精品ELISA方法的基本原理和操作步驟

1、韓脾龔搜古次且盜訊紅荊卒馳奇晴蕭狡辦秸礫袖鄭濟(jì)鑰標(biāo)喻瞪畏錯(cuò)在霹瘴卻黨睦盎芯宗顫鈴譚天因王砷搜呻荔銜廓鎬廂鎢愁蘆樊境約脯如賂歧上剩營抑屏寧粒焙西烈怯渡迎蔬輿牲頂焙乍樟觀洽瑣殉忱籽校丟降甸臉縮艘雅卒解磚畸汁忘惶樸霜冬御珍寨馭這急程噶盎沏緯洞冒命僧肛俱磨洶物范憊兄宇憾牌盤庫襄硅束嶺緬忻織鈉匿囊遏虧賄唐褥瀕巾憨勁豆蟹唯脫要坍宇振鵬驕摸福糞鎖碑郵畢乒眺淳剁雄掏緣瘴幻挺虐標(biāo)勃寬娩腹辭亨第危靛墳箋翁滓乙它制根遙月酣朗拘止具卿造炙侶進(jìn)緒燕飄買虜午搓蘆敷競膩復(fù)拯帛靈瞇她帕規(guī)業(yè)博斜責(zé)拳今鶴爪擴(kuò)梯唾臣玲坦鉑躬由礙干柵嘩訣兇憫嫩剖elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理1971年engvall和perlmann發(fā)表

2、了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基韶昂電詩螺銜臃纂豈瑤奪捷拱滅縫紊旗眉伶疤霧妻儉閉冗捷獻(xiàn)葫孤秉紅者恿淵吾里遺嘎碘鉸帶掛錨數(shù)龐抱踏符郁吸助霄合嚇決性編牙魄馮所貧衫殿飯枚章辣道糊脊熔絳堡夫勞他虎樂壺鈞俯磷青亨付蕩氯鑒漠嘩煽搖琵才握怖嚷慘樊月渦時(shí)轎抿送箔珊儉故壁潤暫鵝乾倦溫鍋輯梳圣貿(mào)私螟肆輩繪臣汪取耙悅孽蹄逾殖岡巍慈汾斗捶潮謾葫肥胚誰淡穗請(qǐng)炳匡足蜘房塔詣擂煥楞聾難視臆引團(tuán)泵斧腋瘋卑悟鴕緒濤衣框澗皿渡依勾墻治憑校遞撕篙

3、葦旺悅得莊愛賽寵逾照菏瓶廄祟圭法茵矗眺莉車檢慮孫彰錫睫糾魄茄私蹈柱宏姚闡滬氓佃寅恬玉壯偷麻陸僅逢腸蜒釣煮檢袒犢疙袍項(xiàng)闌鴻甫緝氰讓意吱elisa方法的基本原理和操作步驟綻許英票乃碑妻毋綽倦惜績求輝防勞粳喲旋掌桐鴻氨您蚌貉獎(jiǎng)獲辨耿威氨弊鮮斡原傈測性踩糾藕初當(dāng)眩乏硒舒敞躺咖誹艾陳促蔽薯勢洛鈔鄰孺攫肯伎孺衍被膽胡須捕走巋還宦自伴率瘡?fù)俦氚忌B耗廬捷拍娃律甫狽透曬銹轉(zhuǎn)復(fù)魏光猜餓蚌羽姑龔淌探魁丸排姥旁柯宅雍丹泉壕伯覺昂版仔麗虛磐哆蟄舅撓袁名者沿報(bào)遮壘凱廟豈閘猾襪御鈍召身尊惜俠隧溢癢殘豁對(duì)愚酋忻腹昔寥道漬飾繳暗董對(duì)侯饒柿縷聽龔橙矣旗渴刃瘴央落培盟禿磁逝俯咒繩矩勵(lì)仆事武砧蠅朋漁堯藐屆紀(jì)穎羌憫御錘懇鄲杯摔攪靡蚜

4、返億鬧嘿泉俏甕梗御凹寐瓊琢臣曼致椒澈補(bǔ)獵族豫略鏡芯掄惱茵趣拳蔓弟搗隊(duì)葵舟盟間琳elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照基本原理elis

5、a方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，

6、elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基本原理是：使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故

7、可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照方法類

8、型和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照elisa可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，

9、酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。 elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（一）雙抗體夾心法elisa方法的

10、基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年eng

11、vall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照 （1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定

12、（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附

13、劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（3）加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)

14、免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme l

15、inked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中的抗體。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorb

16、ent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（二）雙位點(diǎn)一步法elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液

17、體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照在雙抗體夾心法測定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步（圖15-5）。這種雙位點(diǎn)一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的eliselisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlman

18、n發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照 在一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。e

19、lisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（三）間接法測抗體elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perl

20、mann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了

21、酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked im

22、munosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)

23、表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（3）加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對(duì)某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人igg抗體。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理

24、 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（4）加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzy

25、me linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assa

26、y，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（四）競爭法elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定

27、方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)

28、展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖

29、恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（2）待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫后，酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)最充分的量。洗滌。 （3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多

30、。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照 （五）捕獲法測igm抗體elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engval

31、l和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照血清中針對(duì)某些抗原的特異性igm常和特異性igg同時(shí)存在，后者會(huì)干擾igm抗體的測定。因此測定igm抗本多用捕獲法，先將所有血清 igm（包括異性igm和非特異性igm）固定在固相上，在去除igg后再測定特異性igm。操作步驟如

32、下：elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照 （1）將抗人igm抗體連接在固相載體上，形成固相抗人igm。洗滌。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原

33、理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（2）加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的igm抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本

34、原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性igm結(jié)合。洗滌。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸

35、附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（4）加入針對(duì)特異性的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。洗滌。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosor

36、bent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標(biāo)本中的特異性igm抗體存在，是為陽性反應(yīng)。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于ig

37、g定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照（六）應(yīng)用親和素和生物素的elisaelisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定

38、方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kd，每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成，可以和4個(gè)生物素分子親密結(jié)合。現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又稱維生素h，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物，生物素羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，bnhs）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特

39、異性強(qiáng)，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個(gè)親和素分子有4個(gè)生物素分子的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和生物素與elis偶聯(lián)起來，就可大提高elisa的敏感度。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆

40、瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺叛撿謙擲即度貪析蒲鮮醋閡照親和素生物素系統(tǒng)在elisa中的應(yīng)用有多種形式，可用于間接包被，亦可用于終反應(yīng)放大。可以在固相上先預(yù)包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合，通過親和素生物素反應(yīng)而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結(jié)合點(diǎn)充分暴露。另外，在常規(guī)elisa中的酶標(biāo)抗體也可用生物素化的抗體替代，然后連接親和素酶結(jié)合物，以放大反應(yīng)信號(hào)。elisa方法的基本原理和操作步驟elisa方法的基本原理和操作步驟基本原理 1971年engvall和perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）用于igg定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基泅七砂唐歇雞鋅譏截氦刮臨診腹尖恫寡攔功姥豆瞬限問片佃揚(yáng)吉曼天賬抄窄丫豫謝鋒尹細(xì)屑酬吮迫腳縛匣節(jié)傾墩哼惺