中藥學(xué)畢業(yè)論文非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究VIP

1、本科畢業(yè)論文非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究二級學(xué)院中藥學(xué)院專 業(yè)中藥學(xué)（中藥現(xiàn)代化技術(shù)方向）班 級2007級（2）班學(xué)生姓名學(xué) 號0706506211指導(dǎo)教師2 0 1 1 年 4 月誠 信 聲 明我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計）是本人在老師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。我承諾，論文（設(shè)計）中的所有內(nèi)容均真實、可信。畢業(yè)論文（設(shè)計）作者（簽名）： 年 月 日目 錄（大綱一級，三號黑體加粗居中）（空1行）摘要-1前言382材料與儀器39

2、2.1xxx392.2xxx393方法（或?qū)嶒灧椒ǎ?03.1xxx403.2xxx404結(jié)果405討論41參考文獻42綜述43致謝44附錄（如沒有圖譜、調(diào)查表等要去掉）45注：關(guān)于論文目錄，我院統(tǒng)一寫到二級目錄，以上是統(tǒng)一格式。(此為實驗論文格式)如非實驗論文，目錄格式也應(yīng)一致，但目錄名稱中“材料與儀器、方法與結(jié)果（或?qū)嶒灧椒ǎ笨蓳Q成相對應(yīng)的內(nèi)容。如“資料與方法、結(jié)果與分析” ； 或“方法、結(jié)果、分析與討論 ”等。請在上交資料時刪除此注。樣本3 非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究摘要：目的 研究非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；方法 采用薄層色譜法對黃芩藥材中黃芩苷及抗感飲中黃芩苷、桔梗和連翹成分進

3、行定性分析，用高效液相色譜法對黃芩藥材中黃芩苷和抗感飲中黃芩苷進行定量分析：色譜柱diamonsil c18柱（200mm4.6mm，5m迪馬公司），預(yù)柱為大連依利特（佳杰）；流動相為甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）；流速1.0ml/min；檢測波長為274nm，柱溫25；進樣量 20l。結(jié)果 采用薄層色譜法鑒別，所得圖譜清晰，可鑒別出黃芩藥材的特征成分及抗感飲中黃芩苷、桔梗、連翹等味藥的特征成分；采用高效液相色譜法測定，黃芩藥材按干燥品計算，含黃芩苷（c21h18o11）計，為10.24%,符合規(guī)定；抗感飲中黃芩苷在8g/ml-48g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（相關(guān)系數(shù)r=0.9998）；經(jīng)

4、測定，3批抗感飲中黃芩苷的含量均符合南方醫(yī)院藥學(xué)部內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；結(jié)論 本方法快速準(zhǔn)確可靠，可作為非標(biāo)準(zhǔn)制劑抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)控方法。關(guān)鍵詞：抗感飲；黃芩苷；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)istudy on quality standards for nonstandard preparation kangganyinabstract: objective the study of standard preparations are kangganyin quality standard . methods tlc method of radix scutellariae medical b

5、aicalin and kangganyin in baicalin, balloonflower and forsythia constituents of qualitative analysis, by hplc of radix scutellariae medical baicalin and kangganyin in baicalin quantitative analysis : diamonsil c18 column chromatography column (200mm4.6mm，5m dima company ), advance in accordance with

6、 the special column for the dalian (jia jie) ; mobile phase for methanol-water - glacial acetic acid (60) in the five: velocity 1.0 ml/min ; for 274nm detected wavelength ; column temperature 25 ; enter the sample weight 20 mu l ; results tlc method to identify, income map clarity, can identify radi

7、x scutellariae crude characteristic ingredients and kangganyin in baicalin, balloonflower, such as gout drug characteristics of forsythia bush component; by hplc, radix scutellariae medicinal materials according to the dry matter computation, including baicalin (c21h18o11) plan, for 10.24%, in confo

8、rmity with the provisions, kangganyin symposium in baicalin in 8 muon g/ml - 48 muon g/ml range insider sexual relationship good (correlation coefficient r = 0.9998); according to the mensuration, three batches anti feeling symposium in baicalin content which conform to the southern hospital medicin

9、e division of internal control quality standards, conclution this method is rapid, accurate and reliable as non-standard preparations are resistant to drink quality standard monitoring method. keywords: kangganyin; baicalin, hplc, tlc,quality standard.sii1前言抗感飲是南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院自產(chǎn)的制劑，是由黃芩、金銀花、連翹、生地、桔梗等多味中藥

10、經(jīng)提取制成的非標(biāo)準(zhǔn)制劑，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，適用于病毒和細(xì)菌感染引起的肺炎、氣管炎、支氣管炎、咽炎，扁桃體炎等上呼吸道感染及感冒，病毒性流感引起的發(fā)熱，咽痛，咳嗽和老年性哮喘等疾病的治療，是抗病毒、抗菌的中成藥。該方中黃芩為君藥，其主要作用為抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗菌解熱等。本課題對抗感飲中的中藥材及其主要成分進行定性、定量試驗，以黃芩苷、黃芩藥材、連翹藥材和桔梗藥材為對照品，采用薄層色譜法，對黃芩藥材及抗感飲中的黃芩苷、連翹和桔梗成分進行定性分析；采用高效液相色譜法對黃芩藥材及抗感飲中的黃芩苷進行定量分析。隨著人類社會的發(fā)展，氣候也發(fā)生了變化，空氣的質(zhì)量也降低，各類疾病也逐漸登上人類的

11、舞臺，人們難免不受其侵犯，如病毒、細(xì)菌感染引起的肺炎、氣管炎、支氣管炎、咽炎，扁桃體炎等上呼吸道感染及感冒，病毒性流感引起的發(fā)熱，咽痛，咳嗽和老年性哮喘等疾病。通過查找和分析文獻得知，類似抗感飲功效的制劑的研究非常熱門，主要包括藥物的療效，制劑中有效成分含量的測定，制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究等等方面?？垢酗嬰m為南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院自制的非標(biāo)準(zhǔn)制劑和只限于院內(nèi)醫(yī)療機構(gòu)使用，但其使用范圍廣及臨床療效顯著，銷量較大，故產(chǎn)量相對也高。自2005年8月，國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的醫(yī)療機構(gòu)制劑注冊管理辦法開始實施，該辦法規(guī)定醫(yī)療機構(gòu)制劑只能在本醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)憑執(zhí)業(yè)醫(yī)師的處方使用。這對于醫(yī)療機構(gòu)制劑來說是個沉重的打擊

12、，但院內(nèi)制劑良好的治療效果，以及相對低廉的價格又讓其具有蓬勃的生命力。所以當(dāng)前的形勢下，確保院內(nèi)制劑效果顯著、質(zhì)量合格就尤為重要?？垢酗嬍悄戏结t(yī)院根據(jù)藥典規(guī)定，結(jié)合自身臨床實踐所配制的一種經(jīng)典藥物，臨床療效顯著。所以對其建立適當(dāng)?shù)臋z測方法，控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全和有效，改善產(chǎn)品的制備工藝具有十分重要的意義。本課題對抗感飲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究是從原料開始跟蹤研究，先對其原料進行檢測，符合中國藥典（2010年版）的相關(guān)規(guī)定者，再投料生產(chǎn)制劑，最后又對該制劑中的主要有效成分進行定性、定量分析，旨在確定在黃芩苷和抗感飲中的有效檢測方法，并制定黃芩苷的檢測標(biāo)準(zhǔn)，為抗感飲中黃芩苷含量檢測提供有效根據(jù)，對有

13、效地保證抗感飲含量檢測的準(zhǔn)確性具有相當(dāng)?shù)囊饬x。2材料與儀器2.1材料2.1.1藥品：黃芩對照藥材，黃芩苷對照品，黃芩素對照品，漢黃芩素對照品，連翹對照藥材，桔梗對照藥材，以上藥品均由中國藥品生物制品鑒定所提供。2.1.2試劑：甲醇、磷酸和冰醋酸是色譜純；甲苯、乙酸乙酯、甲酸、乙醇、氯仿、無水硫酸鈉、10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液等均為分析純；純化水為本院制劑2.2主要儀器996型waters液相色譜儀；empower色譜處理系統(tǒng)；天津奧特賽恩斯at-330柱溫箱；sartorius公司r200d電子天平；超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）； 超純水儀（mill-qplus usa）；半

14、自動點樣儀linomat-5，數(shù)碼相機系統(tǒng)digistore；電熱恒溫水浴鍋dzkw-d-2。3實驗方法3.1黃芩藥材的鑒別 tlc鑒別：取本品藥材粉末1g，加乙酸乙酯-甲醇（3:1）的混合液30ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml是溶解，取上清液作為供試品。另取黃芩對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，黃芩素對照品，漢黃芩素對照品，加甲醇分別制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄b）試驗，吸取上述供試品溶液，對照藥材溶液各2ul及上述三種對照品溶液各1ul，分別點于同一用聚酰胺薄膜

15、上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10:3：1：2）為展開劑，預(yù)飽和30分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示三個相同的暗斑點。3.2黃芩藥材的含量測定 hplc測定：照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄d）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液制備：取60c減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含黃芩

16、苷60ul的溶液，即得。供試品溶液制備：取黃芩粉末約0.3g，精密稱定，加70%乙醇40ml，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100ml容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。 測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，含黃芩苷（c21h18o11）計，不得少于9.0%。3.2抗感飲主要有效成分的鑒別3.2.1黃芩的tlc鑒別：供試品溶液制備：取本品1ml，置10ml容量瓶中，加75%乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。對照品

17、溶液制備：另取黃芩苷對照品，加乙醇制成1ml含0.1ml的溶液。按薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄b）試驗,吸取上述2種溶液各5l，分別點于同一用聚酰胺薄膜上，以36%乙酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%的三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的褐色斑點。3.2.2連翹的tlc鑒別：取本品10ml，加乙酸乙酯充分振搖提取3次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸發(fā)至干，殘渣加1ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取連翹對照藥材0.5g，加甲醇10ml，置水浴上加熱回流20分鐘，濾過，濾液在水浴鍋上濃縮至5ml，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典201

18、0年版一部附錄b）試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸（17：2：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。3.2.3桔梗的tlc鑒別：取本品10ml，加7%硫酸乙醇-水（1：3）混合液20 ml，加熱回流3小時，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水30ml洗滌，棄去洗液，三氯甲烷用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取桔梗對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典20

19、10年版一部附錄b）試驗，吸取上述兩種溶液各10l，分別點于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。3.3抗感飲中黃芩苷的含量測定（照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄d）測定。）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）為流動相；檢測波長為274nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1500。對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使

20、溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含黃芩苷0.1mg）。供試品溶液的制備：精密量取裝量項下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20l，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每支含黃芩按黃芩苷（c21h18o11）計，不得少于81mg。3.4方法學(xué)驗證1）儀器與試藥儀器：996型waters液相色譜儀；empower色譜處理系統(tǒng)；天津奧特賽恩斯at-330柱溫箱；sartorius公司r200d電子天平；超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）； 超純水儀（mill-qplus

21、usa）。試藥：黃芩苷對照品（715-200111）（置五氧化二磷減壓干燥中干燥12小時以上使用，）由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；冰醋酸為色譜純。2）色譜條件 色譜柱diamonsil c18柱（200mm4.6mm，5m迪馬公司），預(yù)柱為大連依利特（佳杰）；流動相為甲醇-水-冰醋酸（60：40：1）；流速1.0ml/min；檢測波長為274nm。柱溫25；進樣量 20l。3）系統(tǒng)適用性試驗 按1）項下進樣對照品溶液，理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1500。4）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱?。ㄖ梦逖趸诇p壓干燥中干燥12小時以上）黃芩苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇

22、適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液，取儲備液5ml置25ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。5） 供試品溶液的制備 精密量取裝量項下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得供試品儲備液，取供試品儲備液1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。6） 線性試驗 精密量取黃芩苷對照品儲備液各2、4、6、8、10和12ml,一一對應(yīng)置于25ml容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲，即得系列對照品溶液，按“1）”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜峰面積

23、。以峰面積的積分值a為縱坐標(biāo)，以黃芩苷的濃度c（g/ml）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程.7）空白試驗 按處方比例，取按本品制備工藝制成的不含黃芩苷藥品的陰性對照樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液，精密吸取10l，注入液相色譜儀。8) 精密度試驗 精密量取黃芩苷對照品溶液20l，按“1）”項下色譜條件重復(fù)進樣6次，測定黃芩苷的吸收面積。 9）穩(wěn)定性試驗 精密量取供試品溶液，分別于0h、4h、8h、16h、24h進樣測定，記錄峰面積。10）加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品1.0ml，分別準(zhǔn)確加入黃芩苷對照品溶液各7.0ml、9.0ml、11.0ml，每個濃度2份，分別置于25m

24、l量瓶中加50%甲醇至刻度，搖勻，超聲。按“1）”項下的色譜條件下進樣，測定峰面積，以回歸方程計算各自的回收率。11）重復(fù)性實驗 取批號為20101101抗感飲口服液，按上述方法制備成6份供試品溶液，并照上述色譜條件平行測定，12） 樣品測定 精密量取供試品溶液，分別測定3個批號的抗感飲的黃芩苷的含量。4 實驗結(jié)果4.1黃芩藥材鑒別的結(jié)果4.2黃芩藥材含量測定的結(jié)果4.2.1 黃芩苷對照品的色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖： 圖1. 黃芩苷對照品a的色譜峰圖2. 黃芩苷對照品b的色譜峰圖3. 黃芩苷對照品c的色譜峰表4-1.黃芩苷對照品的色譜峰結(jié)果 試 樣 保留時間（分鐘） 面積（微伏*秒） 高度（微

25、伏） 含（ug/ml）黃芩苷對照品a 12.937 5501657 131274 60.000黃芩苷對照品b 12.916 5597879 134980 60.000黃芩苷對照品c 12.840 5603925 136188 60.0004.2.2黃芩藥材供試品色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖：圖4.黃芩藥材供試品a的色譜峰圖5.黃芩藥材供試品b的色譜峰表4-2.黃芩藥材供試品的色譜峰結(jié)果試 樣 保留時間 面 積 高 度 含 量（分鐘） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黃芩藥材供試品a 12.833 2598511 57459黃芩藥材供試品b 12794 2560295 592284.2抗感飲主

26、要有效成分鑒別的結(jié)果4.2.1黃芩的tlc鑒別 4.2.2連翹的tlc鑒別4.2.3桔梗的tlc鑒別4.3抗感飲中黃芩苷含量測定的結(jié)果4.3.1 黃芩苷對照品色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖：圖6.黃芩苷對照品1的色譜峰圖7.黃芩苷對照品2的色譜峰圖8.黃芩苷對照品3的色譜峰表4-3.黃芩苷對照品的色譜峰結(jié)果試 樣 保留時間 面 積 高 度 含 量 （分鐘） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黃芩苷對照品1 5.314 9065792 687986 101.000黃芩苷對照品2 5.272 8939025 695063 101.000黃芩苷對照品3 5.276 8975515 703097 101

27、.0004.3.2抗感飲中黃芩苷色譜峰及色譜峰結(jié)果如下圖：圖9.抗感飲供試品中黃芩苷1的色譜峰圖10.抗感飲供試品中黃芩苷2的色譜峰表4-4. 抗感飲供試品中黃芩苷的色譜峰結(jié)果試 樣 保留時間 面 積 高 度 含 量 （分鐘） （微伏*秒） （微伏） （ug/ml）黃芩苷供試品1 5.216 16367832 1341897 101.000黃芩苷供試品2 5.216 16428816 1333989 101.0004.4方法學(xué)驗證 4.4.1系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果下圖：圖11. 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品4.4.2線性試驗以峰面積的積分值a為縱坐標(biāo)，以黃芩苷的濃度c（g/ml）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程，為

28、：y=75449x+2619.2，r=0.9998結(jié)果表明，黃芩苷在8.552g/ml51.312g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。圖12 線性 1圖13 線性 2圖14 線性 3圖15 線性 4圖16 線性 5表4-5抗感飲線性曲線（n=6）4.4.3精密度試驗 精密量取黃芩苷對照品溶液20l，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進樣6次，測定黃芩苷的吸收面積，計算其rsd為1.51%，符合要求，表明精密度良好。圖17 精密度 1圖18精密度 2圖19 精密度 3圖20 精密度 4圖21 精密度 5圖22 精密度 64.4.4穩(wěn)定性試驗 精密量取供試品溶液，分別于0h、4h、8h、16h、24h進樣測定，

29、記錄峰面積，結(jié)果黃芩苷面積的rsd為 2.49%，表明溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。圖23 穩(wěn)定性1圖24穩(wěn)定性2圖25 穩(wěn)定性3圖26 穩(wěn)定性4圖27 穩(wěn)定性54.4.5加樣回收率試驗圖 28 加樣回收試驗 1圖 29 加樣回收試驗 2圖 30 加樣回收試驗 3圖 31 加樣回收試驗 4圖 32 加樣回收試驗 5圖 33加樣回收試驗6表4-6.黃芩苷的加樣回收率實驗（n=6）樣品量/g加入量/g測得量/g回收率/%/%rsd/%16.2149.66176.03106.13106.401.5516.2149.66176.19106.2316.2192.42221.28106.5816.2192.4

30、2224.31107.5216.2235.18271.09108.3816.2235.18259.67103.534.4.6重復(fù)性實驗據(jù)試驗所得數(shù)據(jù)（下圖）計算知黃芩苷含量的rsd為1.78%（n6），表明方法重現(xiàn)性良好。圖 34 重復(fù)性 1圖 35 重復(fù)性 2圖 36 重復(fù)性 3圖 37 重復(fù)性 4圖 38 重復(fù)性5圖 39 重復(fù)性 644.7樣品測定精密量取供試品溶液，分別測定3個批號的抗感飲的黃芩苷的含量。結(jié)果表4-7表4-7.樣品測定結(jié)果批號 黃芩苷 rsd%20101101 8.315mg/ml20101101 8.114mg/ml 1.22%20101101 8.218mg/ml5

31、討論 參考文獻引用，序號在右上角標(biāo)注5.1影響產(chǎn)物的條件分析5.1.1反應(yīng)介質(zhì)堿性強度的影響本反應(yīng)類似willamson法制備醚的反應(yīng)，即殼聚糖分子中羥基首先要和氫氧化鈉鍵合，形成活性中心（chitosan-o-na+）后和氯乙酸反應(yīng)8, 10-14。因此堿化步驟是整個反應(yīng)的關(guān)鍵。堿化程度越高，約有利于反應(yīng)的進行。實驗中，強堿條件下，同時提高氯乙酸的量有利于提高取代度。樣本9參考文獻1 高懷生，黃是是，張世達，等. 殼聚糖的結(jié)構(gòu)分析j. 天津化工，1996，14(2): 21-22.2 x.-g. chen, h.-j. park. chemical characteristics of o-

32、carboxymethyl chitosans related to the preparation conditions j. cacinogtnesis, 1996,17(2) :135-140.樣本103 陳文娟.姜黃素對惡性腫瘤細(xì)胞的調(diào)控j. 臨床血液學(xué)雜志，1999， 12(5)：238-241綜 述淺談黃芩苷含量測定方法研究進展前言 黃芩( s cutel l ari a baicalensis georgi) 為唇形科黃芩屬多年生草本植物黃芩的干燥根,又名山茶根、爛心草、黃金茶、子芩、條芩、枯芩等，是我國著名的傳統(tǒng)中藥，始記于神農(nóng)本草經(jīng)，列為中品。主產(chǎn)于河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧等

33、地區(qū)，以山西產(chǎn)量最大，河北承德質(zhì)量最好。其性寒、味苦,歸肺、膽、脾、大腸和小腸經(jīng),具有清熱燥濕,涼血安胎,止血,瀉火解毒等功效,用于治療發(fā)熱煩渴、肺熱咳嗽、瀉痢熱淋、濕熱黃疸、胎動不安和癰腫瘡毒等癥。黃芩的有效成分是黃酮類化合物，迄今分離出近約40種黃酮，黃酮類成分是其發(fā)揮藥理作用的基礎(chǔ)，其中黃芩苷（c21h12o11，baicalimai）、黃芩素(baacalien)、漢黃芩素(wogonin)、黃芩苷元(wogonoside)是最主要的活性成分，其中以黃芩苷的有效成分最強，是黃芩及其制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分，黃芩苷具有抗微生物、抗變態(tài)反應(yīng)、降壓和鎮(zhèn)靜、利膽、保肝和解痙等作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)

34、研究表明黃芩具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、保護神經(jīng)元細(xì)胞、抑制醛糖還原酶活性、阻止鈣離子通道及細(xì)胞凋亡等作用。黃芩苷已受到國內(nèi)外醫(yī)藥界越來越多的關(guān)注,需求量也隨之劇增, 是一種很有發(fā)展前途的抗氧化、抗腫瘤、抗病毒的生物化學(xué)成分1-2 。測定黃芩苷含量常在中藥制劑中作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一。目前發(fā)展的黃芩苷測定方法有分光光度法、薄層掃描法、液相色譜法、紅外光譜分析法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效毛細(xì)管電泳法等7-9。1.分光光度法( spectrophotometry) 分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析的方法。常用

35、的波長范圍為: 200400 nm的紫外光區(qū); 400760nm的可見光區(qū); 2.525 um (按波數(shù)計為4000cm-1400cm-1 )的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計) 、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好3。應(yīng)用于黃芩苷測定得分光光度法主要是紫外分光光度法。1.1紫外分光光度法(ultraviolet spectrophotometry)紫外分光光度法是利用分子結(jié)構(gòu)具有雙鍵、共軛雙鍵、苯環(huán)、芳香稠環(huán)、芳香雜環(huán)或共軛烯烴的物在一定波長(220350 nm)的范圍內(nèi)的吸收度來測定該物質(zhì)含量的一類光學(xué)方法，其靈敏度高、操作簡單、

36、儀器要求不高，易于普及。黃芩苷具有不飽和結(jié)構(gòu)，對紫外光具有選擇性吸收，可用該法測定含量。對于黃芩苷的復(fù)方制劑,多用色譜分離法去除干擾后再用紫外分光光度法進行含量分析。馮敏等4采用紫外分光光度法測定了清熱口服液中黃芩苷含量。樣品經(jīng)過濃鹽酸(hcl)調(diào)節(jié)ph值,沉淀加氯仿提取, 75%乙醇洗脫沉淀,得到黃芩苷,在= 278100 nm波長處測定,得到良好線性關(guān)系。鄧順甫5采用三波長分光光度法測定清熱解毒合劑中黃芩苷含量，3，黃芩苷在3.96849.60ug/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9983）；方法平均回收率為9896%，rsd=1.14.2. 薄層掃描法薄層掃描法主要利用薄層板將待測藥

37、物與其他干擾藥物分開,然后根據(jù)展開后薄層板上確定待測組分的斑點位置,用薄層掃描儀測定斑點的峰面積或吸收度來定量，是2000版藥典黃芩苷的含量測定方法,方法較紫外分光光度法簡便,避免了人手刮取斑點洗脫的缺點,但該法精密度較低,而且回收率較差，但其也有獨特的優(yōu)點,如儀器價廉,薄層層析的流動相選擇余地較hplc大得多,每次測定更新薄板,不會造成柱效下降等。薛滿，閔春艷6采用薄層掃描法測定金蟬口服液中黃芩苷的含量，黃芩苷點樣量(cr)在0.217-1.083ug/ml范圍內(nèi)與峰面積響應(yīng)值（a )呈良好的線性關(guān)系。3.液相色譜法3.1高效液相色譜法（hplc）高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相

38、泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進入檢測器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。高效液相色譜法具有靈敏度、特異性高,分離效能高，分析速度快,高度自動化,進樣前樣品處理簡單,樣品易回收,樣品經(jīng)色譜柱可不被破等優(yōu)點,是目前黃芩苷定量分析方法中較為優(yōu)越的方法,也是質(zhì)量控制中較常用的方法。但hplc存在分析時間長,分離效率低,色譜柱易污染難清洗的缺點。高效液相色譜法最常用的hplc多應(yīng)用紫外檢測器: c18色譜柱,流動相甲醇-水-磷酸,檢測波長270280 nm。測得線性關(guān)系、r、rsd、平均回收率、最低檢測度等均

39、符合標(biāo)準(zhǔn)，是黃芩苷含量測定的藥典測定方法。李美月等10采用高效液相色譜法測定小兒清肺化痰口服液中黃芩苷的含量，黃芩苷在0.1211 2.4220ug 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)r=0.9997, 平均回收率為98.4%,rsd=0.85%。劉堅華11采用hplc-dad法測定肺力咳合劑中黃芩苷的含量，黃芩苷進樣量在0.090.72ug范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(r=0.9995);平均回收率為99.8%(rsd=0.77%（n=6)。3.2 超高效液相色譜法（uplc）超高效液相色譜法對原高效液相色譜方法進行轉(zhuǎn)換并優(yōu)化液相色譜方法。該方法加快了分析速度，提高了分析效率，減少了有機溶劑

40、的使用，并且得到了更高的分析靈敏度。李強，巴小翠12采用uplc法測定黃芩藥材中黃芩苷的含量，芩苷的線性范圍為29.86238.85ng(r=0.9999)；平均回收率(n=6)為101.2，rsd為1.8，1個分析流程大約需要3min。李強等13采用uplc法測定雙黃連口服液中黃芩苷的含量，黃芩苷的線性范圍為01190358ug(r=09992)，平均回收率(n=6)為101.2，rsd為18；1個分析流程大約需要3min。3.3 高分離度快速液相色譜法(rrlc)rrlc目前廣泛運用于中藥化學(xué)成分，中藥制劑，中藥復(fù)方成分的研究分析中，具有分析時間短，柱效高等優(yōu)點，為復(fù)雜體系的分離分析提供了

41、良好的平臺. 爾西丁買買提等14采用高分離度快速液相色譜法測定牛黃解毒片中黃芩苷的含量，黃芩苷在0.15一1.35ug(r=09999)范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，加樣回收率為100.41%，rsd= 1.42%。3.4 反相高效液相色譜法(rphplc) rp-hplc法是在hplc法的基礎(chǔ)上改變固定相和流動相的極性的液相色譜法。吳佳等15采用反相高效液相色譜法測定當(dāng)歸拈痛丸中黃芩苷含量黃芩苷選樣量在0.060841.8252 ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=l.00，平均加樣回收率為97.0% ，rsd為1.1% (n=9)。李卓、李湘斌16采用反相hplc法測定咽喉炎合劑中黃

42、芩苷的含量，黃芩苷進樣量在o.141.20 ug 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r =0.99998)；平均加樣回收率為99.78%(rsd=055%，n=6)。林啟凰等17采用反相流動注射化學(xué)發(fā)光法測定黃芩苷，在優(yōu)化的條件下，黃芩苷濃度在1.010-81.010-7和3.010-74.0 10-6 moll范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光抑制強度i，呈良好的線性關(guān)系，檢出限為1.0 x 109 moll，對30107 moll的黃芩苷進行平行測定lo次，得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(rsd)為1.7。4. 紅外光譜分析法紅外光譜分析法(n ir)首先通過樣品測定校正集的光譜、組成或性質(zhì)數(shù)據(jù)(組成或性質(zhì)數(shù)據(jù)需通過其它認(rèn)可的

43、標(biāo)準(zhǔn)方法測定) ,采用合適的化學(xué)計量學(xué)方法建立校正模型,再通過建立的校正模型與未知樣品進行比較,實現(xiàn)定性或定量分析，可使用傅里葉變換紅外光譜儀或色散型紅外分光光度計。用聚苯乙烯薄膜（厚度約為0.04mm）校正儀器，繪制其光譜圖，用3027cm-1，2851cm-1，1601cm-1，1028cm-1，907cm-1 處的吸收峰對儀器的波數(shù)進行校正。該法具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確度高、無損、原位與無消耗等特點。王東，王玲18采用近紅外光譜法測定黃芩藥材中黃芩苷的含量，利用 3o個樣品經(jīng)內(nèi)部交叉驗證建立預(yù)測模型，內(nèi)部交叉驗證決定系數(shù)r2=86.24，內(nèi)部交叉驗證均方差rmsecv=0.8220。用9

44、個樣品進行外部驗證，外部驗證預(yù)測均方差rmsep=0.3667，預(yù)測值與真實值的相關(guān)系數(shù)為0.9833。預(yù)測值的平均回收率為99.37。楊欣等19對黃芩近紅外漫反射光譜法對定量模型的建立及應(yīng)用進行研究，所建立的定量模型，其內(nèi)部交叉驗證相關(guān)系數(shù)r一0971 2，內(nèi)部交叉驗證的均方差(rmsecv)為0.677；外部驗證相關(guān)系數(shù)r一0.96l8，外部驗證的均方差(rmsep)為0.396。5.色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法質(zhì)譜法是使待測化合物產(chǎn)生氣態(tài)離子，再按質(zhì)荷比（m/z）將離子分離、檢測的分析方法，檢測限可達10-1510-12 mol 數(shù)量級。質(zhì)譜法可提供分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息，定量測定可采用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法

45、，是分析純有機化合物的最強有力的分析工具。色譜法是根據(jù)不同組分之間性質(zhì)如(溶解度、吸附能力、揮發(fā)度等)的不同,使樣品經(jīng)過色譜柱后差速分離而分開的方法。ms作為質(zhì)譜檢測器，其靈敏度優(yōu)于紫外分光光度法，質(zhì)譜在檢出峰的同時還能給出分子量和結(jié)構(gòu)信息,使檢測具二維性。但ms不適合分析復(fù)雜的混合物。經(jīng)典的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法包括氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(gc/ms)、液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(lc/ms)、超臨界流體色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(sfc/ms)、毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用(ce/ms)。焦燕等20采用lc - ms/ms法同時測定不同產(chǎn)地半枝蓮中野黃芩苷和芹菜素含量，野黃芩苷濃度在2167217 mg/l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，

46、含量范圍為0103%0139%，平均回收率( n = 5)為9911%，rsd為1.4%。6. 高效毛細(xì)管電泳法（hpce）高效毛細(xì)管電泳是80年代發(fā)展起來的一類分離分析方法，將經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合，具有高效、高速、微量、操作簡單和低耗的優(yōu)點，在藥物分析方面逐漸得到重視，有了較廣泛的應(yīng)用，但檢出度和精密度均遜色于hplc。楊慧文等21采用毛細(xì)管電泳法測定梔子金花丸中黃芩苷的含量，黃芩苷質(zhì)量濃度在7.552.5.ug/ml范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系(r=0.9996)，黃芩苷平均回收率為96.7，rsd值為1.62(n=6)。林凌等22采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測定黃芩中黃芩苷的含量，黃芩苷

47、峰形良好，同時分離出多個峰有待進一步研究。時存義等23的黃芩的毛細(xì)管電泳指紋圖譜和黃芩苷含量測定研究，以萘普生峰為參照物峰，確定了8個共有峰，l0個產(chǎn)地黃芩的cefp與黃芩苷的cefp具有良好相似性，含量測定結(jié)果表明不同產(chǎn)地黃芩中黃芩苷含量有明顯差異。結(jié)束語 隨著藥動學(xué)的發(fā)展和完善，以及聯(lián)用技術(shù)、新方法的出現(xiàn)，黃芩苷的含量測定不斷朝著準(zhǔn)確、方便、快速、低成本、低污染的方向發(fā)展。應(yīng)用于黃芩苷含量測定的各項方法技術(shù)都有其獨特的優(yōu)點，但由于hplc法技術(shù)已很成熟在測定黃芩苷上得到普及，是目前黃芩苷定量分析方法中較為優(yōu)越的方法，也是質(zhì)量控制中較常用的方法。其中hpce法因其有獨特的優(yōu)勢，其發(fā)展?jié)摿Ψ浅４?，將來為我們制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分析化學(xué)成分等提供更好的平臺。 參考文獻1.李艷榮，潘海峰，魏紅，李守拙. 中藥材黃芩的研究近況. 承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報. vol.26 no.4 2009.418-