醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗試驗室工作導(dǎo)則

1、附件醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則一、臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)計（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)計原則。 原則上 臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域： 試劑儲存和準(zhǔn) 備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這 4 個區(qū)域 在物理空間上必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間 上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空 氣的直接相通。 根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并 。例 如使用實時熒光 PCR 儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并； 采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析 儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū) 的功能是：1. 試劑儲存和準(zhǔn)

2、備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和 擴增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存 和準(zhǔn)備。2. 標(biāo)本制備區(qū)：核酸（ RNA 、DNA ）提取、貯存及其加 入至擴增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安 全二級實驗室防護設(shè)備、個人防護和操作規(guī)范的要求。3. 擴增區(qū)： cDNA 合成、 DNA 擴增及檢測。4. 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的進一步分析測定，如雜 交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。（二）臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向。 臨床基因 擴增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo) 本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，防止擴增產(chǎn)物順 空氣氣流進入擴增前的區(qū)域?？砂凑諒脑?/p>

3、劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) 標(biāo)本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減 的方式進行?？赏ㄟ^安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝置或其他可行 的方式實現(xiàn)。（三）工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)。1. 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)。（1）28和-20 以下冰箱。（2）混勻器。（3）微量加樣器（覆蓋 0.2-1000 l ）。（4）可移動紫外燈（近工作臺面）。（ 5 ）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加 樣器吸頭。（ 6）專用工作服和工作鞋 （套）。（7）專用辦公用品。2. 標(biāo)本制備區(qū)。（1）2-8 冰箱、 -20 或-80 冰箱。（ 2 ）高速離心機。（3）混勻器。（ 4 ）水浴箱或加熱模塊。（5）微量加樣器（覆蓋 0.2-100

4、0 l ）。（ 6）可移動紫外燈（近工作臺面）。（7）生物安全柜。（ 8 ）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加 樣器吸頭（帶濾芯）。（ 9）專用工作服和工作鞋 （套）。（10 ）專用辦公用品。（11 ）如需處理大分子 DNA ，應(yīng)當(dāng)具有超聲波水浴儀。3. 擴增區(qū)。（1）核酸擴增儀。（ 2）微量加樣器 （覆蓋 0.2-1000 l ），（視情況定） （3）可移動紫外燈（近工作臺面）。（ 4 ）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加 樣器吸頭（帶濾芯）。（5）專用工作服和工作鞋。（6）專用辦公用品。4. 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。 視檢驗方法不同而定，基本配置如下： （1）微量加樣器（覆蓋 0.

5、2-1000 l ）。（2）可移動紫外燈（近工作臺面）。（ 3 ）消耗品：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）。（4）專用工作服和工作鞋。（5）專用辦公用品。 上述各區(qū)域儀器設(shè)備配備為基本配備，實驗室應(yīng)當(dāng)根據(jù) 自己使用的擴增檢測技術(shù)或試劑的特點，對儀器設(shè)備進行必 要的增減。二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則（一）進入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進行，即試 劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴增區(qū) 擴增產(chǎn)物分析 區(qū)。（二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的 設(shè)備、物品不得混用。（三）不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏 色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。（四）實驗室的清

6、潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備 區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域 應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。（五）工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū) 的實驗臺表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒 清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。由于紫外 照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動紫外燈（ 254nm 波長），在工作完成后調(diào)至實驗臺上60 90cm 內(nèi)照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對 （bp ），對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須 延長照射時間，最好是照射過夜。（六）實驗室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有 操作符合 實驗

7、室生物安全通用要求 （GB19489-2008 ）三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項（一）試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消 耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過擴 增檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該 區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。（二）標(biāo)本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可 能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條 件，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的 交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng) 管。對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開 蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。（三）擴增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少 在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不 得在此區(qū)域打開。（四）擴增產(chǎn)物分析區(qū)。核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種 多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素 標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記） 、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、 聚丙烯酰胺凝膠電泳、 Southern 轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì) 譜分析等。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須注 意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用 PCR-ELISA 方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板機洗板， 廢液必須收集至 1 mol/L HCl 中，并且不能在實驗室內(nèi)傾 倒，而應(yīng)