人褪黑素(melatonin)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

1、人褪黑素(melato nin )ELISA 試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中褪黑素(melatonin)的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人褪黑素(melat onin)水平。用純化的人褪黑素(melatonin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入褪黑素(melatonin)，再與HRP標(biāo)記的褪黑素 (melatonin)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物， 經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的褪黑素(mel

2、atonin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人褪黑素(melatonin)濃度。試劑盒組成試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份圭寸板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1X 481X 962-8 C保存標(biāo)準(zhǔn)品：54n g/L0.5ml X 1 瓶0.5ml X 1 瓶2-8 C保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml X 1 瓶1.5ml X 1 瓶2-8 C保存酶標(biāo)試劑3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存樣品稀釋液3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存顯色劑A液3 ml X 1 瓶6 ml X

3、 1 瓶2-8 C保存顯色劑B液3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存終止液3ml X 1 瓶6ml X 1 瓶2-8 C保存濃縮洗滌液(20ml X 20 倍)X 1 瓶(20ml X 30 倍)X 1 瓶2-8 C保存樣本處理及要求：1血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)份)。仔細(xì)收集上 清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次 離心。3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離

4、心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)份)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS( PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS, PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8C的溫度。

5、加入一定量的PBS （ PH7.4）,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待 檢測(cè)，其余冷凍備用。6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 -20 C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 .7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100 M，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 d，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 d分別加到第三孔和第四孔

6、， 再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 d,混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50 d棄掉，再各取50 d分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50 d分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 d，混勻后從第七、第八孔中分別取50 d加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 d，混勻后從第九第十孔中各取50 d棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50 d,濃度分別為 36 ng/L , 24 ng/L , 12 ng/L , 6 ng/L , 3 ng/L ）。2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)

7、照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 d,然后再加待測(cè)樣品10 d （樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置 37 C溫育30分鐘。4. 配液：將30 （48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 （48T的20倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50 d，空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 d，

8、再加入顯色劑 B50 d，輕輕震蕩混勻，37 C避光顯色 15分鐘.10. 終止：每孔加終止液 50卩,1終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請(qǐng)每次測(cè)

9、定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（Xn X 5）。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物請(qǐng)避光保存。7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)&所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10. 如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，0D值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的0D值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與

10、 0D值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的0D值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。春天（此圖僅供參考）試劑盒性能：1樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和11%檢測(cè)范圍：1 n g/L -40 ng/L保存條件及有效期：1.試劑盒保存：;2-8Co2 有效期：6個(gè)月依著風(fēng)的眼眸,的風(fēng)是有靈性的, 我看到了那一株株桃花讀信的倩影，在桃林深處，紫色的青藤爬滿那個(gè)小屋。我的小城，桃花已然開成海，像是一場(chǎng)粉色的春夢(mèng)。是否，可以赴一場(chǎng)最美的相逢，如是，便不負(fù)曾經(jīng)許下的約 定。守住心底最美風(fēng)景，是一種風(fēng)度，一種期望。讓心，隨

11、花兒輕舞，讓夢(mèng)，隨蝶兒翩躚。等一縷柔風(fēng)載滿詩(shī)意，落滿我的小院，好想，牽著你的手走在花開的路上，臨摹又一個(gè)春的相遇，陌上綠色蔓延，讓深情的詩(shī)句落在眉彎，打開靈魂的心門，寫盡情意綿綿。春雨如絲， 暖了一季寒涼露出溫暖，碧水映藍(lán)天，云朵兒似乎摸到嫩草尖尖?；ㄏ闶铮迪阌?。我們微笑著，不說(shuō)話，就十分美好。生命里，總會(huì)有一些人，漸行漸遠(yuǎn)，偶爾想起，卻只是停留在文字里，那一抹淡淡的回憶。唯有春天，總那么詩(shī)意明亮，始終暈染著眉心，讓澀澀的往事隨風(fēng)，讓一些溫暖的記憶溫潤(rùn)著 心房。珍惜眼前的幸福，緊握手中的暖意，面向青山綠水，一路微笑，一路行走情暖山水間，盈一份詩(shī)意于心田，以云的飄逸輕盈過(guò)往，以花的姿態(tài)擁馨

12、香滿懷，以文字的杯盞邀約一曲細(xì)水長(zhǎng)流。煮一壺春色，與時(shí)光對(duì)語(yǔ)。窗前，柳枝兒發(fā)芽，玉蘭含苞，時(shí)光一直繞指馨香。心念如這徐徐春風(fēng)，蕩漾成一片流云。春落人間，一種別樣的景致美了心境，所有的疲憊與憂愁也隨風(fēng)而 去，微笑著面對(duì)生活，用內(nèi)心的那份熱情，那份純真來(lái)經(jīng)營(yíng)生活，來(lái)創(chuàng)造幸福，何嘗不是一種快樂(lè)？我的流年，風(fēng)過(guò)，紅塵入畫；雨落，纏綿入心。行走在春天里，眼里滿是明麗與清澈，一樹一樹的花開，細(xì)碎而芬芳；一片一片的綠地，靜美而清新。嗅著陽(yáng)光的味道，把自己置身于大自然中，真好！只要心足夠明媚，縱然有小小的 陰霾也無(wú)妨。我們一路走來(lái)，沿途總會(huì)有美麗的風(fēng)景。于喧囂紅塵中，守著心靈的一方山水。不亂于心，不困于情，不畏將來(lái)，不念過(guò)往。春水初生，耐人尋味。春雨如絲，絲如媚，綿綿的不著一點(diǎn)兒聲息。踏春而去，不知是哪一處的紅塵山水在心間已布滿了雅致，心如花開，一朵嫻雅的光陰，柔軟著眼角的笑意，置身于 安暖的春天，一抹淺喜，一懷深愛。一顆心，便在另一顆心的相隨里靜好。春光無(wú)限