外科學(泌尿外科)專業(yè)畢業(yè)論文[精品論文]sdf-1cxcr4在腎癌細胞核定位序列中的初步研究

1、外科學(泌尿外科)專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 sdf-1/cxcr4在腎癌細胞核定位序列中的初步研究關鍵詞：腎癌 特異性受體 亞細胞定位 核定位序列摘要：本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展

2、、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移

3、的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體

4、轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分

5、子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr

6、4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。正文內(nèi)容 本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之

7、一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)

8、移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t

9、載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr

10、4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1

11、刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物

12、主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr

13、4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)

14、移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene h

15、d介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變

16、。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxc

17、r4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進

18、一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小

19、時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以e

20、gfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(151

21、0bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498

22、細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達

23、產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda

24、)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4

25、結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp

26、-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egf

27、p-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入

28、sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位

29、序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-

30、1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法：

31、應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因

32、子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯

33、微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞2

34、4小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)

35、現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌

36、原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將p

37、egfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結

38、果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a4

39、98細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結

40、論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復

41、和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxc

42、r4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長e

43、gfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort p

44、rediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共

45、聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(ren

46、al cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxc

47、r4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增

48、相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxcr4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765

49、be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng

50、/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr

51、4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析rprk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，

52、引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sdf-1處理24小時后，共聚焦顯微鏡下觀察egfp-cxcr4重組表達載體轉(zhuǎn)染腎透明細胞癌a498細胞后表達產(chǎn)物由細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，并研究腎癌病理標本發(fā)現(xiàn)：腎癌原發(fā)灶中cxcr4未出現(xiàn)核定位，而在腎癌轉(zhuǎn)移灶中出現(xiàn)了cxcr4的核定位，我們推測sdf-1與cxcr4結合后，cxcr4向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，并直接

53、或間接傳遞了某些信號，cxcr4在細胞核內(nèi)的信號通路可能與腎癌轉(zhuǎn)移相關.本實驗擬構建不同長度區(qū)段的cxcr4重組表達載體初步尋找cxcr4可能的核定位序列，從而為探索抑制腎癌轉(zhuǎn)移的可能靶標奠定基礎. 方法： 應用核定位分析軟件結合實驗，尋找cxcr4可能的核定位序列，合成帶有hind和bgl酶切位點的引物，以egfp-cxcr4為模板，運用pcr擴增相應的目的片段，并將目的片段連接至pmd19-t載體中，將重組t載質(zhì)粒用hind和bgl雙酶切，同時將pegfp-n1用hind和bamh雙酶切，由于bgl與bamh粘性末端相同，將酶切后目的片段與pegfp-n1連接，獲得三個不同長度區(qū)段的cxc

54、r4與綠色熒光蛋白pegfp-n1重組表達載體.fugene hd介導轉(zhuǎn)染腎癌a498細胞，野生型全長egfp-cxcr4(加sdf-1及不加sdf-1)及pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染24h加入sdf-1刺激因子刺激24h后共聚焦觀察，重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765be)轉(zhuǎn)染24小時加sdf-1刺激因子24h后共聚焦觀察cxcr4不同區(qū)段重組表達載體在細胞內(nèi)定位. 結果： 1、雙酶切和測序結果表明cxcr4不同區(qū)段重組表達載體egfp-cxcr4(1267bp)、egfp-cxcr4(1510bp)、egfp

55、-cxcr4(1765bp)構建成功，無堿基突變及讀碼框架的改變。 2、生物信息學分析軟件psort prediction發(fā)現(xiàn)第146至149氨基酸殘基rprk可能是cxcr4分子的核定位序列. 3、共聚焦顯微鏡觀察cxcr4及pegfp-n1空載體在a498細胞內(nèi)定位情況： pegfp-n1空載體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時其表達產(chǎn)物呈細胞均勻分布，未經(jīng)sdf-1刺激野生全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞48h后其表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，野生型全長egfp-cxcr4轉(zhuǎn)染a498細胞24小時后加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子2

56、4小時其表達產(chǎn)物呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)，egfp-cxcr4在加入sdf-1出現(xiàn)核定位. 4、共聚焦顯微鏡觀察不同長度cxcr4缺失體在a498細胞內(nèi)定位情況： cxcr4不同缺失體轉(zhuǎn)染a498細胞24小時加入sdf-1(200ng/ml)刺激因子24小時后觀察，egfp-cxcr4(1267bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞質(zhì)分布，egfp-cxcr4(1510bp)、egfp-cxcr4(1765bp)表達產(chǎn)物主要呈細胞核聚集，部分定位于細胞質(zhì)， 結論： 1、cxcr4的第90170位氨基酸殘基含有核定位序列，其影響在細胞內(nèi)分布，為進一步精確定位核定位序列提供理論基礎. 2、生物信息學分析r

57、prk有可能是cxcr4的核定位序列，但生物信息學的準確性有待進一步實驗來驗證。本文目的： 腎癌(renal cell carcinoma，rcc)是常見的泌尿系腫瘤之一，占成人惡性腫瘤的2-3.近年來研究發(fā)現(xiàn)腎癌是多基因相關腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制尚不完全清楚.趨化因子是一類小分子量(814 kda)蛋白質(zhì)，它可以同源g蛋白偶聯(lián)受體結合，引發(fā)細胞應答，研究發(fā)現(xiàn)趨化因子sdf-1結合其特異性受體cxcr4，不僅在宿主對病原因子的感染、組織修復和炎癥反應，免疫細胞的發(fā)育、分化中起了重要作用，而且與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、趨化、遷移密切相關.sdf-1/cxcr4在腎細胞癌中的相互作用尚不完全清楚，在前期進行的實驗中，我們首次發(fā)現(xiàn)經(jīng)sd