錄中 6。2.7 沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。2.8 三糖鐵（ TSI）瓊脂：見附錄中 7。2.9 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑：見附錄中 8。2.10 尿素瓊脂（ pH7.2）：見附錄中 9。2.11 氰化鉀（ KCN ）培養(yǎng)基：見附錄中 10。2.12 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基： 見附錄中 11。精選文檔精選文檔2.13 糖發(fā)

3、酵管：見附錄中 12。2.14 鄰硝基酚 -D 半乳糖苷（ ONPG）培養(yǎng)基：見附錄中 13。2.15 半固體瓊脂：見附錄中 14。2.16 丙二酸鈉培養(yǎng)基：見附錄中 15。2.17 沙門氏菌 O和 H診斷血清。2.18 生化鑒定試劑盒。3 操作方法3.1 試驗(yàn)前準(zhǔn)備3.1.1 將供試品及所有已滅菌的平皿、 錐形瓶、勻漿杯、試管、 量筒、吸管（1ml、 10ml）、稀釋劑等移至操作室內(nèi)。準(zhǔn)備好足夠用量，避免操作中出入操作間。3.1.2 開啟無(wú)菌室紫外殺菌燈和潔凈工作臺(tái)的空氣過濾裝置 30min。3.1.3 操作人員用肥皂洗手，關(guān)閉紫外殺菌燈，進(jìn)入緩沖間，換工作鞋，用消毒 液洗手或用乙醇棉球擦手

4、，穿戴好無(wú)菌衣、帽、口罩、手套等。3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作臺(tái)面，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、 袋等的開口處周圍，待干后用滅菌剪刀或鑷子將供試品啟封。3.2 前增菌稱取25g（ml）樣品放入盛有 225ml BPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以 8000r/min 10000r/min均質(zhì)1min 2min，或置于盛有 225ml BPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式 均質(zhì)器拍打 1min2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測(cè)定 pH 值，用 1mol/ml 無(wú)菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.80.2。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至 500ml錐形 瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于 361

5、培養(yǎng)8 h18h。如為冷凍產(chǎn) 品,應(yīng)在45以下不超過 15min,或2 5不超過 18h解凍。3.3 增菌輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過的樣品混合物，移取 1ml，轉(zhuǎn)種于 10ml TTB 內(nèi)，于421 培養(yǎng)18 h24h。同時(shí)，另取 1ml，轉(zhuǎn)種于10ml SC內(nèi)，于361培養(yǎng)18h24h。3.4 分離分別用接種環(huán)取增菌液 1環(huán)，劃線接種于一個(gè) BS瓊脂平板和一個(gè) XLD 瓊脂平 板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于 361分別培養(yǎng) 18h 24h（XLD瓊脂平板、 HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或 40h48h精選文檔精選文檔BS瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落。各個(gè)平板上的菌

6、落特征見表1表 1 沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌BS瓊脂菌落為黑色有金屬光澤、 棕褐色或灰色， 菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色； 有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心 黑色或幾乎全黑色。XLD 瓊脂菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中 心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基按照顯色培養(yǎng)基的說明進(jìn)行判定。3.5 生化試驗(yàn)3.5.1 自選擇性瓊脂平板上分別挑取 2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂， 先在斜面劃線

7、，再于底層穿刺；接種針不要滅菌 ,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于 361培養(yǎng) 18h24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至 48h。在三糖 鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)，沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見表 2。表 2 沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果三糖鐵瓊脂賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基初步判斷斜面底層產(chǎn)氣硫化氫KA（）（）可疑沙門氏菌屬KA（）（）可疑沙門氏菌屬AA（）（）可疑沙門氏菌屬AA/非沙門氏菌KK/非沙門氏菌注： K：產(chǎn)堿， A：產(chǎn)酸，：陽(yáng)性，：陰性； （）多數(shù)陽(yáng)性，少數(shù)陰性； /：陽(yáng)性或陰性。3.5.2 接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí) ,可直接接種

8、蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（ pH7.2）、氰化鉀（ KCN ）培養(yǎng)基，也可在初 步判斷結(jié)果后從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于 361培養(yǎng) 18h24h， 必要時(shí)可延長(zhǎng)至 48h，按表3判定結(jié)果。 將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于 2 5或室溫 至少保留 24h，以備必要時(shí)復(fù)查。表3 沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表反應(yīng)序 號(hào)硫化氫（ H2S）靛基質(zhì)pH7.2 尿素氰化鉀（ KCN ）賴氨酸脫羧酶A1A2A3/注：陽(yáng)性，：陰性， /：陽(yáng)性或陰性。精選文檔精選文檔3.5.2.1 反應(yīng)序號(hào) A1：典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。 如尿素、 KCN 和賴氨酸脫羧 酶3 項(xiàng)中有 1項(xiàng)異常，按表 4可判定為沙

9、門氏菌。如有 2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。表 4 沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表pH7.2 尿素氰化鉀（ KCN ）賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果甲型副傷寒沙門氏菌 （要求血清學(xué)鑒定結(jié) 果）沙門氏菌 IV 或 V （要求符合本群生化特 性）沙門氏菌個(gè)別變體（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）注：陽(yáng)性，：陰性。3.5.2.2 反應(yīng)序號(hào) A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng) 試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。3.5.2.3 反應(yīng)序號(hào) A3：補(bǔ)做ONPG。ONPG 陰性為沙門氏菌，同時(shí)賴氨酸脫羧酶 陽(yáng)性。甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。3.5.2.4 必要時(shí)按表 5 進(jìn)行沙門氏菌生化群的

10、鑒別。表 5 沙門氏菌屬各生化群的鑒別項(xiàng)目IIIIIIIVVVI衛(wèi)矛醇山梨醇水楊苷ONPG丙二酸鹽KCN注：陽(yáng)性，：陰性。3.5.3 如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù) 3.5.1的初步 判斷結(jié)果， 從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落， 用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳?液，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。3.6 血清學(xué)鑒定3.6.1 抗原的準(zhǔn)備一般采用 1.2 1.5瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。 O血清不凝 集時(shí)，將菌株接種在瓊脂量較高的（如 2 3）培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于 Vi 抗原的存在而阻止了 O凝集反應(yīng)時(shí)，可挑取菌苔于 1ml生理鹽水中做

11、成濃菌 液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。 H 抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在 0.55精選文檔精選文檔0.65半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，在其邊緣部分取菌檢查；或 將菌株通過裝有 0.3 0.4半固體瓊脂的小玻管 1 次 2次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后 再檢查。3.6.2 多價(jià)菌體抗原（ O）鑒定在玻片上劃出 2個(gè)約 1cm2cm的區(qū)域，挑取 1環(huán)待測(cè)菌，各放 1/2環(huán)于玻片上 的每一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加 1滴多價(jià)菌體（ O）抗血清，在另一區(qū) 域下部加入 1滴生理鹽水，作為對(duì)照。再用無(wú)菌的接種環(huán)或針分別將兩個(gè)區(qū)域內(nèi) 的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動(dòng)混合 1 min，并對(duì)著黑暗背景進(jìn)

12、行觀察，任 何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽(yáng)性反應(yīng)。3.6.3 多價(jià)鞭毛抗原（ H）鑒定同 3.6.2。3.7 結(jié)果與報(bào)告綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報(bào)告 25g（ml ）樣品中檢出或未檢 出沙門氏菌。精選文檔精選文檔附錄 培養(yǎng)基和試劑10.0g5.0g磷酸氫二鈉（含 12 個(gè)結(jié)晶水）9.0g1 緩沖蛋白胨水（ BPW ）1.1 成分 蛋白胨 氯化鈉1.5g磷酸二氫鉀蒸餾水1000mlpH7.2 0.21.2 制法將各成分加入蒸餾水中，攪混均勻，靜置約 10 min，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH，高壓滅菌 121 ，15min。2 四硫磺酸鈉煌綠（ TTB ）增菌液2.1 基礎(chǔ)液蛋白胨10.0g牛肉膏5

13、.0g氯化鈉3.0g碳酸鈣45.0g蒸餾水1000ml7.0 0.2pH除碳酸鈣外，將各成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，再加入碳酸鈣，調(diào)節(jié)pH，高壓滅菌121， 20 min。2.2 硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉（含 5個(gè)結(jié)晶水）50.0g蒸餾水加至100ml高壓滅菌 121， 20 min。2.3 碘溶液碘片20.0g碘化鉀25.0 g精選文檔精選文檔蒸餾水加至100 ml將碘化鉀充分溶解于少量的蒸餾水中， 再投入碘片， 振搖玻瓶至碘片全部溶解為止，然后加蒸餾水至規(guī)定的總量，2.4 0.5煌綠水溶液 煌綠貯存于棕色瓶?jī)?nèi)，塞緊瓶蓋備用。0.5g蒸餾水100ml溶解后，存放暗處，不少于 1d，2.5 牛

14、膽鹽溶液 牛膽鹽使其自然滅菌。10.0g蒸餾水100ml加熱煮沸至完全溶解，高壓滅菌2.6 制法121 ， 20min?；A(chǔ)液900ml硫代硫酸鈉溶液100ml碘溶液20.0ml煌綠水溶液2.0ml牛膽鹽溶液50.0ml臨用前，按上列順序，以無(wú)菌操作依次加入基礎(chǔ)液中，每加入一種成分，均應(yīng)搖 勻后再加入另一種成分。3 亞硒酸鹽胱氨酸（ SC）增菌液3.1 成分蛋白胨5.0g乳糖4.0g磷酸氫二鈉10.0g亞硒酸氫鈉4.0gL-胱氨酸蒸餾水0.01g1000mlpH3.2 制法7.0 0.2精選文檔精選文檔除亞硒酸氫鈉和 L-胱氨酸外，將各成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，冷至 55 以下，以無(wú)菌操作加

15、入亞硒酸氫鈉和 1g/L L-胱氨酸溶液 10m（l 稱取0.1g L-胱氨酸， 加1mol/L氫氧化鈉溶液 15ml，使溶解，再加無(wú)菌蒸餾水至 100ml 即成，如為 DL-胱氨酸，用量應(yīng)加倍）。搖勻，調(diào)節(jié) pH。4 亞硫酸鉍（ BS ）瓊脂4.1 成分 蛋白胨 牛肉膏 葡萄糖 硫酸亞鐵 磷酸氫二鈉 煌綠 檸檬酸鉍銨 亞硫酸鈉10.0g5.0g5.0g0.3g4.0g0.025g或5.0g/L水溶液 5.0ml2.0g6.0g瓊脂18.0g20g蒸餾水1000mlpH7.5 0.24.2 制法將前三種成分加入 300 ml 蒸餾水（制作基礎(chǔ)液），硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉 分別加入 20ml和 3

16、0ml蒸餾水中，檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20ml和 30ml蒸餾水中，瓊脂加入 600ml蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。冷至 80 左右時(shí)，先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，混勻。將檸檬 酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，再混勻。調(diào)節(jié) pH，隨即傾入瓊脂液中， 混合均勻，冷至 50 55。加入煌綠溶液，充分混勻后立即傾注平皿。 注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌， 在制備過程中不宜過分加熱， 避免降低其選擇性， 貯于室溫暗處，超過 48h會(huì)降低其選擇性，本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備， 第二天使用 5 HE 瓊脂（ Hektoen Enteric Agar）12.0g5.1 成分

17、蛋白胨 精選文檔精選文檔牛肉膏乳糖3.0g12.0g蔗糖12.0g水楊素2 .0g膽鹽20.0g氯化鈉5.0g瓊脂18.0g20.0g蒸餾水1 000ml0.4溴麝香草酚藍(lán)溶液16.0mlAndrade 指示劑20.0ml甲液20.0ml乙液20.0mlpH7.5 0.25.2 制法將前面七種成分溶解于 400 ml 蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液 ;將瓊脂加入于 600 ml 蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi) ,調(diào)節(jié) pH。 再加入指示劑 ,并與瓊脂液合并 ,待冷至 50 55傾注平皿。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避免降低其選擇 性。 甲液的配制

18、精選文檔精選文檔硫代硫酸鈉34.0g檸檬酸鐵銨4.0g蒸餾水100ml 乙液的配制去氧膽酸鈉10.0g蒸餾水100ml Andrade指示劑酸性復(fù)紅0.5g1mol/L 氫氧化鈉溶液16.0ml蒸餾水100ml將復(fù)紅溶解于蒸餾水中 ,加入氫氧化鈉溶液。數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全 ,再加氫氧 化鈉溶液 1ml 2ml。6 木糖賴氨酸脫氧膽鹽（ XLD ）瓊脂6.1 成分酵母膏3.0gL-賴氨酸5.0g木糖3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g去氧膽酸鈉2.5g檸檬酸鐵銨0.8g硫代硫酸鈉6.8g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g酚紅0.08g蒸餾水1 000mlpH7.4 0.26.2 制法除酚紅和瓊脂外，將

19、其他成分加入 400ml蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH。另精選文檔精選文檔將瓊脂加入 600ml蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示 劑，待冷至50 55傾注平皿。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避免降低其選擇性， 貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備，第二天使用。7 三糖鐵（ TSI ）瓊脂7.1 成分蛋白胨20.0g牛肉膏5.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g葡萄糖1.0g硫酸亞鐵銨（含 6 個(gè)結(jié)晶水）0.2g酚紅0.025g或5.0 g/L溶液5.0ml氯化鈉5.0g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12.0g蒸餾水1000mlpH7.2 制法7.4 0.2除酚紅

20、和瓊脂外，將其他成分加入 400ml蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH。另 將瓊脂加入 600ml蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示 劑，混勻，分裝試管，每管約 2ml4ml，高壓滅菌 12110 min 或 115 15min， 滅菌后置成高層斜面，呈桔紅色。8 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑8.1 蛋白胨水蛋白胨（或胰蛋白胨）氯化鈉20.0g5.0g蒸餾水1000mlpH7.4 0.2精選文檔精選文檔 將上述成分加入蒸餾水中， 煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH，分裝小試管 ,121高壓滅菌 15min8.2 靛基質(zhì)試劑8.2.1 柯凡克試劑： 將5g對(duì)二甲氨基甲醛溶解于 75ml戊醇中 ,然后緩

21、慢加入濃鹽酸 25ml。8.2.2 歐-波試劑：將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于 95ml95乙醇內(nèi)。 然后緩慢加入 濃鹽酸 20ml。8.3 試驗(yàn)方法挑取小量培養(yǎng)物接種 ,在361培養(yǎng) 1d2d，必要時(shí)可培養(yǎng) 4d5d。加入 柯凡克試劑約 0.5ml，輕搖試管 ,陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色；或加入歐 -波試劑約 0.5ml，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面 ,陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。 注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買來后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后 方可使用。9 尿素瓊脂（ pH 7.2 ）9.1 成分蛋白胨1.0g氯化鈉5.0g葡萄糖 磷酸二氫鉀1.0g2.0g0.4酚紅 瓊脂 蒸餾水3.

22、0ml20.0g1000ml20%尿素溶液100mlpH9.2 制法7.2 0.2除尿素、瓊脂和酚紅外，將其他成分加入 400ml 蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH。另將瓊脂加入 600 ml 蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再 加入指示劑后分裝， 121高壓滅菌 15min。冷至 50 55,加入經(jīng)除菌過濾的 尿素溶液。尿素的最終濃度為 2。分裝于無(wú)菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?.3 試驗(yàn)方法 精選文檔精選文檔挑取瓊脂培養(yǎng)物接種 ,在361培養(yǎng) 24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。10 氰化鉀（ KCN ）培養(yǎng)基10.1 成分蛋白胨10.0g氯化鈉5.0g磷酸二氫

23、鉀0.225g磷酸氫二鈉5.64g蒸餾水1000ml0.5氰化鉀20.0ml10.2 制法將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，分裝后 121高壓滅菌 15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每 100ml 培養(yǎng)基加入 0.5氰化鉀溶液 2.0ml （最后濃度為 1:10000），分裝于無(wú)菌試管內(nèi) ,每管約 4ml,立刻用無(wú)菌橡皮塞塞緊 放在4冰箱內(nèi) ,至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng) 基 , 分裝試管備用。10.3 試驗(yàn)方法將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取 1環(huán)接種于氰化鉀 （KCN）培養(yǎng)基。并另挑取 1環(huán)接種于對(duì)照培養(yǎng)基。在 361培養(yǎng)1 d2 d，

24、 觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長(zhǎng)即為陽(yáng)性 （不抑制） ，經(jīng)2d細(xì)菌不生長(zhǎng)為陰性 （抑制） 注 :氰化鉀是劇毒藥 ,使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在 冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán) ,氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣 體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)菌生長(zhǎng)，因而造成假陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)時(shí)對(duì)每一環(huán) 節(jié)都要特別注意。11 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基11.1 成分蛋白胨5.0g酵母浸膏3.0g葡萄糖1.0g精選文檔精選文檔蒸餾水1000ml1.6溴甲酚紫 -乙醇溶液1.0mlL-賴氨酸或 DL- 賴氨酸0.5g/100ml 或1.0g/100mlpH6.8 0.211.2 制法除賴氨酸以外的成

25、分加熱溶解后 ,分裝每瓶 100ml，分別加入賴氨酸。 L- 賴氨 酸按 0.5加入， DL-賴氨酸按1加入。調(diào)節(jié) pH。對(duì)照培養(yǎng)基不加賴氨酸。分 裝于無(wú)菌的小試管內(nèi)， 每管 0.5ml ，上面滴加一層液體石蠟， 115高壓滅菌 10min。11.3 試驗(yàn)方法從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種， 于361培養(yǎng) 18h24h，觀察結(jié)果。 氨基 酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。 陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物， 但因葡萄糖產(chǎn) 酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對(duì)照管應(yīng)為黃色。12 糖發(fā)酵管12.1 成分牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g氯化鈉3.0g磷酸氫二鈉（含 12個(gè)結(jié)晶水） 2.0g0.2溴麝香草酚藍(lán)溶液12.0ml蒸餾水1000mlpH7.4 0.212.2 制法12.2.1 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，調(diào)節(jié) pH。按 0.5加入葡萄糖，分裝于 有